检索结果-内蒙古大学图书馆

中国热带医学 2022年第5期22卷 483-488页

作者：刘铁柱李建东中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部生物安全重点实验室医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)属丝状病毒科,是已知导致人类严重疾病的烈性的病原体之一,可导致人群大范围流行。2021年8月11日,世界卫生组织宣布西非国家几内亚出现1例马尔堡病毒病死亡病例,为该病毒的防控敲响了警钟。针对马尔堡病... 详细信息

马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)属丝状病毒科,是已知导致人类严重疾病的烈性的病原体之一,可导致人群大范围流行。2021年8月11日,世界卫生组织宣布西非国家几内亚出现1例马尔堡病毒病死亡病例,为该病毒的防控敲响了警钟。针对马尔堡病毒尚无特效药物和疫苗,相关研究亟待开展,尤其是快速准确的诊断试剂。中国尚无马尔堡病毒病的报道,但存在输入或赴非洲务工而感染的潜在风险,需强化马尔堡病毒病防控意识。本文就马尔堡病毒的病毒学特点、感染特性以及诊断方法进行综述,以增强对马尔堡病毒的认识。

关键词：马尔堡病毒病原学诊断方法

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人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的建立与初步应用

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中华预防医学杂志 2024年第7期58卷 959-966页

作者：张丽李海曹蕾胡宏俏王娜李海鑫江洁毛乃颖李晓梅张燕山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院济南250117 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素... 详细信息

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素进行优化。验证该方法的重复性,并与传统PRNT验证其相关性。利用优化的PRNT方法检测BALB/c小鼠血清(融合蛋白肌肉注射免疫)对HRSV A和B亚型的中和抗体滴度。结果Palivizumab的表达量约为50 mg/L。PRNT的最佳工作条件为:培养细胞为HEp-2细胞,细胞培养时间为2 d,最佳固定通透方式为4%(V/V)多聚甲醛室温固定15 min后0.2%(V/V)Triton X-100通透15 min,去掉封闭步骤。优化后该方法的重复性验证总体变异系数均<15%,与传统PRNT呈现良好的线性关系,Spearman相关系数rs高达0.983。在检测小鼠血清对HRSV A亚型long株和B亚型9320株的中和抗体滴度时,融合蛋白联合AlOH和CpG佐剂诱导小鼠产生的中和抗体滴度最高。结论本研究建立的HRSV中和抗体检测方法快速、可重复、高通量,能够适用于A、B亚型HRSV的中和抗体检测。

关键词：人呼吸道合胞病毒免疫染色噬斑减少中和实验中和抗体

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中国罕见A组轮状病毒DS-1样G3P的全基因组分子特征分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第1期38卷 29-36页

作者：熊光萍魏宇航彭蕊范佳欣唐晓苹黄枝妙董梦洁车如意李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 北京市通州区卫生健康监督所北京101100 福建省疾病预防控制中心福州350012

目的对2021年采集于我国福建的A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)G3P[8]毒株FJ21351116进行全基因组分子特征分析。方法使用高灵敏度A组轮状病毒全基因组测序方法对FJ21351116进行全基因组测序。用MEGA11.0、Geneious9.0.2和DNASTAR... 详细信息

目的对2021年采集于我国福建的A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)G3P[8]毒株FJ21351116进行全基因组分子特征分析。方法使用高灵敏度A组轮状病毒全基因组测序方法对FJ21351116进行全基因组测序。用MEGA11.0、Geneious9.0.2和DNASTAR软件通过核酸序列分析评估病毒的基因组特征。使用BioEdit v.7.0.9.0和PyMOL v.2.5.2分析VP7和VP4(VP8*)的中和表位。结果我国福建RVA毒株FJ21351116基因型为G3-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2,系统进化分析显示,FJ21351116株的VP7、VP4、VP3、NSP2-NSP5基因与近几年日本检测到的马样DS-1样G3P[8]基因存在亲缘关系。而VP6、VP1、VP2、NSP1基因与大部分国家G2P[4]的相应基因亲缘关系近,特别是新加坡,表明该毒株是马样G3P[8]毒株与G2P[4]毒株共感染过程中通过基因重配形成的。FJ21351116的VP7/VP4基因与Rotarix和RotaTeq疫苗的进化分析表明,VP7和VP4(VP8*)中和抗原表位与疫苗氨基酸位点均存在多个突变。推测Rotarix和RotaTeq疫苗针对马样DS-1样G3P[8]RVA的保护效果不佳,且与Rotarix的中和抗原表位氨基酸差异高于RotaTeq。结论本研究发现一例中国罕见的DS-1样G3P[8]型RVA毒株,且疫苗株可能对其保护效果差,强调了持续监测RVA毒株及研发高效覆盖面全的RVA疫苗的重要性。

关键词： A组轮状病毒全基因组 DS-1-like G3P[8] 分子特征

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重组呼吸道合胞病毒G蛋白保守域的腺病毒载体疫苗的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第5期38卷 497-505页

作者：石艺柴鹏弟段招军章青孔翔羽王宏庞立丽李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守... 详细信息

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守域(Gbcc和Gacc)的重组Ad5载体质粒(Ad5-Gbcc-Gacc)并转染HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gbcc-Gacc;通过多酶切鉴定病毒Ad5-Gbcc-Gacc的基因组,用Western blot验证Gbcc-Gacc基因的表达水平;重组腺病毒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠1次,在第6周用RSV Long毒株对小鼠以滴鼻的方式进行攻毒。用酶联免疫吸附试验(Elisa)检测和评价免疫小鼠血清IgG及抗体亚型,用微中和检测的方法测定中和抗体水平,同时每天记录小鼠攻毒前后的体重,并检测小鼠肺组织的病理变化、肺和鼻组织中RSV病毒拷贝数。结果Western blot及多酶切鉴定结果与预期相符,表明重组腺病毒拯救成功。Ad5-Gbcc-Gacc在小鼠体内可以诱导较高滴度的特异性IgG、中和抗体水平及Th1/Th2平衡的免疫反应。与未免疫小鼠比较,经Ad5-Gbcc-Gacc免疫小鼠攻毒后肺部只有轻微病理损伤,且肺部及鼻甲的病毒拷贝数降低。结论Ad5-Gbcc-Gacc具备良好的免疫原性,并能对RSV感染小鼠有一定的保护作用,为进一步研制基于G蛋白的RSV疫苗奠定了基础。

关键词：腺病毒载体呼吸道合胞病毒 G蛋白中央保守域疫苗

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一株Wa-like中国G3P-I5-A8基因型轮状病毒重配株全基因组特征分析

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国际病毒学杂志 2025年第1期32卷 12-16页

作者：唐晓苹熊光萍车如意董梦洁刘颂张无敌王宏章青孔翔羽庞立丽李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 青岛市疾病预防控制中心病毒性疾病检验所 266000

目的研究一株Wa-like中国G3P[8]-I5-A8基因型RVA重配株全基因组特征,并分析与RVA疫苗株的抗原表位之间差异。方法采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,对2023年中国青岛采集的一份G3P[8]基因型RVA标本进行全序列扩增。利用在线RVA自... 详细信息

目的研究一株Wa-like中国G3P[8]-I5-A8基因型RVA重配株全基因组特征,并分析与RVA疫苗株的抗原表位之间差异。方法采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,对2023年中国青岛采集的一份G3P[8]基因型RVA标本进行全序列扩增。利用在线RVA自动分型工具(http://***)对测序结果进行分型,应用MEGA 11.0、Geneious Prime 2023.2.1、Geneious 9.0.2和DNASTAR 5.1等软件对RVA毒株进行全序列遗传变异和进化分析。结果成功获取一株G3P[8]基因型RVA(QD01)的全基因组序列,该毒株具有独特的类似Wa-like的基因型:G3-P[8]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1。与RVA疫苗株RotaTeq^(TM)(G3)、LLR和Rotarix的VP7中和抗原表位对比有4~13个差异且均在抗原表位的关键位置7-1 b差异较大。结论本研究RVA毒株QD01为G3-P[8]-I5-A8基因型,遗传进化分析推测该毒株可能是亚洲地区猪源RVA和人源RVA毒株间发生重配产生的新型毒株,QD01与RVA疫苗株在抗原表位的关键位置差异较大。

关键词：轮状病毒 G3P[8]基因型分子特征全基因组抗原位点

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2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染病例肠道病毒感染型别分析

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中华预防医学杂志 2023年第3期57卷 378-385页

作者：李汶霞谢智博徐瑾夏百成段鸿渐宋金华王慧玲许文波张燕范华山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院济南250117 国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 河南省疾病预防控制中心免疫预防与规划所郑州450016

目的了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染(ARIs)病例中肠道病毒(EV)的感染状况,分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法于2017年10月至2021年5月,采集河南省漯河市中心医院1828例ARIs患者的咽拭子样本,并收集相关临床流行病... 详细信息

目的了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染(ARIs)病例中肠道病毒(EV)的感染状况,分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法于2017年10月至2021年5月,采集河南省漯河市中心医院1828例ARIs患者的咽拭子样本,并收集相关临床流行病学资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)筛选EV阳性样本,随后对阳性样本采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增5′非翻译区(5′UTR),使用Enterovirus Genotyping Tool在线定型工具初步定型后采用RT-PCR法进行VP1区全长扩增,再次比对确定EV分型。结果1828例ARIs病例中,男性占56.7%(1036例);年龄M(Q1,Q3)为3(1,5)岁;5岁以下人群占71.6%(1309例)。1828例ARIs病例中,通过qPCR检测鉴定EV阳性样本共有71例,检出率为3.88%(71/1828);男、女性EV检出率分别为3.28%(34/1036)和4.67%(37/792),差异无统计学意义(χ^(2)=2.32,P=0.14)。2~<6岁、6月龄~<2岁、6~<10岁和<6月龄的EV检出率依次为6.29%(48/763)、3.00%(18/600)、2.52%(4/159)和1.67%(1/60)(χ^(2)=27.91,P<0.001)。2017年秋、冬季EV检出率为0.92%(3/326);2018—2020年各年EV检出率依次为1.18%(6/508)、2.47%(12/485)和8.31%(34/409),呈逐年上升趋势(χ_(趋势)^(2)=29.76,P<0.001),主要流行季节为夏、秋季;2021年春季检出率为4.00%(4/100)。共鉴定出12种型别:CVA2、CVA4、CVA5、CVA6、CVA10、CVB3、CVB5、E5、E11、E30、PV-1和EV-D68,其中CVA2、CVA10、CVA6和CVB3为优势型别。59例EV分型样本中,临床表现以上呼吸道感染为主(36/59,61.01%)。上呼吸道感染检出的优势型别为CVA10(10/36,27.78%)、CVA6(9/36,25.00%)和CVB3(8/36,22.22%);下呼吸道感染中检出的优势型别为CVA2(7/19,36.84%)。结论2017—2021年河南省漯河市ARIs病例中EV感染具有明确的季节性和年龄特征,上、下呼吸道感染所检出的优势型别有所不同。

关键词：肠道病毒呼吸道感染病原谱

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柯萨奇病毒A10型对利巴韦林耐药性的初步研究

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病毒学报 2024年第2期40卷 337-345页

作者：孙甜甜宗彦君王蕊李冀琛刘莹李晓亮韩振志于力恒刘志军孙强张勇潍坊医学院潍坊261053 传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 国家脊髓灰质炎实验室国家卫生健康委员会实验室生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 山东第一医科大学济南250117 首都儿科研究所病毒学研究室儿童病毒病病原学北京市重点实验室北京100020

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CV... 详细信息

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CVA10的抑制效果,本研究中,我们随机选取了19条2009-2021年的不同地区和不同年代的有代表性的中国内地优势流行基因型C基因型的CVA10毒株,通过细胞毒性实验(Cell counting kit-8,CCK8)来检测利巴韦林在RD细胞上对CVA10的抑制率。将抑制率大于85%的CVA10定义为对利巴韦林敏感组,抑制率小于15%的CVA10定义为对利巴韦林耐药组。结果显示利巴韦林在0.78mmol/L浓度下可以对CVA10产生较好的抑制作用并且对细胞的毒性较低。19株CVA10中有4株表现出对利巴韦林耐药性,2株表现出对利巴韦林敏感性,剩余13株的敏感性在85%~15%之间。通过7日龄ICR乳鼠感染实验比较对利巴韦林敏感组和耐药组毒株的致病力差异,通过观察乳鼠临床评分、生存率、体重及组织取材的滴度测定结果均表明对利巴韦林敏感组CVA10在小鼠上的致病力比耐药组强。进一步使用MEGA 7.0软件对影响CVA10复制和翻译的2C区氨基酸序列进行差异性分析,以分析可能的耐药位点。结果显示对利巴韦林耐药组和敏感组CVA10的2C区的327位和328位氨基酸位点存在差异。本研究发现当前国内流行的CVA10存在广泛对利巴韦林耐药现象,其中部分CVA10对利巴韦林完全耐药。因此,有必要加强对CVA10耐药株的监测,以便更好地指导临床医生正确地选择抗病毒药物,为个体化的治疗提供理论依据。

关键词：柯萨奇病毒A10型利巴韦林耐药性 2C区差异位点

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优化SARS-CoV-2 S-EABR在293T细胞中的分泌性表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第5期38卷 489-496页

作者：姜苏芮毛彤瑶张鹏段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子... 详细信息

目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子优化的S-EABR-1目的序列,瞬时转染293T细胞,48 h后收取细胞培养上清液和细胞裂解液,通过Western Blot和ELISA检测上清S蛋白的表达水平。然后选择表达最好的元件组合载体,插入S-EABR-1和S-EABR-2(于S-EABR-1尾部添加4个氨基酸——HSLP)目的序列,比较上清S蛋白的表达水平。最后基于上述表达效果最好的元件组合载体及插入目的序列,构建替换SARS-CoV-2 S蛋白原始信号肽的5种载体质粒(tPA,AZ,IFNα2,HSA,GLUC),比较上清S蛋白表达水平。同时利用计算机模拟SRP54亚基与信号肽核酸序列的分子对接,将对接分值(Docking Score)作为对接评价标准,预测两者的结合情况。结果在293T细胞中,Ab组合的载体分泌表达S-EABR水平最高,产量相较于Mb增加了125%。基于Ab组合载体,S-EABR-2序列表达分泌S-EABR的水平较S-EABR-1增加了约50%,进一步替换成HSA信号肽后的S-EABR表达分泌水平较S蛋白原始信号肽增加了约83%。此外,计算机模拟结果显示HSA与SRP54亚基的对接分值最高,为1505.861。结论通过真核表达元件(启动子、终止子和信号肽)及胞内序列的优化可进一步提高经密码子优化后的S-EABR在293T细胞中的分泌性表达。信号肽与SRP54亚基亲和力的计算模拟对接分值与S-EABR分泌表达水平基本吻合的结果也为后续提高目的基因分泌性表达的信号肽筛选提供了一种设计思路和筛选策略。

关键词：新型冠状病毒 S-EABR 启动子终止子信号肽信号识别颗粒

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水痘带状疱疹病毒gE-Foldon融合蛋白的表达及免疫效果的分析

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病毒学报 2024年第2期40卷 314-325页

作者：李海鑫曹蕾郭晋源孙馨胡宏俏时雨晴张丽武婕慧谢智博张瑶张燕李海李栋山东第一医科大学山东省医学科学院公共卫生与健康管理学院济南250117 国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚... 详细信息

水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚体蛋白可以诱导更强的免疫应答,本研究应用中国仓鼠卵巢细胞CHO-S表达连接Foldon结构域的蛋白(gE-Foldon)、连接Fc片段的蛋白(gE-Fc)和gE蛋白。三种抗原(gE-Foldon、gE-Fc和gE)分别联合AlOH+CpG佐剂,比较在BALB/c小鼠中的免疫效果,同时,将商品化的Shingrix作为对照。SDS-PAGE和WB结果显示成功表达纯化三种抗原,非还原条件下可以观察到gE-Foldon以三聚体形式存在。与gE和gE-Fc抗原相比,gE-Foldon在小鼠中诱导产生的IgG抗体(40492)和中和抗体滴度(1190.5)最高(P<0.01),与Shingrix相当。此外gE-Foldon诱导小鼠产生的分泌IL-2、IL-4的淋巴细胞数量显著高于其他免疫组(P<0.0001,P<0.05)。综上所述,gE-Foldon蛋白联合AlOH+CpG佐剂可诱导较强的体液和细胞免疫应答,因此可以作为预防HZ的潜在候选疫苗。

关键词：水痘带状疱疹病毒 gE-Foldon蛋白免疫效果

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人H组轮状病毒VP7蛋白表达及其多克隆抗体制备

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第6期38卷 702-708页

作者：刘晓钰赵颖张璐琦欧阳瑄泽章青李丹地李金松李利利孙晓曼段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH ... 详细信息

目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH J19株的VP7蛋白免疫兔子以制备VP7多抗血清,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)、免疫荧光荧光试验(Immunofluorescence,IF)等对VP7多抗血清进行鉴定。结果纯化得到可溶的J19 VP7蛋白;制备获得J19株VP7兔多抗;ELISA显示VP7多抗具有较好的结合效价,在稀释2048000倍时与人RVH VP7蛋白仍有结合;WB表明多抗能够结合J19 VP7蛋白;IF显示VP7多抗可以特异识别人H组轮状病毒J19株。结论本研究成功得到了人H组轮状病毒J19 VP7蛋白,制备的VP7多抗可以特异性识别人H组轮状病毒,为人H组轮状病毒的检测及病毒衣壳结构功能研究提供了基础。

关键词：人H组轮状病毒杆状病毒表达系统 VP7蛋白多克隆抗体

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