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病毒学报 2015年第1期31卷 18-23页

作者：李阿茜刘林张硕李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV）结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗... 详细信息

为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV）结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗的杂交瘤细胞株。用免疫荧光法和免疫沉淀方法对制备的单克隆抗体的抗原特异性进行鉴定,并初步进行单抗效价、中和活性及亲和力等功能分析。结果显示,通过细胞融合和克隆化,共筛选出13株稳定分泌抗糖蛋白（Glycoprotein,GP）单抗和7株稳定分泌抗核蛋白（Nucleoprotein,NP）单抗的杂交瘤细胞株。免疫荧光和免疫沉淀鉴定显示获得的单抗有良好的抗原特异性。抗GP单抗中6株针对Gn,7株针对Gc,大部分的间接免疫荧光（Indirect immunofluorescence assay,IFA）滴度在1 280-20 480之间,其中4株抗Gn单抗具有中和活性。获得的7株抗NP单抗均与NP特异性结合,IFA滴度范围在5 120-20 480,均无中和活性。此外,经非竞争ELISA检测的两株抗GP单抗（1C8和1G8）均有较高亲和力。本研究为SFTS诊断方法的发展及SFTSV致病机制研究奠定了基础。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 核蛋白(NP) 糖蛋白(GP) 单克隆抗体

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2013～2014年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析

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病毒学报 2015年第1期31卷 30-35页

作者：李希妍成艳辉谭敏菊黄维娟郭俊峰隗合江肖宁蓝雨赵翔杨磊王钊王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为分析2013-2014流感监测年度中国大陆地区H3N2亚型流感病毒的抗原性和基因变异情况,本文选择了本监测年度中国分离的H3N2亚型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析,利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用邻位相临法（Neighbor-J... 详细信息

为分析2013-2014流感监测年度中国大陆地区H3N2亚型流感病毒的抗原性和基因变异情况,本文选择了本监测年度中国分离的H3N2亚型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析,利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用邻位相临法（Neighbor-Joining,N-J）方法进行种系进化分析,分析我国H3N2亚型流感病毒的变异情况,进一步比较其与疫苗株的匹配性。抗原分析显示,本监测年度H3N2亚型流感病毒大部分为疫苗株A/Victoria/361/2011细胞株的类似株（99.6%）,但以A/Texas/50/2012鸡胚株为参考抗原,只有15.1%为类似株,仅有11.9%与中国流行株的鸡胚分离株A/Shanghai-Changning/1507/2012抗原性类似。HA基因特性分析显示我国毒株均位于同一大分支,NA基因没有发现与耐药性相关的氨基酸位点突变。总之,2013-2014流感监测年度我国H3N2亚型流感病毒在流行过程中未发生明显变异,但病毒在鸡胚中传代会导致关键氨基酸位点变异。应及时分析并发现我国病毒的抗原性和基因特性变异情况,推选出更适合我国的疫苗株。

关键词：流感病毒 H3N2亚型抗原性基因特性

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发热伴血小板减少综合征病毒灭活病毒的纯化及免疫原性初步研究

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病毒学报 2015年第3期31卷 239-244页

作者：李阿茜刘林张硕李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了解纯化后灭活发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的免疫原性,本研究通过超滤浓缩和分子筛层析相结合的方法对灭活的SFTSV进行纯化,采用Western blot和SDS-PAGE对灭活病毒... 详细信息

为了解纯化后灭活发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的免疫原性,本研究通过超滤浓缩和分子筛层析相结合的方法对灭活的SFTSV进行纯化,采用Western blot和SDS-PAGE对灭活病毒的纯化样品进行分析和鉴定,采用双抗夹心ELISA方法对其中糖蛋白(Glycoprotein,GP)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)的抗原含量进行检测。浓缩纯化的SFTSV灭活病毒,经电镜观察并通过BCA法测定其总蛋白浓度。然后,将纯化的灭活SFTSV按两种不同的免疫程序免疫新西兰兔,评价免疫原性和比较免疫效果。结果显示,SFTSV灭活并超滤浓缩后,分子筛层析可观察到两个洗脱峰,其中之一为灭活病毒颗粒,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法分析均可检测到GP和NP抗原,而另一洗脱峰主要成分则为NP。浓缩后的纯化病毒纯度达90%以上,总蛋白浓度约为1.1mg/mL,且具有典型的布尼亚病毒电镜形态。纯化的SFTSV灭活病毒免疫实验动物后,可在血清中检出高滴度病毒特异性IgG和中和抗体,但抗体滴度受免疫程序的影响,0d、14d和28d天三针程序免疫动物的效果明显优于0d、7d和28d免疫程序组。本研究显示了灭活SFTSV培养液中除完整病毒颗粒外,还含有大量游离的NP,经分子筛层析纯化可获得高纯度灭活病毒,同时明确了纯化的SFTSV灭活病毒具有良好的免疫原性,可诱导产生高滴度中和抗体和病毒特异IgG抗体,可为灭活病毒疫苗的进一步研究提供重要的线索。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 灭活病毒分子筛层析纯化免疫原性

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2015年中国大陆流行性感冒流行特征分析

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热带病与寄生虫学 2016年第1期14卷 3-5+2页

作者：陈涛杨静汪立杰祝菲成艳辉李越严文婧王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所感染性疾病诊治协同创新中心国家卫生计生委医学病毒和病毒病重点实验室

目的对2015年流行性感冒的监测结果及流行特征进行分析总结,对2016的流行趋势进行预判。方法统计中国流感监测信息系统以及突发公共卫生事件信息管理系统2015年全年中国大陆地区的流感样病例(ILI)监测数据以及流感样病例爆发疫情数据。... 详细信息

目的对2015年流行性感冒的监测结果及流行特征进行分析总结,对2016的流行趋势进行预判。方法统计中国流感监测信息系统以及突发公共卫生事件信息管理系统2015年全年中国大陆地区的流感样病例(ILI)监测数据以及流感样病例爆发疫情数据。结果 2015年夏季南方出现了流行高峰,北方维持在低水平,均为A(H3N2)亚型占绝对优势。南北方省份均在12月份开始相继进入2015~2016冬春季流感流行季节,甲型H1N1、A(H3N2)和B型共同流行。结论预计2016年2月下旬,流感活动水平将达到峰值,春夏季中国大陆省份将以甲型H1N1、A(H3N2)和B型流感共同流行,但以甲型H1N1流感为主要流行株。

关键词：中国大陆流行性感冒监测流行特征

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2014-2015监测年度中国B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性

2014-2015监测年度中国B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性

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中华医学会2016年全国临床微生物与免疫学术年会暨第十二次全球华人临床微生物学与感染症学术年会

作者：李希妍黄维娟成艳辉隗合江蓝雨谭敏菊肖宁王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室 102206

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2013～2014年流感流行季节中国大陆B型流感病毒对NAI的敏感性

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病毒学报 2015年第2期31卷 152-156页

作者：黄维娟李希妍谭敏菊隗合江成艳辉郭俊峰王钊肖宁王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了解近期我国大陆流行的B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性,本文对2013年10月至2014年3月流感流行季节期间中国大陆分离的884株B型流感病毒进行了生物学耐药监测。884株B型流感毒株中所有毒株均对oseltamivir敏感,检测到2... 详细信息

为了解近期我国大陆流行的B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性,本文对2013年10月至2014年3月流感流行季节期间中国大陆分离的884株B型流感病毒进行了生物学耐药监测。884株B型流感毒株中所有毒株均对oseltamivir敏感,检测到2株(0.23%)对zanamivir敏感性降低的毒株,其他毒株均对zanamivir敏感。其中38株B/Victoria系毒株中B/Shandong-Kuiwen/1195/2014对zanamivir的IC50值为1.78nM,较药物敏感参考株的IC50平均值(0.34nM)高5.12倍,表明对zanamivir的敏感性降低,在NA基因上没有发现存在已知耐药位点变异,但有D35G,N59D和S402T(N2编码分别为39、64和399位)氨基酸位点的变异;846株B/Yamagata系毒株中B/Hunan-Lingling/350/2013对zanamivir的IC50值为2.72nM,较药物敏感参考株的IC50平均值(0.34nM)高7.99倍,表明对zanamivir的敏感性降低,NA基因发生了D197N(N2编码为198位)氨基酸位点的变异。根据结果可以推断目前我国流行的B型流感毒株对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感。

关键词： B型流感病毒神经氨酸酶抑制剂 IC50值敏感性

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2011-2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物的敏感性

2011-2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物的...

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2016年新形势下预防接种问题、对策与展望学术论坛

作者：黄维娟谭敏菊赵翔成艳辉李希妍郭俊峰隗合江肖宁王钊王大燕舒跃龙 02206 北京中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心世界卫生组织流感参比和研究合作中心卫生部医学病毒和病毒病重点实验室

目的：分析2011—2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物(NAI)的敏感性. 方法：所有待检流感毒株来自中国流感监测网络,该网络覆盖中国31个省份的408家网络实验室和554家哨点医院.本研究挑选了2011年1月1日至2012年1... 详细信息

目的：分析2011—2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物(NAI)的敏感性. 方法：所有待检流感毒株来自中国流感监测网络,该网络覆盖中国31个省份的408家网络实验室和554家哨点医院.本研究挑选了2011年1月1日至2012年12月31日采样分离的毒株,共1903株,其中经国家流感中心复核鉴定为甲型H3N2亚型流感病毒的毒株共721株,采用化学发光法检测其对奥司他韦和扎那米韦的敏感性.药物敏感参考毒株为A/Washington/01/2007(119E),奥司他韦耐药参考毒株为A/Texas/12/2007(E119V).采用t检验比较不同年份毒株对NAI敏感性的差异. 结果：A/Washington/01/2007对奥司他韦和扎那米韦的半数抑制浓度(IC50)值分别为(0.10±0.02)、(0.30±0.05)nmol/L,A/Texas/12/2007对奥司他韦和扎那米韦的IC50值分别为(4.27±1.60)、(0.20±0.03)nmol/L.721株甲型H3N2亚型流感病毒中,2011年132株,2012年589株.2011和2012年的甲型H3N2亚型毒株对奥司他韦的IC50值范围分别为0.04～0.62、0.02～0.95nmol/L,均在A/Washington/01/2007的IC50值10倍(1.00nmol/L)以内.2011和2012年的甲型H3N2亚型毒株对扎那米韦的IC50值范围分别为0.12～0.80、0.04～0.72nmol/L,均在A/Washington/01/2007的IC50值10倍(3.00nmol/L)以内. 结论：2011—2012年检测的中国甲型H3N2亚型流感毒株均对奥司他韦和扎那米韦敏感.

关键词：甲型H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物敏感性

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表达丙型肝炎病毒(HCV)截短型NS3与core融合抗原的重组腺病毒疫苗在小鼠中的免疫原性与保护效果分析

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病毒学报 2015年第1期31卷 7-13页

作者：管洁邓瑶陈红杨扬文波谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 煤炭总医院中心实验室北京100028

为研发安全广谱有效的丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)T细胞疫苗,本研究构建了表达HCV截短型非结构蛋白3(Nonstructural protein 3,NS3)与核心蛋白(core)融合抗原的重组腺病毒疫苗。体外免疫荧光及蛋白印迹实验表明该融合抗原可有... 详细信息

为研发安全广谱有效的丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)T细胞疫苗,本研究构建了表达HCV截短型非结构蛋白3(Nonstructural protein 3,NS3)与核心蛋白(core)融合抗原的重组腺病毒疫苗。体外免疫荧光及蛋白印迹实验表明该融合抗原可有效表达;小鼠免疫结果表明该重组腺病毒疫苗除了激发抗原特异的抗体反应外,还可激发较强的针对NS3抗原特异的T细胞免疫应答。该T细胞免疫应答主要表现为IFN-γ+与TNF-α+CD4+T细胞亚群。采用异型(JFH1,2a型)HCV重组痘病毒接种小鼠进行保护效果分析,与对照组相比,表达截短型NS3与core融合抗原的重组腺病毒疫苗2针免疫后可产生明显的交叉免疫保护。本研究为进一步研究HCV免疫保护机制及新型疫苗研制提供了参考。

关键词：丙型肝炎病毒疫苗重组腺病毒非结构蛋白3 T细胞应答小鼠

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2009～2013年我国活禽市场环境样本中禽流感病毒的检测

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病毒学报 2015年第6期31卷 615-619页

作者：张烨李晓丹邹淑梅薄洪董丽波高荣保王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流行性感冒室卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了解中国活禽市场环境样本中禽流感病毒分布情况,对全国2009~2013年采自活禽市场的环境样本进行流感病毒核酸检测,并利用无特殊致病原鸡胚（SPF鸡胚）对A型流感病毒核酸阳性标本进行病毒分离。结果显示,环境标本中禽流感病毒核酸阳性... 详细信息

为了解中国活禽市场环境样本中禽流感病毒分布情况,对全国2009~2013年采自活禽市场的环境样本进行流感病毒核酸检测,并利用无特殊致病原鸡胚（SPF鸡胚）对A型流感病毒核酸阳性标本进行病毒分离。结果显示,环境标本中禽流感病毒核酸阳性率的波动呈明显的季节性趋势,冬春季节核酸检测阳性率较高;我国南方地区活禽市场环境样本的禽流感病毒核酸阳性率高于北方。市场中清洗禽类的污水和宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭样本核酸阳性率高于其它类型的样本。2009~2013年环境样本中分离到的禽流感病毒以H5和H9亚型为主,2013年之前H5亚型多于H9亚型,而2013年H9亚型超过了H5亚型。本研究表明,对城乡活禽市场中禽流感病毒的实时监测具有重要的公共卫生意义,可为我国人感染禽流感病毒的防控和预测预警提供依据。

关键词：禽流感病毒流行活禽市场

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2010年江西省急性出血性结膜炎病原体鉴定及基因进化分析

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病毒学报 2015年第3期31卷 251-257页

作者：严冬梅熊英张勇杨倩张曙霞龚甜祝双利王东艳朱晖许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206 江西省疾病预防控制中心南昌330029 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

为鉴定引起2010年江西省急性出血性结膜炎（Acute hemorrhagic conjunctivitis,AHC）疫情的病原体,并对其进行基因进化分析,本研究采集了20份门诊AHC患者眼结膜拭子,对其进行病毒分离,随后通过逆转录-聚合酶链式反应（Reverse transcrip... 详细信息

为鉴定引起2010年江西省急性出血性结膜炎（Acute hemorrhagic conjunctivitis,AHC）疫情的病原体,并对其进行基因进化分析,本研究采集了20份门诊AHC患者眼结膜拭子,对其进行病毒分离,随后通过逆转录-聚合酶链式反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）方法分别检测阳性分离物中肠道病毒70型（Human enterovirus type 70,EV70）、柯萨奇病毒A24变异株（Coxsackievirus A24variant,CV-A24v）和腺病毒。并对CV-A24v分离株进行VP1区和3C区全序列测定,分析其与全球流行CV-A24v的基因进化关系。20份标本中有10份病毒分离阳性,PCR检测证明引起本次AHC流行的病原体为CV-A24v。基于3C区构建的基因进化树表明10株江西CV-A24v与全球2010年后分离到的其它CV-A24v同属于GenotypeⅣ基因型的Cluster 5群（GⅣ-C5）,而且在GⅣ-C5内江西CV-A24v又分属于A和B两个传播链。基于VP1区构建的基因进化树将全球2000年后分离到的CV-A24v分成5组Group1~5（G1~5）,江西CV-A24v属于G5,这些毒株在VP1区进化树中同样分属于A和B两个传播链。本研究表明2010年至少有两个CV-A24v传播链在江西同时流行。VP1区基因进化树对全球2000年后分离到的CV-A24v的组群划分与3C区基本一致,而且与3C区呈现同样显著的年代聚集性。

关键词：柯萨奇病毒A24变异株急性出血性结膜炎基因进化分析

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