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中国植物保护学会2018年学术年会暨植保科技奖颁奖大会

作者：王桂花吴伟怀汪涵郑金龙黄兴贺春萍习金根梁艳琼李锐易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南大学热带农林学院

利用植原体16S rRNA基因的通用引物R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2对剑麻紫色卷叶病感病植株上的新菠萝灰粉蚧总DNA进行巢式PCR扩增,得到了约1.2kb的特异性片段。将扩增到的片段克隆后测序,获得序列与来自剑麻紫色卷叶病病株植原体进行比... 详细信息

利用植原体16S rRNA基因的通用引物R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2对剑麻紫色卷叶病感病植株上的新菠萝灰粉蚧总DNA进行巢式PCR扩增,得到了约1.2kb的特异性片段。将扩增到的片段克隆后测序,获得序列与来自剑麻紫色卷叶病病株植原体进行比对分析,以及进行一致性和种类鉴定。结果表明,该片段长1 246bp,与来自剑麻紫色卷叶病病株植原体序列相似性达99%,在系统发育树上与翠菊黄化组(Candidatus Phytoplasma asteris)成员聚集在一起,与该组成员同源性均在99%以上。相似性系数和RFLP分析表明,该植原体与来自剑麻紫色卷叶病病株植原体均属于16SrⅠ-B亚组。

关键词：剑麻新菠萝灰粉蚧植原体

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枯草芽胞杆菌Czk1对天然橡胶的促生作用研究

枯草芽胞杆菌Czk1对天然橡胶的促生作用研究

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中国植物保护学会2018年学术年会暨植保科技奖颁奖大会

作者：贺春萍唐文李锐梁艳琼吴伟怀习金根郑金龙黄兴易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南大学热带农林学院

枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)Czk1是一株对橡胶病害具有良好防治效果的生防菌株。为了明确其对天然橡胶的促生作用,本研究通过室内盆栽试验研究了生防菌Czk1发酵上清液对天然橡胶幼苗生长的影响;测定了喷施Czk1菌液后天然橡胶体内... 详细信息

枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)Czk1是一株对橡胶病害具有良好防治效果的生防菌株。为了明确其对天然橡胶的促生作用,本研究通过室内盆栽试验研究了生防菌Czk1发酵上清液对天然橡胶幼苗生长的影响;测定了喷施Czk1菌液后天然橡胶体内叶绿素以及丙二酫(MDA)的变化。试验结果表明,枯草芽胞杆菌Czk1对天然橡胶幼苗的生长具有明显的促生作用,并能够显著提高幼苗叶绿素含量。使用生防菌Czk1发酵液1×10～8CFU/ml处理的橡胶幼苗株高、叶片数、叶鲜重、饱和重及叶干重等生物量均显著提高,相对增长率分别为44.91%、15.03%、55.66%、52.38%和78.34%,而相对含水量降低6.84%,但差异不显著;Czk1发酵液处理后橡胶幼苗叶片中叶绿素a和叶绿素b的含量显著提高,分别提高了43.76%和42.75%,而MDA含量略微下降(2.17%),无显著差异。本研究结果证实了枯草芽胞杆菌生防菌株Czk1能够增强植株的光合作用,对天然橡胶具有显著的促生作用。

关键词：枯草芽胞杆菌促生作用天然橡胶叶绿素

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橡胶树胶孢炭疽菌P型ATP酶基因CgATPase 01的敲除及表型分析

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热带作物学报 2017年第5期38卷 903-909页

作者：刘先宝李博勋孙懂懂时涛黄贵修中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101

为了了解橡胶树胶孢炭疽菌的一个钙转运P型ATP酶基因Cg ATPase01的功能,本研究利用Splitmarker技术构建敲除载体,通过PEG介导原生质体转化对橡胶树胶孢炭疽菌菌株HBCg01的Cg ATPase 01基因进行敲除,根据表型变化及致病性检测对其功能进... 详细信息

为了了解橡胶树胶孢炭疽菌的一个钙转运P型ATP酶基因Cg ATPase01的功能,本研究利用Splitmarker技术构建敲除载体,通过PEG介导原生质体转化对橡胶树胶孢炭疽菌菌株HBCg01的Cg ATPase 01基因进行敲除,根据表型变化及致病性检测对其功能进行分析。结果表明:通过Split-marker方法获得了敲除突变体△Cg ATPase01,表型分析发现该突变体与野生菌株间存在明显差异,病菌气生菌丝的颜色发生了改变,生长速率降低,产孢量下降,对橡胶树叶片的致病性减弱,推测该基因可能在橡胶树胶孢炭疽菌的产孢、生长发育和致病性等方面具有重要作用。本研究结果为进一步研究胶孢炭疽菌P型ATP酶基因功能和病原菌的致病机理奠定了基础。

关键词：胶孢炭疽 P型ATP酶基因敲除表型分析

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甘蔗赤腐病菌拮抗细菌TWC2的分离鉴定及其防效研究

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热带农业科学 2018年第2期38卷 61-68页

作者：梁艳琼唐文吴伟怀李乐习金根郑肖兰李锐郑金龙黄兴贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101 海南大学环境与植物保护学院海南海口570228 农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室/农业部儋州热带作物科学观测实验站海南儋州571737

由镰孢炭疽菌(Colletotrichum falcatum Went)引起的赤腐病是甘蔗生产上的主要病害之一,发病时可导致甘蔗产量严重损失。为探求赤腐病有效的生防措施,从热带牧草台湾草叶片上分离到一株生防菌TWC2。经形态观察、16S r DNA序列分析和生... 详细信息

由镰孢炭疽菌(Colletotrichum falcatum Went)引起的赤腐病是甘蔗生产上的主要病害之一,发病时可导致甘蔗产量严重损失。为探求赤腐病有效的生防措施,从热带牧草台湾草叶片上分离到一株生防菌TWC2。经形态观察、16S r DNA序列分析和生理生化鉴定,确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。平板对峙试验结果发现,TWC2菌株对甘蔗赤腐病菌(Colletotrichum falcatum)、香蕉黑星病菌(Macrophoma musae)、橡胶树炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、柱花草炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、甘蔗环斑病菌(Leptosphaeria sacchari)、王草茎点霉叶斑病菌(Phoma herbarum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)等病原菌均具有一定的抑制作用。离体叶片接种试验发现,TWC2菌株对甘蔗赤腐病菌的抑制率达72.01%,盆栽试验与离体叶片接种结果一致,表明TWC2菌株对甘蔗赤腐病具有较好的防治效果。该结论为开发甘蔗赤腐病生防方法打下了基础。

关键词：甘蔗赤腐病解淀粉芽孢杆菌鉴定生防效果

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解淀粉芽孢杆菌TWC2诱导甘蔗抗病性相关防御酶系的研究

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中国糖料 2018年第3期40卷 13-16页

作者：梁艳琼吴伟怀黄兴习金根李锐郑金龙贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101 农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室/农业部儋州热带作物科学观测实验站海南儋州571737

为了探讨解淀粉芽孢杆菌TWC2诱导甘蔗抗病性机理,开发有效的生防制剂,采用比色法测定了解淀粉芽孢杆菌TWC2诱导甘蔗叶片后对叶片中多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)5种防... 详细信息

为了探讨解淀粉芽孢杆菌TWC2诱导甘蔗抗病性机理,开发有效的生防制剂,采用比色法测定了解淀粉芽孢杆菌TWC2诱导甘蔗叶片后对叶片中多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)5种防御酶活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明,解淀粉芽孢杆菌TWC2处理后的甘蔗叶片CAT、POD、SOD、PAL、PPO比未处理的显著提高;MDA含量比未处理的显著降低;且经10倍稀释液处理的甘蔗叶片中防御酶活性最高,诱导植株抗病性效果最佳。喷施TWC2稀释液可促使甘蔗抗病相关酶活性升高,诱导甘蔗植株产生系统抗性。诱导抗性可能是TWC2防治甘蔗病害的重要机制之一。

关键词：甘蔗解淀粉芽孢杆菌诱导抗病性防御酶

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咖啡驼孢锈菌PCR分子检测体系的建立

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热带作物学报 2017年第9期38卷 1677-1681页

作者：汪涵吴伟怀李乐梁艳琼郑金龙习金根李锐黄兴贺春萍易克贤海南大学热带农林学院海南海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室海南海口571101 海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室

由专性寄生菌咖啡驼孢锈菌(Hemileia vastatrix)引起的咖啡叶锈病是影响咖啡产量的最主要真菌病害。为建立对咖啡驼孢锈菌具有高特异性、高灵敏度、易操作的分子检测方法,本研究通过对咖啡驼孢锈菌DNA核糖体转录间隔区ITS1~ITS4序列与... 详细信息

由专性寄生菌咖啡驼孢锈菌(Hemileia vastatrix)引起的咖啡叶锈病是影响咖啡产量的最主要真菌病害。为建立对咖啡驼孢锈菌具有高特异性、高灵敏度、易操作的分子检测方法,本研究通过对咖啡驼孢锈菌DNA核糖体转录间隔区ITS1~ITS4序列与其近源序列作多重比较分析,获得其特异性区域,并于特异性区域设计了1对引物Hv-ITS-F/R。利用该特异引物,通过对咖啡驼孢锈菌、咖啡褐斑病菌、咖啡锈菌重寄生菌、咖啡炭疽菌以及不同属其它真菌基因组DNA进行PCR扩增。结果表明:此引物对仅能从咖啡驼孢锈菌基因组DNA中扩增出396 bp的特异条带,对其它相似或相近的病原真菌则无扩增条带。灵敏度试验结果表明,在DNA水平上检测浓度可达10 pg/μL。进一步通过田间健康与疑似发病植株的检测,结果呈现出很好的应用前景。由此表明,该引物对能有效地用于咖啡组织中驼孢锈菌的检测。

关键词：咖啡咖啡驼孢锈菌 PCR 分子检测

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胶孢炭疽菌致病相关基因Plv2功能分析

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植物病理学报 2017年第5期47卷 619-629页

作者：郑肖兰李秋洁许沛冬吴伟怀梁艳琼郑金龙习金根李锐黄兴李乐杨青青贺春萍易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海口571101 农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室海口571101 海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室海口571101 三亚市南繁科学技术研究院三亚572000 海南大学环境与植物保护学院海口570228

胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的橡胶树炭疽病是橡胶树三大叶部病害之一,严重威胁着橡胶树的生长。本研究从构建的胶孢炭疽菌RC178 T-DNA突变体库中筛选获得一株致病力明显减弱的突变菌株T1103,其T-DNA为单拷贝。采用... 详细信息

胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的橡胶树炭疽病是橡胶树三大叶部病害之一,严重威胁着橡胶树的生长。本研究从构建的胶孢炭疽菌RC178 T-DNA突变体库中筛选获得一株致病力明显减弱的突变菌株T1103,其T-DNA为单拷贝。采用TAIL-PCR克隆了该突变体T-DNA插入位点的侧翼序列,通过比对胶孢炭疽菌全基因组序列,发现该TDNA插入位点所在的序列包含一个5 400 bp的基因,将其命名为Plv2。Plv2基因包含3个外显子,编码一个假定的甾醇C-24甲基转移酶。敲除野生型菌株RC178中的Plv2,发现敲除突变体与T1103的致病力表现基本一致,由此推测Plv2基因为致病相关基因。

关键词：胶孢炭疽菌 RC178 T—DNA Plv2 功能分析

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橡胶树胶胞炭疽菌T-900突变体生物学研究及其假定基因LV1敲除载体构建

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热带作物学报 2017年第11期38卷 2129-2135页

作者：郑肖兰李秋洁郑行恺刘先宝李博勋时涛黄贵修中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南海口571101 农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室海南海口571101 海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室海南海口571101 三亚市南繁科学技术研究院海南三亚572000 海南大学环境与植物保护学院海南海口570228

从构建的橡胶树胶孢炭疽菌RC178(Colletotrichum gloeosporioides)突变体库中筛选获得一株致病力明显减弱突变体T-900,与野生菌株相比其菌落生长速率、产孢能力,孢子萌发率及附着孢形成率均明显降低。通过对突变菌株T-900 T-DNA侧翼序... 详细信息

从构建的橡胶树胶孢炭疽菌RC178(Colletotrichum gloeosporioides)突变体库中筛选获得一株致病力明显减弱突变体T-900,与野生菌株相比其菌落生长速率、产孢能力,孢子萌发率及附着孢形成率均明显降低。通过对突变菌株T-900 T-DNA侧翼序列克隆、比对和基因预测结果表明外源片段的插入破坏了一个预测基因的功能,该基因和组蛋白H3同源性为99%,暂命名为LV1。通过同源臂克隆构建了该基因敲除载体900-1A-900-1B-p CT74,为进一步研究该基因在病原菌致病过程中的作用机理提供了基础。

关键词：胶孢炭疽菌 T-900 生物学特性基因敲除载体转化与再生

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槟榔黄化病病原及检测方法研究进展

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热带农业科学 2017年第2期37卷 67-72页

作者：车海彦曹学仁罗大全中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101

黄化病是一种严重威胁槟榔生产种植的毁灭性传染性病害,目前主要在印度和我国槟榔主产区发生。本文从非生物与生物因素两方面对槟榔黄化病病原认识过程及检测方法进行详细的综述。

关键词：槟榔黄化病病原检测方法

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海南省冬季蔬菜病毒病发生情况调查

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热带农业科学 2017年第1期37卷 71-74页

作者：车海彦曹学仁刘培培罗大全中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室/海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南海口571101

病毒病是海南冬季蔬菜生产上的一类重要病害,发生为害日趋严重。通过对海南17个市县88个乡镇冬季蔬菜病毒病发生情况调查,同时采用ELISA或PCR方法对田间采集的1 385份样本进行病毒检测,结果表明:病毒病发生严重程度依次为黄瓜>辣椒&... 详细信息

病毒病是海南冬季蔬菜生产上的一类重要病害,发生为害日趋严重。通过对海南17个市县88个乡镇冬季蔬菜病毒病发生情况调查,同时采用ELISA或PCR方法对田间采集的1 385份样本进行病毒检测,结果表明:病毒病发生严重程度依次为黄瓜>辣椒>小白菜>南瓜>樱桃番茄>菜豆>豇豆。150份黄瓜样本中,CMV、CGMMV和TMV检出率分别为63.3%、22.67%和21.33%;180份南瓜样本中,CMV、TMV和CGMMV检出率分别为53.89%、5%和1.12%;220份辣椒样本中,CMV、TMV和TSWV检出率分别为49.1%、41.4%和1.53%;170份樱桃番茄样本中,TMV、CMV、BBWV和粉虱传双生病毒检出率分别为40%、34.7%、1.18%和3.53%;350份小白菜样本中,Tu MV和CMV检出率分别为49.1%和20.9%;130份菜豆样本中,CMV和BBWV检出率分别为30%和12.3%;195份豇豆样本中,CMV和BBWV检出率分别为9.2%和2.6%。CMV可以侵染已检测的4个科的所有蔬菜种类,检出率在9.23%~63.33%。已检测的所有蔬菜种类中,均存在2种或2种以上病毒的混合侵染,混合侵染率在0.56%~26.36%。

关键词：海南冬季蔬菜病毒种类侵染率

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