【目的】建立人IFN‐λ1‐3型mRNA实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT‐PCR)检测方法。【方法】根据人IFN‐λ1‐3型mRNA的基因序列合成特异性引物及探针,用体外转录方法制备IFN‐λ1‐3型的mRNA标准品,建立人IFN‐λ1‐3型mRNA qRT‐PCR检测方法。【结果】IFN‐λ1‐3型RNA标准品与对应的CT 值有良好的线性关系;扩增效率均在90%~100%之间;灵敏度分别是:1×10^0 co pies/μL、1×10^1 co pies/μL、1×10^1 co pies/μL ;变异系数均小于2%;各型间交叉反应不明显。【结论】本研究建立的IFN‐λ1‐3型mRNA qRT‐PCR检测方法灵敏度高,具有良好的重复性及特异性。
为研究有效的通用流感疫苗,解决流感疫苗株定期更换的难题。本课题利用乙肝病毒核心抗原(Hepatitis B core atigen,HBcAg)蛋白可以形成病毒样颗粒(Virus like larticle,VLP)的特点,将高致病性人禽流感A/Hubei/1/2010(H5N1)HA2的76...
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为研究有效的通用流感疫苗,解决流感疫苗株定期更换的难题。本课题利用乙肝病毒核心抗原(Hepatitis B core atigen,HBcAg)蛋白可以形成病毒样颗粒(Virus like larticle,VLP)的特点,将高致病性人禽流感A/Hubei/1/2010(H5N1)HA2的76~130氨基酸(Amino acid,AA)线性保守区(Linear conserved rgion,LCR)与HBcAg融合表达,并对其进行免疫学评价。其结果显示,优化后的LCR-HBc片段能够在pET30a大肠杆菌原核表达系统中大量表达。将纯化后的融合蛋白免疫小鼠,发现LCR-HBc疫苗组H5N1血凝素(Hemoglutination,HA)特异性IgG抗体滴度可达到1∶12 800以上。对免疫后小鼠的A/PR/8/34(PR8)致死剂量攻毒实验结果显示,LCR-HBc疫苗组肺病毒载量显著低于对照组(P〈0.01),对小鼠的保护率为50%。本研究的开展为流感通用型疫苗的研制提供科学线索。
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