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全国寄生虫学与热带医学学术研讨会

作者：袁忠英刘晖沈玉娟陈盛霞曹建平中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心遵义医学院寄生虫学教研室江苏大学医学技术学院

隐孢子虫病(cryptosporidiosis)是一种以腹泻为主要症状的全球性的人兽共患原虫病,是世界六大腹泻病之一,在寄生虫性腹泻中占首位,病例遍及6大洲90多个国家,但目前该病仍无有效的预防和治疗药物。本实验用改良抗酸染色法检查牛粪,鉴定... 详细信息

隐孢子虫病(cryptosporidiosis)是一种以腹泻为主要症状的全球性的人兽共患原虫病,是世界六大腹泻病之一,在寄生虫性腹泻中占首位,病例遍及6大洲90多个国家,但目前该病仍无有效的预防和治疗药物。本实验用改良抗酸染色法检查牛粪,鉴定为含有隐孢子虫卵囊,油镜下观察卵囊形态,并随机测量50个卵囊大小。用美国Genmed公司粪便DNA分离+高质纯化试剂盒,按其说明书提取卵囊基因组DNA。以隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,根据隐孢子虫18S rRNA序列设计2对引物,巢式PCR扩增。扩增产物测序后登陆NCBI BLAST进行同源性比对和搜索,下载相关序列,利用Clustal X软件对测得序列与相应下载的序列进行比对,然后用MEGA4.0软件中的邻接法(neighbour-joiningmethod,NJ)构建系统发育树,用自展值检验(Bootstrap test)估计所建系统发育树的可靠性,重复次数为1 000。结果 :上海株牛源隐孢子虫卵囊呈圆形或椭圆形,大小为(5.6±0.49)μm×(5.2±0.51)μm。扩增出的18S rRNA基因片段为812bp。由此序列构建的系统发育树显示,上海株牛源隐孢子虫与巴西牛隐孢子虫(Cryptospridium bovis)序列一致性为100%,二者在种系发育树上为同一分支,亲缘关系最近;与中国青海、蒙古、美国、突尼斯等地的牛隐孢子虫序列一致性均为99%。结果提示上海株牛源隐孢子虫为牛隐孢子虫(***)。

关键词：牛隐孢子虫 PCR 序列一致性

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巢式PCR-RFLP分析两株牛源隐孢子虫

巢式PCR-RFLP分析两株牛源隐孢子虫

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全国寄生虫学与热带医学学术研讨会

作者：刘晖袁忠英沈玉娟冯耀宇曹建平遵义医学院寄生虫学教研室中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心华东理工大学资源与环境工程学院

隐孢子虫(Cryptospridium spp.)是一种能引起人、畜和野生动物感染的肠道原虫,是儿童和免疫缺陷者腹泻的重要病原,动物与人之间可相互感染,并可通过食物和水源引起爆发流行。隐孢子虫基因分析是分类学研究的重要手段,可以鉴定基因型或...

隐孢子虫(Cryptospridium spp.)是一种能引起人、畜和野生动物感染的肠道原虫,是儿童和免疫缺陷者腹泻的重要病原,动物与人之间可相互感染,并可通过食物和水源引起爆发流行。隐孢子虫基因分析是分类学研究的重要手段,可以鉴定基因型或发现隐种。本实验通过18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析鉴定上海(SH-BOV)和徐州(XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫虫种/基因型。

关键词：

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多重PCR技术检测恶性疟原虫抗药性相关分子标志的方法研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第6期25卷 451-456页

作者：张国庆汤林华官亚宜周水森郑彬黄芳武松刘燕中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的建立恶性疟原虫5个主要抗药性相关基因的单管多重PCR扩增方法,用于恶性疟原虫抗药性分子标志检测。方法依据各基因参考序列,运用Primer Premier 5.0和Oligo6.0软件,设计5对特异性引物,采用Hot Start Taq DNA聚合酶,设置递增延伸温度... 详细信息

目的建立恶性疟原虫5个主要抗药性相关基因的单管多重PCR扩增方法,用于恶性疟原虫抗药性分子标志检测。方法依据各基因参考序列,运用Primer Premier 5.0和Oligo6.0软件,设计5对特异性引物,采用Hot Start Taq DNA聚合酶,设置递增延伸温度,对恶性疟原虫标准株(3D7、Dd2和HB3)、分离株(FCC1/HN、CMH/YN)、现场标本(来源于海南、云南和缅甸)、近缘虫种对照(间日疟原虫、伯氏疟原虫、食蟹猴疟原虫、杜氏利什曼原虫和牛源隐孢子虫)和空白对照(以H2O为模板)进行5个抗药性相关基因(包括恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白基因Pfcrt、多药抗性基因Pfmdr1、二氢喋酸合成酶基因Pfdhps、二氢叶酸还原酶基因Pfdhfr和三磷酸腺苷酶第6亚基基因PfATPase6)的单管多重PCR扩增,2%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增结果,测定扩增产物序列,并与参考序列(3D7株)比对。结果经电泳,恶性疟原虫标准株、分离株和现场标本的多重PCR扩增产物均可见5条目标条带。测序结果与参考序列比对,高度同源,最低同源性为98.5%。模板DNA量达0.1ng即满足扩增要求,近缘虫种对照和空白对照未见扩增产物。结论多重PCR技术实现了单管1次反应完成5个抗药性相关基因的扩增,该方法灵敏,特异性好,有助于提高恶性疟原虫抗药性分子标志的检测效率。

关键词：恶性疟原虫药物抗性单核苷酸多态性多重PCR

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安氏隐孢子虫热休克蛋白编码基因的克隆、表达和分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第3期25卷 163-170页

作者：刘海鹏曹建平李小红卢潍媛沈玉娟徐馀信臧炜刘述先中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的克隆、表达和分析安氏隐孢子虫Mr70000热休克蛋白(CaHSP70)的部分编码基因。方法依据公布的CaHSP70基因序列设计引物,以江苏徐州安氏隐孢子虫(XZ-BOV)总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后,亚克隆入pE... 详细信息

目的克隆、表达和分析安氏隐孢子虫Mr70000热休克蛋白(CaHSP70)的部分编码基因。方法依据公布的CaHSP70基因序列设计引物,以江苏徐州安氏隐孢子虫(XZ-BOV)总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后,亚克隆入pET28a原核表达载体,构建重组质粒pET28a-CaHSP70,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并获得纯化的重组蛋白(简称为rCaHSP70)。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)和ELISA对该重组蛋白进行分析和鉴定。采用相关生物信息学软件对序列进行分析。结果根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的CaHSP70一致。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,重组蛋白(rCaHSP70)Mr约为43000(含6个组氨酸),以包涵体的形式存在,可被辣根过氧化物酶标记的抗组氨酸抗体、安氏隐孢子虫感染的小鼠血清、微小隐孢子虫感染的儿童血清和rCaHSP70免疫小鼠血清识别。rCaHSP70存在多个功能位点和潜在的抗原决定簇。种系发生分析表明XZ-BOV与安氏隐孢子虫进化关系最近。ELISA检测结果表明,rCaHSP70免疫的C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠血清特异性抗体滴度均显著高于免疫前。结论XZ-BOVHSP70部分编码基因的克隆获得成功,研究获得的重组蛋白具有一定的免疫原性和免疫反应性。

关键词：安氏隐孢子虫热休克蛋白重组抗原表位分析

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卫氏并殖吸虫感染循环抗原检测方法的建立与应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第6期25卷 513-515页

作者：陈韶红李浩周晓农中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

用CAg-dot-ELISA法和CAb-ELISA法分别对并殖吸虫病临床诊断患者、并殖吸虫病流行区人群、卫氏并殖吸虫早期感染者及其他寄生虫感染者进行循环抗原和抗体检测。用CAg-dot-ELISA检测70份卫氏并殖吸虫病临床诊断患者血清,阳性29份,敏感性为... 详细信息

用CAg-dot-ELISA法和CAb-ELISA法分别对并殖吸虫病临床诊断患者、并殖吸虫病流行区人群、卫氏并殖吸虫早期感染者及其他寄生虫感染者进行循环抗原和抗体检测。用CAg-dot-ELISA检测70份卫氏并殖吸虫病临床诊断患者血清,阳性29份,敏感性为41.5%(29/70),与华支睾吸虫病和日本血吸虫病患者血清分别有25%(5/20)和20%(4/20)的交叉反应,与其他寄生虫感染者血清和健康人血清(60份)均为阴性,特异性为93.6%。CAb-ELISA检测70例卫氏并殖吸虫病临床诊断患者血清阳性67份,敏感性为95.7%(67/70),与华支睾吸虫病和日本血吸虫病患者血清分别有25%(5/20)和20%(4/20)的交叉反应,对其他寄生虫感染者血清和健康人血清的特异性为92.1%。CAg-dot-ELISA和CAb-ELISA分别检测并殖吸虫病流行区人群220份血清,阳性率分别为0和3.2%(7/220)。CAg-dot-ELISA法对辅助诊断并殖吸虫早期感染有一定价值。

关键词：卫氏并殖吸虫多克隆抗体循环抗原 ELISA dot-ELISA

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隐孢子虫牛源分离株的分离和鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第2期25卷 81-86页

作者：刘海鹏曹建平沈玉娟陈有贵李小红卢潍媛徐馀信刘宜升刘述先周晓农汤林华中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025 徐州医学院徐州221004

目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物... 详细信息

目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物扩增小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因和卵囊囊壁蛋白(COWP)基因,分别克隆到pGEM-T和pGEM-T Easy载体,测定核苷酸序列,运用BLAST和MEGA软件进行序列同源性和种系发生分析。结果分离的隐孢子虫卵囊个体大小为(7．4±0．32)μm×(5．4±0．21)μm,长宽比为1．3±0．07(n=20)。徐州牛源隐孢子虫与Gen- Bank公布的安氏隐孢子虫比较,SSU rRNA和COWP基因序列同源性分别为100％和99％。种系发生分析显示该株隐孢子虫与安氏隐孢子虫处于同一分支。结论由徐州自然感染奶牛粪便中分离获得的隐孢子虫是安氏隐孢子虫。

关键词：安氏隐孢子虫小亚基核糖体RNA 卵囊囊壁蛋白种系发生分析

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日本血吸虫弹性蛋白酶基因的克隆、表达及虫期特异性转录

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第5期25卷 359-363页

作者：黄成玉卢艳王玮鞠川冯正杨忠王升跃胡薇华东理工大学生物工程学院上海200237 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 国家人类基因组南方研究中心上海200231

目的克隆和表达日本血吸虫弹性蛋白酶基因(SjCE-2b),纯化表达重组蛋白,并研究该基因在各虫期的转录情况。方法预测SjCE-2b基因的编码序列。绘制血吸虫尾蚴弹性蛋白酶家族成员系统进化树。用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析SjC... 详细信息

目的克隆和表达日本血吸虫弹性蛋白酶基因(SjCE-2b),纯化表达重组蛋白,并研究该基因在各虫期的转录情况。方法预测SjCE-2b基因的编码序列。绘制血吸虫尾蚴弹性蛋白酶家族成员系统进化树。用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析SjCE-2b基因在日本血吸虫各期转录的差异。将RT-PCR扩增得到的SjCE-2b基因亚克隆至载体pET28b,在大肠埃希菌中诱导表达得到重组蛋白rSjCE-2b,用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,Western blotting分析其免疫原性。结果在虫卵、子胞蚴和成虫检测到SjCE-2b基因转录本(714bp),表达的重组蛋白rSjCE-2b,相对分子质量约为Mr 31000,与预测的融合蛋白相对分子质量相符。构建了重组原核表达载体SjCE-2b/pET28b,并在大肠埃希菌中表达。纯化后的重组蛋白rSjCE-2b可被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论在日本血吸虫虫卵、子胞蚴和成虫发现SjCE-2b基因转录本。SjCE-2b基因有可能成为潜在的日本血吸虫病疫苗候选抗原和药物及诊断靶点。

关键词：日本血吸虫弹性蛋白酶基因原核表达

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白蛉的生物学和防制对策

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国际医学寄生虫病杂志 2007年第6期34卷 283-290页

作者：管立人顾灯安王捷中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海 200025

该文综合了近十余年来国内外对白蛉生物学和防制方面的主要研究成果，其中包括1991-2004年6次关于白蛉或利什曼病国际学术讨论会提供的资料。可以看出，在白蛉的分布、扩散、吸血、生殖、寿命和滞育等方面的研究以及对野栖白蛉的防制策... 详细信息

该文综合了近十余年来国内外对白蛉生物学和防制方面的主要研究成果，其中包括1991-2004年6次关于白蛉或利什曼病国际学术讨论会提供的资料。可以看出，在白蛉的分布、扩散、吸血、生殖、寿命和滞育等方面的研究以及对野栖白蛉的防制策略都有了新的进展，可供我国利什曼病防治工作者的参考。

关键词：白蛉生物学防制对策

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利什曼原虫的传播机制及传媒蛉种的研究进展

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国际医学寄生虫病杂志 2007年第3期34卷 113-118页

作者：高春花管立人汪俊云中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

该文综述了人体利什曼原虫的传播机制及传媒蛉种研究的现状和进展，并通过分析媒介白蛉与利什曼原虫的相互关系，认为利什曼原虫虫种的鉴定应在分析原虫DNA的基础上，结合该利什曼原虫与其他虫种在致病特征和流行病学上的差异综合考虑... 详细信息

该文综述了人体利什曼原虫的传播机制及传媒蛉种研究的现状和进展，并通过分析媒介白蛉与利什曼原虫的相互关系，认为利什曼原虫虫种的鉴定应在分析原虫DNA的基础上，结合该利什曼原虫与其他虫种在致病特征和流行病学上的差异综合考虑，这样才具有价值。

关键词：利什曼原虫白蛉传播机制

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日本血吸虫嗜肌素样蛋白编码基因的克隆表达及其免疫原性研究

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中国血吸虫病防治杂志 2007年第4期19卷 247-251页

作者：童群波刘述先李小红徐馀信沈玉娟曹建平中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的克隆和表达日本血吸虫嗜肌素样蛋白(SjcMLP)编码基因,并研究其重组抗原的免疫原性。方法PCR扩增SjcMLP编码基因,并亚克隆入表达载体pQE30。将重组表达质粒pQE30-SjcMLP转入宿主菌***15,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用金... 详细信息

目的克隆和表达日本血吸虫嗜肌素样蛋白(SjcMLP)编码基因,并研究其重组抗原的免疫原性。方法PCR扩增SjcMLP编码基因,并亚克隆入表达载体pQE30。将重组表达质粒pQE30-SjcMLP转入宿主菌***15,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用金属Ni螯合物亲和层析柱(Ni-NTA)纯化SjcMLP重组蛋白(reSjcMLP)。纯化的reSjcMLP采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blot)作进一步分析。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定用reSjcMLP免疫C57BL/6小鼠血清中的抗体水平。结果SDS-PAGE分析表明获得的重组抗原的大小约24.8kDa,与预计的融合蛋白大小相符。Westernblot显示该重组抗原能被日本血吸虫尾蚴感染兔血清识别。用该重组抗原包被进行ELISA检测,免疫血清滴度高达1∶12800。但动物免疫试验结果减虫效果不明显。结论SjcMLP编码基因以可溶性融合蛋白的形式得到表达,动物免疫试验未诱导出明显的保护力。

关键词：日本血吸虫嗜肌素样蛋白克隆表达免疫

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