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TaqMan-MGB探针检测文森巴尔通体博格霍夫亚种实时荧光定量PCR方法的建立及应用

微生物学报 2013年第9期53卷 976-983页

作者：栗冬梅宋秀平王君刘起勇中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

【目的】应用TaqMan-MGB探针技术,建立具有种水平特异性、高敏感性的荧光定量PCR方法,用于快速检测文森巴尔通体博格霍夫亚种。【方法】在序列特异性扩增区标记(Sequence characterized amplifiedregion,SCAR)技术基础上,依据文森巴尔... 详细信息

【目的】应用TaqMan-MGB探针技术,建立具有种水平特异性、高敏感性的荧光定量PCR方法,用于快速检测文森巴尔通体博格霍夫亚种。【方法】在序列特异性扩增区标记(Sequence characterized amplifiedregion,SCAR)技术基础上,依据文森巴尔通体博格霍夫亚种一段特有的基因序列设计探针和引物,分别优化扩增反应的退火温度、探针和引物的反应浓度;分析此方法的特异性、敏感性及重复性;绘制标准曲线,评估PCR反应的扩增效率和稳定性。【结果】本研究设计的TaqMan-MGB探针具有种水平特异性;最低检出限为每个PCR反应11个拷贝;组内和组间的变异系数CV值分别为0.12%-0.70%和0.14%-0.55%,在允许范围内;标准曲线线性关系良好(R2=1),扩增效率高(E=104.7%)。【结论】本研究建立的基于TaqMan-MGB探针技术的荧光定量PCR方法能够在种水平特异性、高灵敏度检出文森巴尔通体博格霍夫亚种,为这种巴尔通体所引起的一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。

关键词：巴尔通体荧光定量PCR TaqMan-MGB探针犬 SCAR标记

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应用实时高分辨率熔解曲线技术检测巴尔通体

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中国人兽共患病学报 2015年第11期31卷 1027-1032页

作者：刘云彦宋秀平刘起勇陈忠科栗冬梅中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室、传染病预防控制国家重点实验室/中国疾病预防控制中心传染病监测预警重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心/世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

目的应用实时高分辨率熔解曲线PCR技术建立特异性强、灵敏度高和稳定性好快速检测巴尔通体物种方法。方法查找巴尔通体属特有基因ssrA特异引物进行常规PCR扩增,随后将扩增产物连接到pEASY？-T5Zero克隆载体上制备标准品。优化扩增反... 详细信息

目的应用实时高分辨率熔解曲线PCR技术建立特异性强、灵敏度高和稳定性好快速检测巴尔通体物种方法。方法查找巴尔通体属特有基因ssrA特异引物进行常规PCR扩增,随后将扩增产物连接到pEASY？-T5Zero克隆载体上制备标准品。优化扩增反应的退火温度和引物浓度,评估实时高分辨率熔解曲线方法的特异性、敏感性及重复性,并与常规PCR进行比较。结果优化的退火温度为60℃,引物浓度均为300nmol/L。特异性实验结果显示只有巴尔通体物种扩增出荧光信号,且相对应的熔解温度值为81.05℃±0.31,阴性对照菌株均未见荧光信号和熔解曲线;敏感性实验结果显示在20μL的反应体系中,实时高分辨率熔解曲线方法检测汉赛巴尔通体物种最低检出限为3.82×101个拷贝,比常规PCR敏感性提高了100倍,此外也显示出良好的线性关系和扩增效率,相关系数R2分别为0.999,E值分别为98.4%。重复性实验结果显示组内和组间的变异系数值为0.30%~0.62%和0.29%~0.36%,在允许范围内。结论建立的实时高分辨率熔解曲线PCR方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可快速地检测鉴定巴尔通体物种,为巴尔通体所引起的猫抓病、战壕热、心内膜炎、杆菌性血管瘤和卡瑞恩病等一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。

关键词：高分辨率熔解曲线巴尔通体猫抓病战壕热

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对话刘起勇：媒介伊蚊可持续控制是预防寨卡病毒病的杀手锏

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科学通报 2016年第21期61卷 2323-2325页

作者：刘小波吴海霞鲁亮中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心

寨卡病毒病已成为当前全球及我国普遍关注的公共卫生热点．2016年2月1日，世界卫生组织（WHO）宣布将在巴西密集出现的新生儿小头症病例和其他神经系统病变列入“国际关注的公共卫生紧急事件”，呼吁国际社会协调应对．截至6月15日，全... 详细信息

寨卡病毒病已成为当前全球及我国普遍关注的公共卫生热点．2016年2月1日，世界卫生组织（WHO）宣布将在巴西密集出现的新生儿小头症病例和其他神经系统病变列入“国际关注的公共卫生紧急事件”，呼吁国际社会协调应对．截至6月15日，全球共有60个国家或地区正在发生经蚊媒传播的寨卡病毒病，其中2015年以后新发生并正在流行46个，主要集中于拉丁美洲和南太平洋岛国．

关键词：病毒病可持续控制伊蚊预防媒介对话世界卫生组织国际社会

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诱蚊灯法与人工小时法捕蚊效果比较研究

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中国媒介生物学及控制杂志 2012年第6期23卷 529-532页

作者：郭玉红刘京利鲁亮常昭瑞张彦张静刘起勇中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206 中国疾病预防控制中心传染病预防控制处北京102206

目的比较诱蚊灯法和人工小时法2种捕蚊方法的现场捕蚊效果,为开展科学规范的蚊虫调查或监测方法提供参考。方法沿三峡库区按距离大坝远近不同选择3个点,同时使用2种捕蚊方法对居民区及其周围环境进行蚊虫种类及其构成调查。结果诱蚊灯... 详细信息

目的比较诱蚊灯法和人工小时法2种捕蚊方法的现场捕蚊效果,为开展科学规范的蚊虫调查或监测方法提供参考。方法沿三峡库区按距离大坝远近不同选择3个点,同时使用2种捕蚊方法对居民区及其周围环境进行蚊虫种类及其构成调查。结果诱蚊灯法和人工小时法均能捕获库区的主要蚊种,但在蚊种构成上有差异,诱蚊灯法捕获的三带喙库蚊数量大于人工小时法,而人工小时法捕获的骚扰阿蚊数量远大于诱蚊灯法;诱蚊灯法适用范围比人工小时法更广泛,可应用于林地、稻田等没有空间限制的环境。结论 2种蚊虫采集方法分别具有不同的优势和劣势;在长期系统的调查或监测中,建议使用诱蚊灯法。

关键词：蚊虫密度蚊种构成诱蚊灯法人工小时法

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2020-2021年我国12省份媒介伊蚊生态学调查

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中国媒介生物学及控制杂志 2022年第1期33卷 8-15页

作者：刘小波岳玉娟贾清臣赵宁郭玉红赵春春梁莹王君吴海霞刘起勇中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

目的分析2020-2021年我国12个省(自治区、直辖市)媒介伊蚊生态学监测结果,为媒介伊蚊传播疾病风险评估、预测预警及控制提供科学依据。方法收集我国12个省(自治区、直辖市)媒介伊蚊专项调查点媒介伊蚊幼蚊及成蚊密度调查资料,利用SPSS 1... 详细信息

目的分析2020-2021年我国12个省(自治区、直辖市)媒介伊蚊生态学监测结果,为媒介伊蚊传播疾病风险评估、预测预警及控制提供科学依据。方法收集我国12个省(自治区、直辖市)媒介伊蚊专项调查点媒介伊蚊幼蚊及成蚊密度调查资料,利用SPSS 18.0软件进行统计分析。结果2020-2021年海南、浙江和湖南省平均布雷图指数(BI)>10.00,广西壮族自治区(广西)、云南、河南和山东省平均BI>5.00;广西、广东、海南和山东省(自治区)平均诱蚊诱卵指数(MOI)>5.00;河南、湖北和山东省平均帐诱指数≥2.00只/(顶·h),广西、广东、海南、云南、福建和湖南省(自治区)平均帐诱指数>1.00只/(顶·h)。Ⅰ类省份[广东、海南、广西、福建、云南和浙江省(自治区)]与其他类型省份平均BI、MOI和帐诱指数比较差别无统计学意义(t=0.766、1.030、-0.745,均P>0.05)。2020-2021年,除广东、广西、云南、山东省(自治区)平均BI高于2017-2019三年平均水平外,其他省份BI均低于这3年的平均水平。媒介伊蚊在广东、海南、广西、云南4省(自治区)调查点全年有活动,在福建、浙江和湖北等省(自治区)3-12月有活动,在重庆、山东和河南等省(直辖市)4-11月有活动,在江西省4-12月有活动。BI和MOI研究结果在云南、广西和湖北省(自治区)存在一定差别。研究期内,发生登革热暴发和本地病例的地区媒介伊蚊BI均>5.00,云南省瑞丽市、广西梧州市岑溪市及广东省中山市三角镇BI>10.00;广西岑溪市帐诱指数>2.00只/(顶·h)。结论2020-2021年我国出现登革热本地病例省份媒介伊蚊平均密度较高,不同地区媒介伊蚊密度差异存在时空异质性。建议我国登革热本地传播地区适当调整媒介伊蚊监测时间,继续加强媒介伊蚊监测和风险评估,系统梳理媒介伊蚊生态学调查结果,为我国媒介伊蚊监测方案修订完善及媒介伊蚊传播疾病暴发控制提供科学依据。

关键词：媒介伊蚊调查监测风险

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中国消除疟疾媒介按蚊控制策略和技术

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中国媒介生物学及控制杂志 2021年第5期32卷 513-518页

作者：刘起勇刘小波中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

疟疾是经媒介按蚊叮咬传播的媒介生物传染病,曾给我国造成沉重的疾病、经济和社会负担。经过长期卓有成效的疟疾控制和消除行动,2021年6月我国获得世界卫生组织消除疟疾认证。从新中国成立初的"除害防病"爱国卫生运动,到20世... 详细信息

疟疾是经媒介按蚊叮咬传播的媒介生物传染病,曾给我国造成沉重的疾病、经济和社会负担。经过长期卓有成效的疟疾控制和消除行动,2021年6月我国获得世界卫生组织消除疟疾认证。从新中国成立初的"除害防病"爱国卫生运动,到20世纪80年代的"媒介蚊虫综合治理",到21世纪初提出的"媒介生物可持续控制",再到消除疟疾阶段的"疫点处置媒介按蚊控制",70余年来我国媒介按蚊防控策略不断演进创新,防控技术不断更新完善,在我国消除疟疾中发挥了关键作用。目前,我国为巩固消除疟疾成果,防控疟疾输入引起再传播流行风险,仍面临巨大压力和严峻挑战,务必继续做好境内媒介按蚊可持续控制,更要积极加入全球消除疟疾行动,分享中国疟疾媒介按蚊分层、可持续控制策略和实践经验,为实现"人类卫生健康共同体"美好愿景贡献中国智慧、策略和技术。

关键词：消除疟疾媒介按蚊控制策略技术

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气候变化对中国媒介生物传染病的影响及应对——重大研究发现及未来研究建议

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中国媒介生物学及控制杂志 2021年第1期32卷 1-11页

作者：刘起勇中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

全球气候变化,可能对媒介生物及其传播疾病流行产生影响,严重威胁人群健康。该文基于目前研究总结了气候变化对我国媒介生物及其传染病的影响,发现温度、湿度和降雨量等气象因素对媒介生物种群数量、密度、分布以及媒介生物传染病的时... 详细信息

全球气候变化,可能对媒介生物及其传播疾病流行产生影响,严重威胁人群健康。该文基于目前研究总结了气候变化对我国媒介生物及其传染病的影响,发现温度、湿度和降雨量等气象因素对媒介生物种群数量、密度、分布以及媒介生物传染病的时空动态、流行频率和强度等产生了显著影响,并存在时空异质性。气候变化驱动我国登革热等媒介生物传染病流行区向西向北显著扩展、流行频率和强度显著增加,且随着气候继续变暖未来流行强度和风险人群将加速增加。针对气候变化等导致的媒介生物传染病新挑战,开展的适应性策略和措施研究,提供了“自上而下”行政干预和“自下而上”社区媒介综合治理相结合的应对方案。基于媒介生物可持续控制策略的世界卫生组织“全球病媒控制对策2017-2030”,对媒介生物传染病防控提出了具体目标和要求。未来,我国亟待在该策略指引下,加强经费投入,注重高端人才培养,完善针对气候变化的媒介生物及相关疾病监测系统,加强风险评估、预测预警、防控策略和干预措施研究,为有效应对气候敏感媒介生物传染病新挑战,保护脆弱人群健康和公共卫生安全,提供持续创新的精准策略和措施。

关键词：气候变化媒介生物传染病应对研究

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火腿肠加工过程中微生物风险研究

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中国食品卫生杂志 2019年第1期31卷 59-63页

作者：杨舒然杨大进闫琳裴晓燕朱海明黄玉兰梁辉罗赟刘起勇中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206 国家食品安全风险评估中心北京100022 广东省疾病预防控制中心广东广州511430 四川省疾病预防控制中心四川成都610041 绵阳市疾病预防控制中心四川绵阳621000

目的开展火腿肠加工过程中微生物污染风险研究,掌握卫生指示菌、主要食源性致病菌的分布特征和污染途径,为火腿肠加工过程中微生物污染风险控制提供依据。方法 2015—2017年对4家企业的712份产品相关样品(原辅料、中间产品和终产品)和... 详细信息

目的开展火腿肠加工过程中微生物污染风险研究,掌握卫生指示菌、主要食源性致病菌的分布特征和污染途径,为火腿肠加工过程中微生物污染风险控制提供依据。方法 2015—2017年对4家企业的712份产品相关样品(原辅料、中间产品和终产品)和环境样品(包括生产用水、空气沉降菌、人员、工具等)进行监测,选择传统分离培养方法对卫生指示菌和主要食源性致病菌进行检验,并对沙门菌进行血清学鉴定。结果原辅料中菌落总数>10~5 CFU/g和大肠菌群>10~3 CFU/g的样品比例分别为33.00%(33/100)和29.00%(29/100);中间产品中菌落总数>10~5 CFU/g和大肠菌群>10~3 CFU/g的样品比例分别为62.86%(66/105)和36.19%(38/105);终产品未检出菌落总数>10~4 CFU/g的样品,大肠菌群均<10 CFU/g。结论火腿肠加工过程存在微生物污染风险,本研究对掌握火腿肠加工过程的污染分布,确定关键控制点,为制定相关生产质量管理规范、确保终产品的食品安全具有重要意义。

关键词：火腿肠加工过程卫生指示菌食源性致病菌血清型

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甘肃省天水市2017-2020年两种重要媒介蚊虫监测结果分析

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中国媒介生物学及控制杂志 2021年第4期32卷 456-460页

作者：陈秋梅王热勤吴海霞张涛马燕东颉东岗管斌天水市疾病预防控制中心病媒防制科甘肃天水741000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

目的分析甘肃省天水市三带喙库蚊和白纹伊蚊在不同生境的密度变化和季节消长,为天水市蚊虫及相关传染病的预防控制提供科学依据。方法2017-2020年每月2次选定5~7个生境进行调查,采用诱蚊灯法监测库蚊成蚊,选择3个生境采用双层叠帐法监... 详细信息

目的分析甘肃省天水市三带喙库蚊和白纹伊蚊在不同生境的密度变化和季节消长,为天水市蚊虫及相关传染病的预防控制提供科学依据。方法2017-2020年每月2次选定5~7个生境进行调查,采用诱蚊灯法监测库蚊成蚊,选择3个生境采用双层叠帐法监测伊蚊成蚊。应用SPSS 21.0软件对不同年份、生境、月份数据差异进行χ^(2)检验、Welch’s ANOVA和中位数检验。结果2017-2020年共捕获雌蚊19659只,其中捕获三带喙库蚊5759只(占29.29%),4年的蚊虫种群构成比差异有统计学意义(χ^(2)=851.227,P<0.001);4年平均蚊密度为5.81只(/灯·夜),以8月最高〔17.17只(/灯·夜)〕,2017和2018年三带喙库蚊密度明显高于2019和2020年,2017-2018年7-9月蚊密度与其他月份密度比较差异有统计学意义(χ^(2)=12.000,P=0.035);4年中三带喙库蚊密度与流行性乙型脑炎(乙脑)发病数显著相关(r=0.629,P<0.001);生境中总体以猪圈三带喙库蚊密度最高〔17.33只(/灯·夜)〕,但2017和2018年(乙脑高发年份)以牛圈密度最高。白纹伊蚊平均帐诱指数为4.10只(/顶·h);季节分布以8月帐诱指数最高,各月间密度差异有统计学意义(F=207.031,P=0.001);连续4年在各监测生境均发现白纹伊蚊,以废旧物品处/工地帐诱指数最高,不同生境间帐诱指数差异有统计学意义(F=16.892,P=0.010)。结论牛棚和猪圈是天水市三带喙库蚊的优势生境,每年8月其密度最高;白纹伊蚊已在天水市各监测生境分布,废旧物品处/工地是其重要孳生地,密度高峰为7-8月。因此,应加强天水市蚊媒分布和孳生环境的调查研究,依据其生态学特点开展灭蚊工作,为防制相关疾病做好有效的预防。

关键词：三带喙库蚊白纹伊蚊密度季节消长

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中国麻蝇属昆虫研究进展

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中国媒介生物学及控制杂志 2022年第1期33卷 153-158页

作者：王超闫利平李心钰张东刘起勇中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206 北京林业大学生态与自然保护学院北京100083

蝇类是重要的病媒生物,可机械性携带、传播多种病原,引起多种疾病传播,部分蝇种还可生物性传播疾病。麻蝇(Flesh flies)是蝇类中常见的类群,对其监测具有重要公共卫生价值,但关于麻蝇的识别鉴定一直存在困难。该文对麻蝇相关研究进行梳... 详细信息

蝇类是重要的病媒生物,可机械性携带、传播多种病原,引起多种疾病传播,部分蝇种还可生物性传播疾病。麻蝇(Flesh flies)是蝇类中常见的类群,对其监测具有重要公共卫生价值,但关于麻蝇的识别鉴定一直存在困难。该文对麻蝇相关研究进行梳理并评述,为麻蝇分类、形态、系统发生等研究提供参考,同时也可推进蝇类病媒生物预防与控制的研究。

关键词：东亚麻蝇分类形态系统发生

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