由黑顶柄锈菌(Puccinia melanocephala H.&***.)引起的甘蔗褐锈病在多数种植甘蔗的国家或地区均有发生,可以引起感病品种产量损失10%～40%。该病害其早期症状与甘蔗其他叶斑病症状难以区分,尤其是与黄锈病早期很难辨别。因此,建立其病原菌的快速检测技术,对于病害监测与防控具有十分重要的意义。迄今,还未见该病菌的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测体系的报道。为此,本研究通过对甘蔗褐锈病菌ITS序列与其他属或种同源性ITS序列作多重比较,获得甘蔗褐锈病菌ITS序列多态性丰富区域。利用primer explorer 4.0软件(http://***/elamp4.0.0)于多态性丰富区共设计了5套引物,经过筛选获得一套对该病原菌具有特异性的LAMP引物。并以此引物建立了LAMP检测体系。该反应体系经63℃反应1h后,在每个反应体系中加入0.1μL SYBR Green I,通过肉眼观察待测样品反应液颜色变化判定结果。特异性分析结果表明,该检测体系仅能从甘蔗褐锈病菌的DNA中检测出条带,而从其他供试菌株DNA中不能检测出任何条带。利用此方法检测甘蔗褐锈病菌基因组DNA最低检测限为1pg,比普通PCR检测方法的灵敏度高100倍。本研究中所建立的检测体系为甘蔗褐锈病菌的早期诊断、快速检测提供了又一检测方法。
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