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2017~2018年河北省重症手足口病的主要致病病原体为柯萨奇病毒A组6型

病毒学报 2020年第2期36卷 192-200页

作者：肖金波于秋丽张勇宋洋张曼路环环韩振志刘莹莹冀天娇严冬梅祝双利许文波李琦国家脊髓灰质炎实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 中国科学院生物安全大科学研究中心武汉430000 河北省疾病预防控制中心石家庄050000

肠道病毒是引起重症手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的主要病原体,近年来引起重症手足口病的病原谱正在发生变化,这为病原谱的检测带来了困难,而包括高通量测序(High-throughput sequencing,HTS)在内的新技术为明确重症手... 详细信息

肠道病毒是引起重症手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的主要病原体,近年来引起重症手足口病的病原谱正在发生变化,这为病原谱的检测带来了困难,而包括高通量测序(High-throughput sequencing,HTS)在内的新技术为明确重症手足口病的病原谱提供了帮助。为了明确河北省2017~2018年重症手足口病的病原谱,本研究采集2017~2018年河北省重症HFMD病例的50份标本(2017年29份,2018年21份)进行病毒分离,从23份标本中分离到病毒,采用一代测序方法获得其全长VP1区序列,而其余27份标本未能直接分离到病毒,其中17份采用高通量测序的方法获得了部分或者全长基因组序列。序列分析结果显示,近年来河北省重症HFMD的肠道病毒病原谱发生了较大变化,2017年重症HFMD标本中,10份检出肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71),1份检出柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16),10份检出柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)(其中高通量测序检出5份),还有3份检出其他肠道病毒;2018年重症HFMD标本中,1份检出CV-A16,7份CV-A6通过高通量测序检出,5份检出柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)(其中高通量测序检出3份),还有3份检出其他肠道病毒。通过高通量测序,可检出病原体的重症标本由原来的23份上升到40份,可检出CV-A6的标本由5份上升到17份,CV-A10由2份上升到5份;重症病例病原谱中CV-A6所占的比例由21.7%(5/23)上升到42.5%(17/40),CV-A10由8.7%(2/23)上升到12.5%(5/40),而EV-A71由于病毒分离比较敏感,含有EV-A71的标本病毒分离全部是阳性,高通量测序并没有多检出,在病原谱中的比例由43.5%(10/23)下降到25.0%(10/40)。RAxML构建的CV-A6和CV-A10的VP1区的系统发育树显示,CV-A6属于中国流行的优势基因亚型D3a,CV-A10属于中国流行的优势基因型C。河北重症HFMD标本检测到的两株CV-A6与其余中国CV-A6序列的3D区的核苷酸相似度为76.4%~98.9%,氨基酸相似度为92.7%~99.7%,两株CV-A10与其余中国CVA10序列的3D区的核苷酸相似度为93.2%~97.1%,氨基酸相似度为97.4%~99.7%。本研究揭示,引起河北重症HFMD的CV-A6和CV-A10均是中国目前流行的优势基因型,与中国流行株相比,并未发生新的重组事件。CVA6和CV-A10在引起河北重症HFMD的病原谱中所占比例逐渐增高,CV-A6超过EV-A71,已成为引起HFMD重症病例的优势型别,提示应该加强对CV-A6和CV-A10的监测,积极研制这两种病毒的疫苗,这将有助于进一步减少重症HFMD病例数,并减轻重症HFMD疾病负担。

关键词：重症手足口病(HFMD) 高通量测序(HTS) 病原谱柯萨奇病毒A组6型(CV-A6) 柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)

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2015~2018年柯萨奇病毒A组6型在黑龙江省的持续流行

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病毒学报 2020年第2期36卷 201-206页

作者：张曼陈淑红张勇宋洋许军孙巍杨明韩振志肖金波路环环许文波刘志军杨倩潍坊医学院潍坊261053 黑龙江省疾病预防控制中心哈尔滨150001 国家脊髓灰质炎实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 中国科学院生物安全大科学研究中心北京102206

手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一类常见的儿童传染病,自2009年以来,柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)已经成为引起HFMD流行持续循环的重要病原之一,是其他肠道病毒(Enterovirus,EV)中的优势病原,而黑龙江省CV-A6相关研究报道尚欠缺。本研究为了解2015~2018年黑龙江省HFMD流行概况和病原学组成,并分析该地区CV-A6的基因特征,收集2015~2018年黑龙江省HFMD疫情资料进行流行病学分析,并采集HFMD病例临床标本进行EV核酸检测。对分离出的EV毒株进行CV-A6的特异性荧光定量PCR法检测,对所有CV-A6阳性毒株进行全长VP1区扩增和核苷酸序列测定,并与GenBank上下载的CV-A6分型代表株构建系统进化树,以了解CV-A6的基因特征。流行病学结果显示,2015~2018年黑龙江省HFMD疫情平稳且2017年有所下降,无死亡病例。黑龙江省每年7月~8月为HFMD流行高峰,患病人群平均年龄为(4.39±3.74)岁,男女患病比例为1.44∶1。全省13个地市均收集到标本,哈尔滨市标本数最多,占36.77%。2015~2018年在黑龙江省共分离到69株CV-A6,与CV-A6原型株的核苷酸相似性为81.8%~83.9%,氨基酸相似性为94.0%~96.3%,均属D3基因亚型的D3a进化分支。尽管肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71)和CV-A16为主要病原,但D3基因亚型的CV-A6也已成为引起黑龙江省HFMD流行的稳定型别之一,且有加强的趋势,因此应加强CV-A6疫情的监控和分析,为该地区HFMD防控及疫苗研制提供基础数据。

关键词：柯萨奇病毒A组6型(CV-A6) D3基因亚型手足口病(HFMD)

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肠道病毒D68型流行基因型高灵敏通用型Real-time RT-PCR检测方法建立及应用

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病毒学报 2025年第3期 625-633页

作者：肖梦怡韩振志路环环丛如意冀天娇祝双利孙强刘莹周蕾栗凡梁钰材范华肖金波张勇山东第一医科大学(山东省医学科学院) 公共卫生与健康管理学院国家脊髓灰质炎实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室首都儿科研究所病毒学研究室儿童病毒病病原学北京市重点实验室中国人民解放军疾病预防控制中心华北理工大学公共卫生学院沈阳医学院山东第二医科大学基础医学院

自2014年肠道病毒D组68型（Enterovirus D68,EV-D68）引起急性弛缓性脊髓炎暴发以来，一直被广泛关注。建立一种快速、高效且便捷的EV-D68特异性Real-time RT-PCR检测方法，对于及时发现潜在的传染源并迅速阻断传播至关重要。本研究参考... 详细信息

自2014年肠道病毒D组68型（Enterovirus D68,EV-D68）引起急性弛缓性脊髓炎暴发以来，一直被广泛关注。建立一种快速、高效且便捷的EV-D68特异性Real-time RT-PCR检测方法，对于及时发现潜在的传染源并迅速阻断传播至关重要。本研究参考EV-D68各个基因型VP1区代表序列设计探针和引物，通过制作标准品，对其特异性、灵敏度以及重复性进行全面评价，并用临床样本检测其可靠性。结果显示，本研究所设计的探针和引物仅能检出EV-D68，其他73种血清型肠道病毒均无检出情况，最低检测下限为2×10～1拷贝/μL，拷贝数与循环阈值之间具有良好的线性关系（R2=0.9933），重复性检测的变异系数小于1.70%，稳定性良好。采用本研究设计的探针和引物对41份临床样本进行检测时，实现了零漏检，与测序的金标准结果完全吻合，对于目前流行的B3和D3基因亚型可以实现全覆盖。综上所述，本研究设计的特异性探针引物在EV-D68检测中展现出高效且准确的特性，同时对目前流行的基因型具有较强的通用性，能够为EV-D68感染的临床诊断、疫情监测以及流行病学调查工作提供有力支持，为EV-D68的快速鉴定和相关疾病防控提供关键技术支撑。

关键词：肠道病毒D组68型实时荧光定量RT-PCR 特异性灵敏度重复性

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2018年新疆维吾尔自治区外环境污水中分离到1株II型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒

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中国疫苗和免疫 2019年第4期25卷 368-372页

作者：唐海淑李晓嫘凯塞尔·吾斯曼崔惠严冬梅宁静王东艳祝双利温宁张勇许文波新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心新疆乌鲁木齐830011 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京102206 中国疾病预防控制中心免疫规划中心北京100050

目的对新疆维吾尔自治区外环境污水中分离到的1株Ⅱ型疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Vaccine derived poliovirus,VDPV)进行鉴定和分析。方法 2018年4-9月对新疆乌鲁木齐市每月定期采集的环境污水标本进行病毒分离,对脊灰病毒(Polioviru... 详细信息

目的对新疆维吾尔自治区外环境污水中分离到的1株Ⅱ型疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Vaccine derived poliovirus,VDPV)进行鉴定和分析。方法 2018年4-9月对新疆乌鲁木齐市每月定期采集的环境污水标本进行病毒分离,对脊灰病毒(Poliovirus,PV)分离株采用实时荧光定量RT-PCR方法进行型内鉴定,对非疫苗类似株PV进行VP1区核苷酸序列分析。结果 2018年4-9月共采集乌鲁木齐市环境污水标本12份,从6份标本中分离到54株PV,其中4月份1株PV鉴定为Ⅱ型VDPV,与中国既往发现的Ⅱ型VDPV序列和GenBank中Ⅱ型VDPV序列均不同源。连续3个月的环境污水监测没有发现遗传学相关的VDPV,该Ⅱ型VDPV最终分类为来源不确定的VDPV。启动Ⅱ型VDPV事件的三级应急响应后,后期的连续监测未再检测到Ⅱ型PV,应急响应终止。结论新疆环境污水中检出Ⅱ型VDPV表明环境监测对于维持无脊灰的重要性,为及时发现VDPV和脊灰野病毒的输入提供了预测预警。

关键词：环境监测 Ⅱ型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒无脊髓灰质炎状态

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