检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 335-340页

作者：刘建徐斌张晓刘璐胡薇王小宁华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025 复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系上海200433

目的克隆、表达日本血吸虫硫氧还蛋白-1(SjTrx-1)编码基因,测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性,分析SjTrx-1基因在血吸虫不同发育阶段的转录本差异,观察其在日本血吸虫成虫体内的组织分布情况。方法从日本血吸虫cDNA文库中挑选SjTrx-1的... 详细信息

目的克隆、表达日本血吸虫硫氧还蛋白-1(SjTrx-1)编码基因,测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性,分析SjTrx-1基因在血吸虫不同发育阶段的转录本差异,观察其在日本血吸虫成虫体内的组织分布情况。方法从日本血吸虫cDNA文库中挑选SjTrx-1的基因序列,应用PCR技术对目的片段进行体外扩增,并克隆入原核表达载体pET28a,重组质粒转化*** BL21(DE3)细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性。纯化的重组SjTrx-1蛋白免疫新西兰白兔,以制备的免疫兔血清作为抗体,应用免疫荧光定位技术检测SjTrx-1在日本血吸虫成虫体内的分布情况。制备日本血吸虫各虫期的总RNA样品,利用RT-PCR方法扩增目的片段,分析SjTrx-1基因在各发育阶段的转录本丰度。结果构建了重组表达载体SjTrx-1/pET28a,在***中实现了重组SjTrx-1蛋白的可溶表达,其相对分子质量(Mr)约为38 000,与预测的融合蛋白大小相符。经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjTrx-1,并测定了其体外的酶催化活性。虫期转录特异性分析显示,该基因在各个虫期均存在转录,其中胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高,毛蚴和尾蚴中含量相对较低。荧光定位结果显示,SjTrx-1蛋白在虫体内分布广泛,且无组织特异性。结论 SjTrx-1在日本血吸虫虫体内分布广泛,在胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高。

关键词：日本血吸虫硫氧还蛋白-1 虫期特异性免疫定位抗氧化防御

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金诺芬抗日本血吸虫活性机制及其细胞毒性的探讨

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第6期30卷 450-454页

作者：刘建胡薇徐斌王吉鹏王树奇王小宁华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025 复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系上海200433

目的探讨金诺芬对日本血吸虫（Schistosoma japonicum）童虫和成虫作用效果的差异及其作用靶点，测定金诺芬对宿主细胞的毒性。方法用二硫苏糖醇（DTI？）／胰岛素还原法体外测定金诺芬对重组sjTrx-酶活性的影响。用日本血吸虫尾蚴感染4... 详细信息

目的探讨金诺芬对日本血吸虫（Schistosoma japonicum）童虫和成虫作用效果的差异及其作用靶点，测定金诺芬对宿主细胞的毒性。方法用二硫苏糖醇（DTI？）／胰岛素还原法体外测定金诺芬对重组sjTrx-酶活性的影响。用日本血吸虫尾蚴感染4～6周龄雌性昆明鼠（童虫组10只小鼠，600-800条／只；成虫组10只小鼠，80-100条／只）．灌注法收集童虫（15d）和成虫（35d）。虫体经无菌生理盐水充分洗涤后，转移至预先添加培养基的12孔板中．分别加入金诺芬和吡喹酮至其终浓度为1、5和10μg／ml，显微镜下观察化合物处理2、24、48和72h后虫体的形态改变和死亡情况。CCK．8试剂盒测定金诺芬（5和10Ixg／m1）对3种人源宿主细胞（HepG2、293T和Hela）的毒性。结果10μg／ml金诺芬作用下，40min内重组Si协．1还原胰岛素的总量减少54．5％。5μg／ml金诺芬体外作用24h后．成虫死亡率达75％，而童虫未见死亡；10μg／ml金诺芬作用72h后，童虫和成虫均全部死亡，但童虫死亡时间较成虫延迟。金诺芬和吡喹酮作用后，光镜下观察．虫体均出现颜色变灰暗、挛缩和卷曲等现象：电镜下可见虫体表被膜结构严重破坏。细胞毒性测试结果显示，5μg／ml金诺芬可使细胞相对活力降低85％以上，而10μg／ml时细胞几乎全部死亡。结论sjTrx-是金诺芬作用靶点之一。金诺芬具有较强的细胞毒性作用，对日本血吸虫成虫和童虫的作用效果存在差异．对成虫的作用效果更显著。

关键词：金诺芬日本血吸虫靶点细胞毒性

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血吸虫基因组、转录组和蛋白质组研究进展

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国际医学寄生虫病杂志 2009年第5期36卷 286-293页

作者：胡薇冯正韩泽广中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 国家人类基因组南方研究中心上海201203

血吸虫病是全世界最严重的寄生虫病之一。血吸虫具有一些独特的生物学性状：雌雄异体，复杂的生命周期，逃避宿主免疫应答，以及显著的依赖于宿主的内分泌和免疫信号来完成其发育、成熟和产卵。近10年来，日本血吸虫和曼氏血吸虫的转录... 详细信息

血吸虫病是全世界最严重的寄生虫病之一。血吸虫具有一些独特的生物学性状：雌雄异体，复杂的生命周期，逃避宿主免疫应答，以及显著的依赖于宿主的内分泌和免疫信号来完成其发育、成熟和产卵。近10年来，日本血吸虫和曼氏血吸虫的转录组、基因组和蛋白质组方面都开展了诸多的研究：基因组草图已经完成，不同发育阶段和性别的基因表达和蛋白表达谱已分析获得了巨大的信息。新的血吸虫基因组、转录组和蛋白质组数据有助于全面理解无脊椎动物进化、血吸虫营养和新陈代谢，依赖宿主的发育和成熟，宿主和寄生虫的相互作用和免疫逃避以及潜在的疫苗候选者与药物靶点等。

关键词：血吸虫基因组转录组蛋白质组进化免疫逃避

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新的具有高度多态性的日本血吸虫微卫星位点的鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第2期26卷 104-109页

作者：殷明波朱根凤张祥林徐斌莫筱瑾孙胜强王升跃 David Blair 胡薇冯正华东理工大学生物工程学院上海200237 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 国家人类基因组南方研究中心上海201323 詹姆斯库克大学海洋与热带生物学院汤斯维尔市4811

目的从基因组序列中选择和设定新的、可用于研究日本血吸虫多态性的微卫星位点。方法672个日本血吸虫标本取自安徽、江西、湖南、湖北和四川等5省的7个流行区现场。根据日本血吸虫基因组数据库中的初始数据设计引物,对标本的17个全新的... 详细信息

目的从基因组序列中选择和设定新的、可用于研究日本血吸虫多态性的微卫星位点。方法672个日本血吸虫标本取自安徽、江西、湖南、湖北和四川等5省的7个流行区现场。根据日本血吸虫基因组数据库中的初始数据设计引物,对标本的17个全新的日本血吸虫微卫星位点进行分析。用GenMapper4.0软件(Applied Biosystems)进行初始数据处理,用GenClone1.0软件计算种群内各标本的遗传距离;用GenAlEx6软件统计等位基因的变化;用GenClone1.0软件计算种群内各标本的遗传距离;用UPGMA谱系图分析种群间遗传距离。结果17个微卫星位点均呈现多态性。对江西都昌种群的这17个位点进行分析,标本之间的遗传距离大多为25～32,显示江西都昌种群内各个标本之间的遗传差异明显。对7个地区种群分析的结果显示种群间的差异较为明显。类平均法系统聚类分析(UPGMA)谱系图显示,江西都昌、安徽铜陵、湖北沙市和湖南常德的种群同为一簇,其遗传距离为0.0178～0.0363;安徽贵池和湖南岳阳的为另外一簇,其遗传距离为0.0247;而四川西昌单独为一簇,与其他两簇的遗传距离为0.0192～0.0693。结论选择的17个微卫星位点可作为研究日本血吸虫种群遗传学的有效标记,并揭示中国大陆该虫种存在着复杂的遗传变异。

关键词：日本血吸虫微卫星多态性中国

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日本血吸虫乙醛脱氢酶全长基因编码序列的预测、验证与分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 30-34页

作者：王玮刘德立胡薇冯正杨忠中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 华中师范大学生命科学学院武汉430079 上海生物信息技术研究中心上海200235 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

目的利用生物信息学和实验相结合的方法,补平已知拼接序列中的缺失片段,获得日本血吸虫乙醛脱氢酶全长基因编码序列。方法通过生物信息学方法从已公开发布的日本血吸虫转录组数据库中提取乙醛脱氢酶表达序列标签(EST)序列数据,与其他物... 详细信息

目的利用生物信息学和实验相结合的方法,补平已知拼接序列中的缺失片段,获得日本血吸虫乙醛脱氢酶全长基因编码序列。方法通过生物信息学方法从已公开发布的日本血吸虫转录组数据库中提取乙醛脱氢酶表达序列标签(EST)序列数据,与其他物种的同源基因进行多序列联配,寻找分别与同一蛋白氨基酸序列的N端和C端配对的序列;设计引物,用RT-PCR扩增得到全长基因中间的缺失片段并测序。最终获得全长基因序列,并分析该蛋白的理化性质。结果找到日本血吸虫乙醛脱氢酶基因的可能EST序列片段8条,对其中的1对EST序列(AAW27891和AAW27047对应的氨基酸序列,中间缺少约80个氨基酸)进行blastn比对结果,预测为同一基因的2条片段。根据这两对EST序列设计正、反向引物,通过PCR扩增、对扩增产物进行测序及序列的生物信息学鉴定,找回了缺少的核酸序列,并与预测序列大小大致吻合(430bp)。组合成1条完整的日本血吸虫乙醛脱氢酶基因的编码序列(提交GenBank,其登录号为EF503564)。ORF全长为1596bp,编码531个氨基酸,编码的蛋白相对分子质量理论值为Mr57330.7,pI值为7.94,此序列的290～297位氨基酸与乙醛脱氢酶的模式序列[LIVMFGA]-E-[LIMSTAC]-[GS]-G-[KNLM]-[SADN]-[TAPFV]相匹配。结论利用生物信息学和实验相结合的方法,可以补平已知拼接序列中的缺失片段,获得日本血吸虫乙醛脱氢酶的全长基因编码序列。

关键词：日本血吸虫乙醛脱氢酶生物信息学序列拼接

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日本血吸虫弹性蛋白酶基因的克隆、表达及虫期特异性转录

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第5期25卷 359-363页

作者：黄成玉卢艳王玮鞠川冯正杨忠王升跃胡薇华东理工大学生物工程学院上海200237 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 国家人类基因组南方研究中心上海200231

目的克隆和表达日本血吸虫弹性蛋白酶基因(SjCE-2b),纯化表达重组蛋白,并研究该基因在各虫期的转录情况。方法预测SjCE-2b基因的编码序列。绘制血吸虫尾蚴弹性蛋白酶家族成员系统进化树。用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析SjC... 详细信息

目的克隆和表达日本血吸虫弹性蛋白酶基因(SjCE-2b),纯化表达重组蛋白,并研究该基因在各虫期的转录情况。方法预测SjCE-2b基因的编码序列。绘制血吸虫尾蚴弹性蛋白酶家族成员系统进化树。用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析SjCE-2b基因在日本血吸虫各期转录的差异。将RT-PCR扩增得到的SjCE-2b基因亚克隆至载体pET28b,在大肠埃希菌中诱导表达得到重组蛋白rSjCE-2b,用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,Western blotting分析其免疫原性。结果在虫卵、子胞蚴和成虫检测到SjCE-2b基因转录本(714bp),表达的重组蛋白rSjCE-2b,相对分子质量约为Mr 31000,与预测的融合蛋白相对分子质量相符。构建了重组原核表达载体SjCE-2b/pET28b,并在大肠埃希菌中表达。纯化后的重组蛋白rSjCE-2b可被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论在日本血吸虫虫卵、子胞蚴和成虫发现SjCE-2b基因转录本。SjCE-2b基因有可能成为潜在的日本血吸虫病疫苗候选抗原和药物及诊断靶点。

关键词：日本血吸虫弹性蛋白酶基因原核表达

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