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2014-2015监测年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析

中华微生物学和免疫学杂志 2016年第1期36卷 3-8页

作者：黄维娟成艳辉李希妍谭敏菊隗合江赵翔王钊王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的分析我国大陆地区2014-2015流感监测年度分离的H3N2亚型流感病毒抗原性和基因变异情况以及与疫苗株的匹配性，为制定流感的预防和控制策略提供依据。方法利用血凝抑制试验，对2014年4月至2015年3月中国大陆分离的2516株H3N2型流感... 详细信息

目的分析我国大陆地区2014-2015流感监测年度分离的H3N2亚型流感病毒抗原性和基因变异情况以及与疫苗株的匹配性，为制定流感的预防和控制策略提供依据。方法利用血凝抑制试验，对2014年4月至2015年3月中国大陆分离的2516株H3N2型流感毒株进行了抗原性分析；对分离自全国不同省份的70株病毒进行了序列测定和序列分析。结果2014--2015流感监测年度我国大陆地区主要流行3c．3a分支的H3N2亚型流感病毒，2014年10月份开始检测到3c．2a分支的毒株。两分支的毒株与疫苗株相比，在抗原决定簇A区和B区，受体结合部位均发生了氨基酸位点突变；抗原性分析结果显示检测毒株中有高达95．1％为疫苗株A／TX／50／12鸡胚株的低反应株。结论本监测年度我国大陆地区流行的绝大部分H3N2亚型流感病毒与WHO推荐的疫苗组分A／TX／50／12匹配性不好，应加强病毒变异监测，建立我国流感疫苗株构建平台，提高流感疫苗的有效性。

关键词：流感病毒 H3N2亚型抗原性基因特性

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2014-2015监测年度中国B型流感病毒病原学特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第1期36卷 9-15页

作者：李希妍成艳辉谭敏菊隗合江蓝雨黄维娟肖宁王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的分析2014--2015流感监测年度我国B型流感病毒的流行情况及与流感疫苗株的匹配性。方法选择本监测年度中国分离的B型流感病毒，进行抗原性分析并对全基因组进行测序，构建进化树，分析我国B型流感病毒的变异情况，并比较其与疫苗株... 详细信息

目的分析2014--2015流感监测年度我国B型流感病毒的流行情况及与流感疫苗株的匹配性。方法选择本监测年度中国分离的B型流感病毒，进行抗原性分析并对全基因组进行测序，构建进化树，分析我国B型流感病毒的变异情况，并比较其与疫苗株的匹配性。结果本年度我国B型流感病毒活动水平较低，占所有收检病毒的29．94％，而B型流感病毒中Yamagata系毒株明显多于Victoria系。抗原性分析显示，Yamagata系流感病毒绝大部分为疫苗株B／Massachusetts／2／2012的类似株（95．1％），而Victoria系病毒只有48．3％为四价流感疫苗组分B／Brisbane／60／2008的类似株，但与我国Victoria系流行代表株B／北京海淀／1386／2013抗原类似的比例为100％。基因特性分析显示有19株Yamagata系毒株为BY—HA／BV—NA系问重配毒株。分析NA基因的耐药位点发现8株Yamagata系病毒有已知的敏感性降低的氨基酸位点突变。结论2014--2015流感监测年度我国B型Yamagata系病毒与疫苗株匹配较好，但Victoria系病毒与四价疫苗株匹配性不佳，因此应及时分析我国流行病毒的抗原性和基因特性，推选出与我国流行病毒相匹配的疫苗株。

关键词： B型流感病毒抗原特性基因特性

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利用反向遗传技术进行B型重配流感病毒的构建

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第1期36卷 16-19页

作者：张瑶周剑芳秦堃曾晓旭舒跃龙王大燕中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的反向遗传技术是流感病毒疫苗株构建和基因特性研究的重要方法，本研究旨在构建B型流感病毒反向遗传平台，进而拯救B型流感病毒。方法研究中利用含有双启动子的pHW2000为载体，对B／Florida／4／2006病毒的8个基因片段构建质粒，获得... 详细信息

目的反向遗传技术是流感病毒疫苗株构建和基因特性研究的重要方法，本研究旨在构建B型流感病毒反向遗传平台，进而拯救B型流感病毒。方法研究中利用含有双启动子的pHW2000为载体，对B／Florida／4／2006病毒的8个基因片段构建质粒，获得8个节段的重组质粒后，共转染293T及MDCK混合细胞，收集上清液及细胞碎片，采用接种鸡胚及细胞传代方法，拯救B型流感病毒。结果研究中发现可以利用该系统拯救B／Florida／4／2006病毒，拯救病毒的血凝滴度为HA128～256／50μl，电镜下重配病毒颗粒多呈球形。结论研究结果表明该系统可用于B型流感病毒的拯救，并可进一步利用该系统构建基因突变病毒，用于B型流感病毒的特性分析和疫苗株的构建。

关键词： B型流感病毒反向遗传重组重配

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2014-2015监测年度中国B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第10期36卷 753-757页

作者：李希妍黄维娟成艳辉隗合江蓝雨谭敏菊肖宁王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的：分析2014—2015流感监测年度我国B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性。方法选择本监测年度中国分离的1386株B型流感病毒,进行生物学耐药检测,检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。结果在检测的1386株B型流感病毒中... 详细信息

目的：分析2014—2015流感监测年度我国B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性。方法选择本监测年度中国分离的1386株B型流感病毒,进行生物学耐药检测,检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。结果在检测的1386株B型流感病毒中,94株Victoria系病毒均为奥司他韦及扎那米韦的敏感株。1292株Yamagata系病毒中,有1株病毒只对奥司他韦敏感性降低,其NA基因存在I221T位点突变；有10株病毒仅对扎那米韦敏感性降低,此10株病毒中有4株病毒NA基因存在D197N氨基酸位点突变；有3株病毒对2种药物的敏感性均降低,此3株病毒的NA基因均具有D197N位点突变；另有1株病毒对奥司他韦敏感性降低,同时又对扎那米韦敏感性高度降低,其NA基因具有A245T位点突变。结论2014—2015流感监测年度我国B型流感病毒中绝大多数病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感,临床上可继续使用此类药物对流感患者进行治疗。应持续进行耐药性监测,密切关注B型流感病毒D197N位点突变情况,及时发现耐药病毒。

关键词： B型流感病毒神经氨酸酶抑制剂敏感性

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中国流感疫苗接种所面临的挑战和应对策略

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第1期36卷 1-2页

作者：舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

本期流感专栏刊出有关流感疫苗研究、生产和应用的4篇文章，其中涉及世界卫生组织推荐的北半球疫苗组分与我国流感流行病毒是否匹配的问题。根据对2014--2015监测年度中国H3N2亚型流感病毒和B型流感病毒病原学特征分析，比较了疫苗株与... 详细信息

本期流感专栏刊出有关流感疫苗研究、生产和应用的4篇文章，其中涉及世界卫生组织推荐的北半球疫苗组分与我国流感流行病毒是否匹配的问题。根据对2014--2015监测年度中国H3N2亚型流感病毒和B型流感病毒病原学特征分析，比较了疫苗株与流行病毒的匹配性。结果显示，世界卫生组织推荐的疫苗株与我国H3N2亚型流行株匹配性不好；在B型流感病毒方面，我国流行的B型Yamagata系病毒与疫苗株匹配较好，但Victoria系病毒与四价疫苗的匹配性不佳。提示应结合我国流行病毒的抗原性和基因特性，选择与我国流行病毒匹配更好的疫苗株用于流感的预防。

关键词：流感疫苗疫苗接种中国 B型流感病毒 Yamagata系 Victoria系世界卫生组织 H3N2亚型

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3种市售消毒剂对人感染高致病性禽流感H5亚型病毒杀灭效果的定量评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第6期36卷 463-467页

作者：董婕薄洪董丽波张烨王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的：评价3种市售消毒剂对人感染高致病性禽流感H5亚型病毒的杀灭效果。方法通过定量悬浮试验来确定消毒剂的有效性,即定量病毒后,使用105半数组织培养感染剂量（ TCID50）的病毒与不同浓度的消毒剂结合,在不同作用时间和有机物存在与... 详细信息

目的：评价3种市售消毒剂对人感染高致病性禽流感H5亚型病毒的杀灭效果。方法通过定量悬浮试验来确定消毒剂的有效性,即定量病毒后,使用105半数组织培养感染剂量（ TCID50）的病毒与不同浓度的消毒剂结合,在不同作用时间和有机物存在与否的情况下,MDCK细胞上终点滴定剩余病毒的活性。混合物加入 MDCK细胞孵育1 h后,换病毒稀释液,继续培养18-20 h,然后用ELISA方法来定量检测病毒的TCID50值。研究人感染高致病性禽流感H5病毒的同时,选择人感染H9N2低致病性禽流感作对照。结果1%的Virkon 消毒剂与100μl含有105 TCID50的病毒液作用1 min,可以将3种病毒的活性降低到检测值以下,即1.0 lgTCID50/100μl；而0.5%Vir-kon液作用1 min,H9N2和 H5N1病毒降低到检测值以下,H5N6病毒滴度降低至1.75 lgTCID50/100μl。当作用时间延长至5 min,除上述两个浓度外,0.25%Virkon液也对部分病毒有杀灭效果。10%、5%和2.5%稀释84消毒剂组在作用1 min后均将3种病毒活性降低到检测值以下。而1.25%稀释的84消毒剂将病毒的活性降至1.25-2.50 lgTCID50/100μl。1%稀释的84消毒剂在作用1 min后,对3种病毒的杀灭效果是无效的,即使将作用时间延长到5 min 作用效果也非常有限。SOLARSEPT消毒液组的原液组,1∶2、1∶4稀释组均将3种病毒活性降低到检测值以下；1∶8稀释组无效,作用时间延长至5 min得到同样结果。用胎牛血清模拟环境污染的有机物,1%的Virkon,10%和5%稀释的84消毒剂,SOLARSEPT消毒液及其50%稀释后的SOLARSEPT消毒液在作用1 min后可以将3种病毒活性降低到检测值以下。将作用时间增加到5 min,病毒的杀灭效果没有明显增加。结论即使在有机物存在的条件下,1%Virkon、10%稀释的84消毒剂以及SOLARSEPT消毒液都可以快速杀灭H5病毒。当消毒剂的杀灭病毒能力被病毒饱和作用后,即使延长作用时间消毒效果也不明显。3种消毒剂对H5亚型及H9亚型病毒的杀灭效果没有显著差异。

关键词：高致病性禽流感 H5亚型消毒剂实验室生物安全 Subtype H5

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基于Avicel-结晶紫染色空斑的中东呼吸综合征冠状病毒感染滴定与中和抗体检测方法

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第1期37卷 62-67页

作者：王文玲黄保英王慧娟赵莉陆柔剑朱娜邓瑶谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、卫生和计划生育委员会医学病毒学与病毒病重点实验室北京102206

目的针对中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV），建立安全、操作简易的空斑试验检测方法。方法将MERS-CoV（EMC/2012）感染Vero或Huh7.5细胞，通过研究MERS-CoV感染后镜下细胞病变与染色... 详细信息

目的针对中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV），建立安全、操作简易的空斑试验检测方法。方法将MERS-CoV（EMC/2012）感染Vero或Huh7.5细胞，通过研究MERS-CoV感染后镜下细胞病变与染色后蚀斑，比较染毒时间（2 d和3 d）以及细胞培养覆盖物[琼脂、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物（Avicel）]对空斑试验的影响，确定MERS-CoV空斑试验适用的细胞类型、染毒时间以及细胞培养覆盖物，并将该方法用于MERS-CoV中和抗体的检测。结果MERS-CoV感染Vero细胞后能形成清晰的病毒空斑；染毒后3 d后能稳定清晰地形成MERS-CoV特异性空斑；微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物覆盖细胞所产生的病毒空斑较琼脂覆盖物更为清晰，操作简易，更易于在BSL-3实验室进行操作；该方法可用于MERS-CoV中和抗体的检测。结论建立了基于Avicel-结晶紫染色技术的适用于BSL-3实验室操作的MERS-CoV空斑试验方法，为MERS-CoV的滴定、中和抗体检测等提供了实验资料。

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒生物安全三级实验室空斑试验 Vero细胞微晶纤维素- 羧甲基纤维素钠复合物中和试验

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高致病性A(H5N8)亚型禽流感病毒NA基因核酸检测方法的建立

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病毒学报 2017年第3期33卷 457-461页

作者：李晓丹张烨薄洪杨磊舒跃龙王大燕中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

建立以Real-time PCR为基础的新型高致病性A(H5N8)亚型禽流感病毒NA基因检测方法。针对2016年6月起频繁暴发的H5N8禽流感疫情,从GenBank和Global Initiative on Sharing All Influenza Data(GISAID)下载2014年以来的H5N8亚型禽流感病毒的NA序列,通过序列比对,在相对保守区域设计适用于实时荧光逆转录聚合酶链式反应(rRT-PCR)的引物和探针。选用28株不同NA亚型的流感病毒进行特异性验证,结果显示本文设计的引物探针组合能够特异性检测高致病性H5N8亚型禽流感病毒的NA基因。灵敏度检测结果显示,本文设计的引物探针组合能检出最低23个拷贝的RNA。本文建立了高致病性H5N8亚型禽流感病毒NA基因特异性荧光定量检测方法,与世界卫生组织(WHO)推荐的A型流感病毒M基因、H5基因检测引物探针的最低检测限一致,可以组合用于H5N8亚型禽流感病毒的检测。

关键词：流感 A(H5N8) 实时荧光逆转录聚合酶链式反应(Real-time RT-PCR)

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基于丙型肝炎病毒结构基因的DNA疫苗初免重组腺病毒疫苗加强免疫小鼠后可诱导交叉保护

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第3期36卷 219-223页

作者：邓瑶管洁殷霄蓝佳明陈红王文谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生和计划生育委员会医学病毒学与病毒病重点实验室北京102206 煤炭总医院中心实验室北京100028

目的探索基于HCV多个靶抗原的新型T细胞疫苗研发策略.方法用表达HCV河北株（1b亚型）结构蛋白（Core,E1,E2）的DNA疫苗与重组腺病毒载体疫苗联合免疫小鼠,并采用ELISPOT与胞内细胞因子染色分析（ICS）方法分析了特异性T细胞免疫应答... 详细信息

目的探索基于HCV多个靶抗原的新型T细胞疫苗研发策略.方法用表达HCV河北株（1b亚型）结构蛋白（Core,E1,E2）的DNA疫苗与重组腺病毒载体疫苗联合免疫小鼠,并采用ELISPOT与胞内细胞因子染色分析（ICS）方法分析了特异性T细胞免疫应答特点与交叉保护效果.结果 DNA疫苗与重组腺病毒疫苗联合免疫小鼠后,针对Core、E1、E2都可产生较强细胞免疫应答;ELISPOT结果表明：联合免疫针对E1的反应最强,明显高于DNA疫苗同源免疫;ICS结果显示：针对E1抗原特异的CD4＋T细胞分泌的TNF-α水平与CD8＋T细胞分泌的IFN-γ水平以及E2抗原特异的CD4＋T细胞与CD8＋T细胞分泌的IFN-γ水平均高于三针DNA疫苗免疫组.在表达2a亚型HCV（JFH1）全长ORF的重组痘苗病毒替代攻击小鼠模型中,复制型DNA疫苗与重组腺病毒联合免疫可表现出交叉保护效应.结论本研究为HCV新型疫苗研制及免疫保护机制研究提供了一定参考.

关键词：丙型肝炎病毒 DNA疫苗腺病毒5型载体疫苗 T细胞应答联合免疫

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天津首例输入性人感染H7N9禽流感病例病原特征分析

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中华预防医学杂志 2017年第7期51卷 647-649页

作者：李晓燕李希妍孔梅徐文体郭丽茹邹明苏旭董晓春周鹏辉天津市疾病预防控制中心病原生物实验室 300011 中国疾病预防控制中心病毒病所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室

2013年3月,上海、安徽发生了急性下呼吸道感染,标本经中国疾病预防控制中心鉴定,确认病原为新型H7N9禽流感病毒[1].截至2016年12月11日,共报告人感染H7N9禽流感实验室确诊病例810例,死亡324例,病死率为40%[2],大部分病例发生于我国华南... 详细信息

2013年3月,上海、安徽发生了急性下呼吸道感染,标本经中国疾病预防控制中心鉴定,确认病原为新型H7N9禽流感病毒[1].截至2016年12月11日,共报告人感染H7N9禽流感实验室确诊病例810例,死亡324例,病死率为40%[2],大部分病例发生于我国华南及华东,以及台湾、香港等地区.天津位于我国华北地区,截至2016年6月11日,未报道过人感染H7N9禽流感病例.本研究对天津首例输入性人感染H7N9禽流感病例病原特征进行了分析,以期为疫情防控提供依据.

关键词：禽流感基因组,病毒突变

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