检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2024年第2期40卷 225-232页

作者：毛彤瑶张鹏姜苏芮李丹地段招军传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝... 详细信息

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝胶电泳、多酶切、测序等方法鉴定重组质粒正确性;重组质粒转染HEK293A细胞获得病毒毒种AdV5-S1-N并扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,有限稀释分析法测病毒滴度,Western blot方法验证AdV5-S1-N重组腺病毒S1-N融合蛋白表达情况;将AdV5-S1-N疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,第14d采集颌下静脉血,ELISA法检测血清针对S1和N蛋白抗原的特异性抗体滴度。成功获得滴度为9.45×10^(11)IU/mL的重组腺病毒AdV5-S1-N。Western blot结果发现:AdV5-S1-N感染细胞后,融合蛋白可正常表达,与抗S1蛋白及抗N蛋白抗体均有特异结合。ELISA结果显示免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对S1和N蛋白的特异性IgG抗体。应用复制缺陷型腺病毒载体成功获得融合表达SARS-CoV-2 Omicron突变株S1-N蛋白的高滴度重组腺病毒,该重组病毒能在小鼠诱导针对S1和N蛋白的特异性免疫应答,为后续深入研究和评价该候选疫苗奠定了基础。

关键词：新型冠状病毒腺病毒载体疫苗体液免疫融合表达

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人呼吸道合胞病毒监测体系的研究现状

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中华预防医学杂志 2024年第7期58卷 967-982页

作者：夏百成从兵兵王慧玲马士豪宋金华王娜张燕李有传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所麻疹室北京102206 南京医科大学公共卫生学院国家疫苗研发创新平台南京211166

为实时监测我国不同地理区域流行的HRSV流行特征和疾病负担,进一步制定更加精准有效的预防干预策略,中国迫切需要建立覆盖全国的HRSV实时监测系统。本研究结合国内外HRSV监测研究及其体系现状和我国现有的监测框架,根据监测目的不同,并... 详细信息

为实时监测我国不同地理区域流行的HRSV流行特征和疾病负担,进一步制定更加精准有效的预防干预策略,中国迫切需要建立覆盖全国的HRSV实时监测系统。本研究结合国内外HRSV监测研究及其体系现状和我国现有的监测框架,根据监测目的不同,并考虑到实施的可行性,提出适用于我国的HRSV监测模式,为实时监测HRSV流行动态变化,及时开展风险研判和预测预警,进一步了解我国HRSV的疾病负担,也为我国HRSV感染相关疾病的诊断、防控,以及疫苗和药物的研发、使用和评价提供重要的科学技术支撑。

关键词：呼吸道合胞病毒监测预防控制

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我国2019—2023年登革热报告病例流行病学特征

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中国热带医学 2024年第8期24卷 925-930页

作者：李卓威黄晓霞田婷婷李阿茜杜珊珊何广学李建东传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 滨州医学院公共卫生学院山东烟台264003

目的分析我国2019—2023年登革热报告病例的流行病学特征,为登革热防控工作提供科学依据。方法利用Joinpoint回归、SaTScan及ArcGIS等软件对中国疾病预防控制信息系统(NNDRS)中报告的登革热病例数时间、空间和人间分布特征及发展趋势进... 详细信息

目的分析我国2019—2023年登革热报告病例的流行病学特征,为登革热防控工作提供科学依据。方法利用Joinpoint回归、SaTScan及ArcGIS等软件对中国疾病预防控制信息系统(NNDRS)中报告的登革热病例数时间、空间和人间分布特征及发展趋势进行分析。结果我国2019—2023年共报告病例43095例,平均报告发病率为0.61/10万,年报告发病率波动显著(AAPC=-3.16%,95%CI:-54.16%~91.47%),主要集中在2019年和2023年,约占近5年总报告病例数的96.83%。各年龄组人群均可发病,30~<40岁年龄组病例占22.6%。全年均有病例发生,6月份开始快速上升,高峰期集中在8—10月份,为34780例(RR=12.44,LLR=29262.52,P<0.05)。疫情特征以输入引发本地传播为主,输入病例主要来源于东南亚地区(占86.56%),其中柬埔寨3284例(占46.11%)、缅甸1851例(占25.99%)为病例主要来源国家。不同年份有显著不同,西南地区、华南地区、华东地区发生本地传播疫情风险高,高发地区主要分布在云南和广东,疫情高峰期持续时间受本地传播疫情早期及时性发现影响,疫情峰值与有防控措施落实有效性有关,疫情规模受境外输入压力和本地疫情防控措施落实能力影响。结论随着全球登革热传播日益上升的趋势,我国发生登革热本地传播疫情风险增加,宜加强早期疫情主动监测和做好本地传播疫情发生后预防控制方案、人员、技术和物质的准备,因地制宜探索跨境流动人员的管理,及时进行风险评估,有效降低输入引发本地传播疫情风险。

关键词：登革热流行病学特征发病时空分析境外输入中国

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人偏肺病毒假病毒阳性标准品的制备与鉴定

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病毒学报 2024年第6期40卷 1263-1273页

作者：郑诗源黄益曼孟小草贺佳阳宋敬东麻粉莲郑丽舒中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京100052 中国医科大学公共卫生学院沈阳110122

为制备一种安全、有效的人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)假病毒阳性标准品,并用于核酸检测的质量控制,本研究对335条HMPV全基因序列比对分析,选择HMPV基因表达量高且进化较为保守的N基因构建重组假病毒颗粒。合成全长1185 bp的... 详细信息

为制备一种安全、有效的人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)假病毒阳性标准品,并用于核酸检测的质量控制,本研究对335条HMPV全基因序列比对分析,选择HMPV基因表达量高且进化较为保守的N基因构建重组假病毒颗粒。合成全长1185 bp的N基因序列并与CD513B载体进行重组连接,采用第三代慢病毒包装体系构建HMPV假病毒颗粒,超速离心浓缩后感染HEK293T细胞,RT-qPCR核酸检测N基因和透射电镜观察鉴定重组假病毒颗粒,确定假病毒阳性标准品使用浓度,进一步评价阳性标准品的热稳定性和均一性。研究结果显示,包装获得的HMPV假病毒颗粒能够感染HEK293T细胞,假病毒颗粒为圆形或椭圆形病毒样结构,直径在150~200 nm之间,并带有G蛋白刺突。HMPV假病毒稀释10^(3)倍后Ct值最适于进行核酸检测,并且均一性和稳定性可达到阳性标准品要求。本研究成功构建了含有HMPV N基因全长的假病毒颗粒,可作为核酸检测方法的阳性标准品,实现HMPV核酸提取和核酸检测过程的全程质量控制。

关键词：人偏肺病毒假病毒阳性标准品

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G6P型牛轮状病毒的分离培养及鉴定

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中国人兽共患病学报 2024年第2期40卷 134-139页

作者：王铭月张锦华章青孔翔羽王宏孙晓曼李丹地庞立丽段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(... 详细信息

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化。绘制病毒生长动力学曲线。结果分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL。VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒。PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化。电镜检测到典型的轮状病毒颗粒。病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6 h已经开始复制。结论本研究成功分离到G6P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考。

关键词：轮状病毒 G6P[1] 分离噬斑实验纯化序列分析

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人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的建立与初步应用

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中华预防医学杂志 2024年第7期58卷 959-966页

作者：张丽李海曹蕾胡宏俏王娜李海鑫江洁毛乃颖李晓梅张燕山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院济南250117 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素... 详细信息

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素进行优化。验证该方法的重复性,并与传统PRNT验证其相关性。利用优化的PRNT方法检测BALB/c小鼠血清(融合蛋白肌肉注射免疫)对HRSV A和B亚型的中和抗体滴度。结果Palivizumab的表达量约为50 mg/L。PRNT的最佳工作条件为:培养细胞为HEp-2细胞,细胞培养时间为2 d,最佳固定通透方式为4%(V/V)多聚甲醛室温固定15 min后0.2%(V/V)Triton X-100通透15 min,去掉封闭步骤。优化后该方法的重复性验证总体变异系数均<15%,与传统PRNT呈现良好的线性关系,Spearman相关系数rs高达0.983。在检测小鼠血清对HRSV A亚型long株和B亚型9320株的中和抗体滴度时,融合蛋白联合AlOH和CpG佐剂诱导小鼠产生的中和抗体滴度最高。结论本研究建立的HRSV中和抗体检测方法快速、可重复、高通量,能够适用于A、B亚型HRSV的中和抗体检测。

关键词：人呼吸道合胞病毒免疫染色噬斑减少中和实验中和抗体

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人GⅡ.14诺如病毒VLP抗原性及组织血型抗原结合特征

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病毒学报 2024年第4期40卷 705-715页

作者：欧阳瑄泽柴鹏弟宋敬东靳淼李利利李金松孙晓曼段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730020 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

本研究旨在制备人GⅡ.14诺如病毒的(Norovirus,NoV)病毒样颗粒(Virus⁃like particle,VLP),探索其抗原性与组织血型抗原结合的特征。利用杆状病毒系统表达人GⅡ.14 NoV VP1蛋白,通过超速离心和分子筛层析纯化VLP;将VLP免疫动物制备兔多... 详细信息

本研究旨在制备人GⅡ.14诺如病毒的(Norovirus,NoV)病毒样颗粒(Virus⁃like particle,VLP),探索其抗原性与组织血型抗原结合的特征。利用杆状病毒系统表达人GⅡ.14 NoV VP1蛋白,通过超速离心和分子筛层析纯化VLP;将VLP免疫动物制备兔多抗血清,通过免疫印迹(Western blot,WB)、酶联免疫吸附(ELISA)进行抗原性评价及多抗功能验证;利用唾液结合实验检测人GⅡ.14 VLP的糖结合特征;通过蛋白序列及结构比较分析GⅡ.14 P蛋白潜在的糖结合位。纯化获得人GⅡ.14 VP1蛋白,电镜观察显示可以形成结构较为均一的VLP;制备的兔多抗能与GⅡ.14 VLP特异性结合,与检测的其他基因型VLP没有交叉反应;唾液结合实验表明GⅡ.14 VLP与人A/B/O/AB型别唾液都有较好的结合;序列和结构分析显示GⅡ.14 P蛋白模拟结构与GⅡ.9最为接近,具有与GⅡ.9以及流行株GⅡ.4等相似的潜在糖结合区。本研究表明GⅡ.14具有较为广泛的唾液结合特性,通过序列比对和结构学方法分析了GⅡ.14潜在的受体结合机制,为不同型别NoVs的流行监测提供了更多依据。

关键词：诺如病毒病毒样颗粒组织血型抗原

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重组呼吸道合胞病毒G蛋白保守域的腺病毒载体疫苗的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第5期38卷 497-505页

作者：石艺柴鹏弟段招军章青孔翔羽王宏庞立丽李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守... 详细信息

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守域(Gbcc和Gacc)的重组Ad5载体质粒(Ad5-Gbcc-Gacc)并转染HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gbcc-Gacc;通过多酶切鉴定病毒Ad5-Gbcc-Gacc的基因组,用Western blot验证Gbcc-Gacc基因的表达水平;重组腺病毒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠1次,在第6周用RSV Long毒株对小鼠以滴鼻的方式进行攻毒。用酶联免疫吸附试验(Elisa)检测和评价免疫小鼠血清IgG及抗体亚型,用微中和检测的方法测定中和抗体水平,同时每天记录小鼠攻毒前后的体重,并检测小鼠肺组织的病理变化、肺和鼻组织中RSV病毒拷贝数。结果Western blot及多酶切鉴定结果与预期相符,表明重组腺病毒拯救成功。Ad5-Gbcc-Gacc在小鼠体内可以诱导较高滴度的特异性IgG、中和抗体水平及Th1/Th2平衡的免疫反应。与未免疫小鼠比较,经Ad5-Gbcc-Gacc免疫小鼠攻毒后肺部只有轻微病理损伤,且肺部及鼻甲的病毒拷贝数降低。结论Ad5-Gbcc-Gacc具备良好的免疫原性,并能对RSV感染小鼠有一定的保护作用,为进一步研制基于G蛋白的RSV疫苗奠定了基础。

关键词：腺病毒载体呼吸道合胞病毒 G蛋白中央保守域疫苗

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2018-2023年新疆维吾尔自治区风疹流行病学特征及病毒基因特征分析

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病毒学报 2024年第2期40卷 374-382页

作者：玛合木提江·库尔班钱程凯赛尔·吾斯曼孙璐阿依波塔·孜那西朱贞新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心免疫规划所乌鲁木齐830011 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室WHO西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

为了解2018-2023年新疆维吾尔自治区(以下简称新疆)风疹流行病学特征以及风疹病毒(Rubella virus,RuV)基因特征,本研究整理和汇总2018-2023年新疆风疹发病数据,采集2022年临床标本开展核酸检测和病毒分离,并对分离株进行测序,获得其靶... 详细信息

为了解2018-2023年新疆维吾尔自治区(以下简称新疆)风疹流行病学特征以及风疹病毒(Rubella virus,RuV)基因特征,本研究整理和汇总2018-2023年新疆风疹发病数据,采集2022年临床标本开展核酸检测和病毒分离,并对分离株进行测序,获得其靶基因序列(位于E1基因的739个靶核酸片段,E1-739)。基于E1-739,将本研究RuV株与WHO基因分型代表株以及已报道的1E和2B基因亚型代表株构建系统发育树,鉴定其基因型/亚型。同时,与同时期我国其他省份流行RuV代表株进行比对,了解新疆流行RuV的分子差异。结果显示,2018-2023年,新疆共计报告风疹病例599例,除外2019年风疹发病有小幅回升(414例,1.66/10万),其余年份发病率均维持在较低水平(年均发病率为0.17/10万),并在2023年降低到了历史最低水平(8例,0.03/10万);2018-2023年间,病例主要集中在北疆的阿勒泰和塔城等地区;病例年龄分布显示,2018年和2021-2023年间,<10岁儿童病例占比均较高(52.8%~62.5%),而2019年和2020年则以10-19岁年龄组人群为主(72.4%和51.9%)。病毒学监测数据显示,2022年从新疆4个地(州、市)共获得7株RuV病毒株的靶基因,分属于1E-L2(6株)和2B-L2c(1株),与同期我国其他省份流行的RuV病毒株具有较高的亲缘性。本研究为新疆地区优化风疹防控策略提供了基础科学数据。

关键词：风疹流行病学基因特征新疆维吾尔自治区

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应用气-液两相呼吸道类器官从中国临床住院患儿中分离鉴定人副流感病毒1/2/3

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病毒学报 2024年第2期40卷 274-282页

作者：余玙璠吴伟波牛培华宋敬东霍威邦胡月超刘俊彤魏岚邓瑶杨扬朱娜谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室北京100052 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 深圳市病原微生物与免疫重点实验室国家感染性疾病临床医学研究中心深圳市第三人民医院深圳518112

人副流感病毒(Human parainfluenza viruses,hPIVs)是引起人类呼吸道感染的重要病原体之一,目前我国相关临床毒株资源有限,本研究旨在获得近期流行、背景明晰的hPIVs临床分离株。应用原代人呼吸道上皮细胞分化的气-液界面呼吸道上皮类器... 详细信息

人副流感病毒(Human parainfluenza viruses,hPIVs)是引起人类呼吸道感染的重要病原体之一,目前我国相关临床毒株资源有限,本研究旨在获得近期流行、背景明晰的hPIVs临床分离株。应用原代人呼吸道上皮细胞分化的气-液界面呼吸道上皮类器官(Air-liquid interface human airway epithelial organoid,HAE),从深圳市第三人民医院2016~2017年住院患儿hPIVs阳性咽拭子标本中分离获得hPIV1/2/3,分别命名为hPIV1/C-Tan/SZ01/2016、hPIV2/C-Tan/SZ01/2017、hPIV3/C-Tan/SZ01/2017。通过逆转录荧光定量PCR (Reversetranscriptionquantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测病毒核酸扩增、免疫荧光检测病毒蛋白在HAE的表达、负染及超薄切片透射电镜观察病毒形态和细胞定位,并对传代过程中病毒的活性、遗传稳定性和基因组特征进行分析。结果表明基于HAE分离hPIVs可以高效获得hPIVs临床分离株,所获毒株具有典型的病毒形态特征。三种hPIVs在HAE中复制良好且遗传稳定,病毒滴度均可达到约107 TCID50/100μL。对分离获得的hPIV1/2/3临床分离株进行全基因组及HN基因进行序列测定,结果表明:hPIV1全长为15568bp,属于hPIV1 C亚型;hPIV2全长15694bp,属于hPIV2 A3亚型;hPIV3全长15443bp,属于hPIV3 C3亚型,提示3株临床分离株与我国普遍流行的基因型相一致。综上,本研究应用HAE从近期住院患儿临床样本中成功分离获得生物学特性和基因组背景清晰且遗传稳定的hPIV1/2/3毒株。这些临床流行毒株资源的分离鉴定,为hPIVs的感染特点和致病机制的深入研究及抗病毒药物筛选和疫苗研发奠定了基础。

关键词：人副流感病毒病毒分离鉴定人呼吸道上皮类器官

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