检索结果-内蒙古大学图书馆

山东大学学报（医学版） 2005年第8期43卷 661-666页

作者：郭岚王健伟韩金祥于修平洪涛山东大学医学院病原生物学研究所山东济南250012 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室山东济南250012

目的:探讨SARS冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spikeprotein,S蛋白)与钙调蛋白结合肽(calmodulinbindingpeptide,CBP)-蛋白A串连亲和纯化(tandemaffinitypurification,TAP)标签在Vero细胞内的融合表达及亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。方法:从质粒pGEM-4Z-S中扩增S片段,在5'端加入Kozak序列,并与TAP标签基因共同插入pcDNA3.1(-)中,构建出真核表达载体pcDNA3.1-S-TAP(C)。将构建好的质粒瞬时转染Vero细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光及Western-blotting技术检测融合蛋白的表达及亚细胞定位。结果:成功构建出真核表达载体pcD-NA3.1-S-TAP(C),瞬时转染Vero细胞后S-CBP-蛋白A融合蛋白[S-TAP(C)]得到表达,重组痘苗病毒vTF7-3可有效增强该融合蛋白的表达水平,且检测到S-TAP(C)融合蛋白表达于细胞膜上。结论:S蛋白与TAP标签融合蛋白表达于细胞膜上,且vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高。

关键词： SARS冠状病毒刺突蛋白 TAP标签 Vero细胞表达

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两种PCR方法对检测A组轮状病毒膜芯片杂交结果的影响

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生物技术 2005年第3期15卷 40-43页

作者：黄海燕韩金祥王健伟朱波山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省病毒学研究所山东省医学病毒学重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

A组轮状病毒(rotavirus,RV)是导致全世界婴幼儿腹泻的最主要病原,危害巨大。拟用RT-巢式PCR技术对A组RV的保守序列进行高度扩增,通过同本室自制的膜芯片杂交,实现对该病毒的检测。分别采用对称PCR和不对称PCR扩增,均可得到扩增的目的片... 详细信息

A组轮状病毒(rotavirus,RV)是导致全世界婴幼儿腹泻的最主要病原,危害巨大。拟用RT-巢式PCR技术对A组RV的保守序列进行高度扩增,通过同本室自制的膜芯片杂交,实现对该病毒的检测。分别采用对称PCR和不对称PCR扩增,均可得到扩增的目的片段。对称式扩增产物杂交结果不理想。而不对称式扩增得到了大量待检单链产物,同膜芯片杂交获得了理想的杂交结果。显著地提高了对A组RV杂交检测的灵敏度。表明不对称式PCR扩增是一种制备用于芯片杂交大量单链产物的理想方法,尤其是针对富含AT的核酸检测区域。

关键词：不对称PCR 轮状病毒 A组芯片杂交

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膜芯片检测A组轮状病毒的初步研究

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生物技术通讯 2005年第2期16卷 138-140页

作者：黄海燕韩金祥王健伟山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东济南250062 山东省病毒学研究所山东省医学病毒学重点实验室山东济南250062 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

建立表面带正电荷的尼龙膜为基片的基因芯片,采用RT-semi-nestedPCR方法,对A组轮状病毒RNA实现高度扩增,并通过5'端带地高辛标记的上游引物实现扩增产物的标记。通过同膜芯片上探针的杂交和免疫显色,实现对A组轮状病毒的检测。结果... 详细信息

建立表面带正电荷的尼龙膜为基片的基因芯片,采用RT-semi-nestedPCR方法,对A组轮状病毒RNA实现高度扩增,并通过5'端带地高辛标记的上游引物实现扩增产物的标记。通过同膜芯片上探针的杂交和免疫显色,实现对A组轮状病毒的检测。结果表明,膜芯片对探针的固定效果、杂交吸脱和检测结果可靠,空白对照和阴性对照均为阴性,探针均显示为阳性信号,并且信号强弱与探针浓度关系不大,而主要与探针本身同互补链的结合相关。以上结果说明已经初步建立了快速检测A组轮状病毒的膜基因芯片检测技术。

关键词：基因芯片 A组轮状病毒尼龙膜腹泻基因诊断

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线虫抗凝肽的研究进展

线虫抗凝肽的研究进展

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华东六省一市生物化学与分子生物学2005年交流会

作者：姜月华王海萍王健伟韩金祥洪涛山东省病毒学研究所暨山东省医学病毒学重点实验室/卫生部生物技术药物重点实验室 250062 山东省病毒学研究所暨山东省医学病毒学重点实验室/卫生部生物技术药物重点实验室 250062 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 100052

线虫抗凝肽(NAP)是自犬钩口线虫成虫分离得到的一系列具有抗凝作用的小分子多肽类物质,含有约为75～85个氨基酸,拥有22﹪的共同序列.NAP抗凝作用强,药效持久,成本低,临床应用前景好,现已进入Ⅲ期临床试验评估阶段.本文就其研究进展做一... 详细信息

线虫抗凝肽(NAP)是自犬钩口线虫成虫分离得到的一系列具有抗凝作用的小分子多肽类物质,含有约为75～85个氨基酸,拥有22﹪的共同序列.NAP抗凝作用强,药效持久,成本低,临床应用前景好,现已进入Ⅲ期临床试验评估阶段.本文就其研究进展做一综述.

关键词：线虫抗凝肽凝血因子Ⅶ 凝血因子X 临床试验

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轮状病毒检测技术

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中国生物工程杂志 2004年第5期24卷 1-4页

作者：王志宇王健伟何深一韩金祥洪涛山东省病毒学研究所山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052.山东大学医学院济南250012 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 山东大学医学院

轮状病毒是人和动物急性腹泻的重要病原 ,对轮状病毒进行快速、准确的检测对于疾病监测和疫情控制极为重要。从病原学、免疫学以及基因检测三方面 ,总结了轮状病毒检测技术的发展状况 ,重点介绍了较为成熟的免疫学技术 ,最新发展的实时... 详细信息

轮状病毒是人和动物急性腹泻的重要病原 ,对轮状病毒进行快速、准确的检测对于疾病监测和疫情控制极为重要。从病原学、免疫学以及基因检测三方面 ,总结了轮状病毒检测技术的发展状况 ,重点介绍了较为成熟的免疫学技术 ,最新发展的实时荧光定量PCR、核酸序列依赖的扩增等分子生物学新技术。

关键词：轮状病毒检测急性腹泻病原疾病监测

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