检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2025年第2期 462-472页

作者：唐晓苹范佳欣熊光萍魏宇航董梦洁车如意张无敌李楚楚沙比热木·托合塔木王宏章青孔翔羽庞立丽李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京市通州区卫生健康监督所江苏省疾病预防控制中心新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心病原检定所

为研究中国两株罕见G9P[4]-N1型RVA重配株的全基因组特征，采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法，对2022年收集的两份G9P[4]-N1型RVA标本进行全基因组扩增。应用MEGA11.0、Geneious Prime2023.2.1、Geneious9.0.2和DNASTAR等软件对RVA毒株进行全序列及遗传变异和进化分析，成功获取两株G9P[4]-N1型RVA的全基因组序列。结果显示两株RVA毒株的全基因组基因型均为G9-P[4]-I2-R2-C2-M2-A2-N1-T2-E2-H2，两株RVA毒株所有节段核苷酸序列的相似性为：98.5%～99.5%。系统进化树显示VP7、VP4和NSP2基因分别为G9-Ⅲ、P[4]-Ⅴ、NSP2-N1。中国两株G9P[4]型RVA毒株为罕见的G9-P[4]-I2-R2-C2-M2-A2-N1-T2-E2-H2型，VP7、VP4、NSP2等关键基因节段与美国、俄罗斯、捷克等国外G9P[4]型RVA相似度高，且与本国G9型流行株亲缘关系相对较远，推测该罕见G9P[4]-N1型RVA重配株可能由境外输入。中国两株G9P[4]基因型JS97、XJ1109毒株与疫苗株RotaTeqTM（G1～G4、P[8]）和疫苗株RotarixTM、疫苗Rotavac原始株116E及LLR原始毒株核苷酸相似性为81.2%～91.3%，在关键中和抗原表位存在较多氨基酸位点差异，该差异是否会影响疫苗针对中国G9P[4]-N1基因型的保护效果需要进一步研究。

关键词：轮状病毒 G9P[4]基因型分子特征全基因组

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基孔肯雅病毒感染性克隆的构建与鉴定

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病毒学报 2025年第2期 428-436页

作者：林启晗郑张琦顾天梦李川杜珊珊朱武洋王世文李建东传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室

基孔肯雅病毒（Chikungunya virus, CHIKV）主要经伊蚊叮咬可在人间快速传播，引发大范围规模性疫情，此外，病毒适应性突变可对病毒传播特征造成显著影响。本研究通过分步克隆的方法，以我国本地传播病毒分离株（CHIKV-GD133）基因组... 详细信息

基孔肯雅病毒（Chikungunya virus, CHIKV）主要经伊蚊叮咬可在人间快速传播，引发大范围规模性疫情，此外，病毒适应性突变可对病毒传播特征造成显著影响。本研究通过分步克隆的方法，以我国本地传播病毒分离株（CHIKV-GD133）基因组为模板，以商业化质粒pSMART为载体骨架，分4步利用TOP10F、和EPI300两种感受态细胞构建了分别在T7和CMV启动子驱动下的CHIKV的全长感染性克隆，分别转染表达有T7聚合酶的BHK细胞系（BHK/T7-9）和Vero细胞后，通过显微镜观察、RT-PCR、IFA和噬斑滴定等方法，检测细胞病变效应、结构蛋白的表达、子代病毒粒子基因组序列、病毒基因组复制水平等，确认所构建2种感染性克隆在转染相应细胞系后，能够有效复制、装配形成有感染性的病毒颗粒，且该病毒颗粒可在Vero细胞内传代增殖，其感染复制特征与亲本野毒株无显著性差异。本研究为进一步探索影响CHIKV感染、复制、传播和致病等关键机制研究奠定了基础。

关键词：基孔肯雅病毒感染性克隆反向遗传 T7 RNA聚合酶

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柯萨奇病毒A组16型分子流行病学和疫苗研究进展

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病毒学报 2014年第4期30卷 483-488页

作者：陈祥鹏檀晓娟许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)是引起手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的重要致病原,常与另一重要病原体肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)共同或交替流行。该病毒在世界多个国家和地区引起过暴发流行,成... 详细信息

柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)是引起手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的重要致病原,常与另一重要病原体肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)共同或交替流行。该病毒在世界多个国家和地区引起过暴发流行,成为重要的公共卫生问题。CVA16可分为A和B两个基因型;其中基因型B可以分成B1和B2两个基因亚型;B1亚型又可进一步分成B1a、B1b和B1c三个进化分支。基因型A与B2在世界范围内已不再流行;我国大陆分离到的CVA16毒株均属B1a和B1b进化分支。CVA16感染多为自限性轻症,但亦可引起严重的并发症,甚至引起患者死亡。目前尚无针对该病毒的有效药物或治疗手段,研发安全有效的疫苗成为控制该病毒的重要措施。随着EV-A71疫苗三期临床试验的成功完成,CVA16疫苗的研究也显得更加迫切。多家机构正在研究各种类型的CVA16疫苗,包括灭活疫苗、基因工程疫苗及DNA疫苗等。本文就CVA16的分子流行病学及其疫苗研究进展进行了综述。

关键词：手足口病柯萨奇病毒A组16型基因型疫苗

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抗发热伴血小板减少综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备和功能分析

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病毒学报 2015年第1期31卷 18-23页

作者：李阿茜刘林张硕李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV）结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗... 详细信息

为制备抗发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV）结构蛋白的单克隆抗体,本研究用灭活纯化的SFTSV病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得分别分泌抗糖蛋白单抗和核蛋白单抗的杂交瘤细胞株。用免疫荧光法和免疫沉淀方法对制备的单克隆抗体的抗原特异性进行鉴定,并初步进行单抗效价、中和活性及亲和力等功能分析。结果显示,通过细胞融合和克隆化,共筛选出13株稳定分泌抗糖蛋白（Glycoprotein,GP）单抗和7株稳定分泌抗核蛋白（Nucleoprotein,NP）单抗的杂交瘤细胞株。免疫荧光和免疫沉淀鉴定显示获得的单抗有良好的抗原特异性。抗GP单抗中6株针对Gn,7株针对Gc,大部分的间接免疫荧光（Indirect immunofluorescence assay,IFA）滴度在1 280-20 480之间,其中4株抗Gn单抗具有中和活性。获得的7株抗NP单抗均与NP特异性结合,IFA滴度范围在5 120-20 480,均无中和活性。此外,经非竞争ELISA检测的两株抗GP单抗（1C8和1G8）均有较高亲和力。本研究为SFTS诊断方法的发展及SFTSV致病机制研究奠定了基础。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 核蛋白(NP) 糖蛋白(GP) 单克隆抗体

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2013～2014年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析

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病毒学报 2015年第1期31卷 30-35页

作者：李希妍成艳辉谭敏菊黄维娟郭俊峰隗合江肖宁蓝雨赵翔杨磊王钊王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为分析2013-2014流感监测年度中国大陆地区H3N2亚型流感病毒的抗原性和基因变异情况,本文选择了本监测年度中国分离的H3N2亚型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析,利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用邻位相临法（Neighbor-J... 详细信息

为分析2013-2014流感监测年度中国大陆地区H3N2亚型流感病毒的抗原性和基因变异情况,本文选择了本监测年度中国分离的H3N2亚型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析,利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用邻位相临法（Neighbor-Joining,N-J）方法进行种系进化分析,分析我国H3N2亚型流感病毒的变异情况,进一步比较其与疫苗株的匹配性。抗原分析显示,本监测年度H3N2亚型流感病毒大部分为疫苗株A/Victoria/361/2011细胞株的类似株（99.6%）,但以A/Texas/50/2012鸡胚株为参考抗原,只有15.1%为类似株,仅有11.9%与中国流行株的鸡胚分离株A/Shanghai-Changning/1507/2012抗原性类似。HA基因特性分析显示我国毒株均位于同一大分支,NA基因没有发现与耐药性相关的氨基酸位点突变。总之,2013-2014流感监测年度我国H3N2亚型流感病毒在流行过程中未发生明显变异,但病毒在鸡胚中传代会导致关键氨基酸位点变异。应及时分析并发现我国病毒的抗原性和基因特性变异情况,推选出更适合我国的疫苗株。

关键词：流感病毒 H3N2亚型抗原性基因特性

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发热伴血小板减少综合征病毒灭活病毒的纯化及免疫原性初步研究

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病毒学报 2015年第3期31卷 239-244页

作者：李阿茜刘林张硕李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了解纯化后灭活发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的免疫原性,本研究通过超滤浓缩和分子筛层析相结合的方法对灭活的SFTSV进行纯化,采用Western blot和SDS-PAGE对灭活病毒... 详细信息

为了解纯化后灭活发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的免疫原性,本研究通过超滤浓缩和分子筛层析相结合的方法对灭活的SFTSV进行纯化,采用Western blot和SDS-PAGE对灭活病毒的纯化样品进行分析和鉴定,采用双抗夹心ELISA方法对其中糖蛋白(Glycoprotein,GP)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)的抗原含量进行检测。浓缩纯化的SFTSV灭活病毒,经电镜观察并通过BCA法测定其总蛋白浓度。然后,将纯化的灭活SFTSV按两种不同的免疫程序免疫新西兰兔,评价免疫原性和比较免疫效果。结果显示,SFTSV灭活并超滤浓缩后,分子筛层析可观察到两个洗脱峰,其中之一为灭活病毒颗粒,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法分析均可检测到GP和NP抗原,而另一洗脱峰主要成分则为NP。浓缩后的纯化病毒纯度达90%以上,总蛋白浓度约为1.1mg/mL,且具有典型的布尼亚病毒电镜形态。纯化的SFTSV灭活病毒免疫实验动物后,可在血清中检出高滴度病毒特异性IgG和中和抗体,但抗体滴度受免疫程序的影响,0d、14d和28d天三针程序免疫动物的效果明显优于0d、7d和28d免疫程序组。本研究显示了灭活SFTSV培养液中除完整病毒颗粒外,还含有大量游离的NP,经分子筛层析纯化可获得高纯度灭活病毒,同时明确了纯化的SFTSV灭活病毒具有良好的免疫原性,可诱导产生高滴度中和抗体和病毒特异IgG抗体,可为灭活病毒疫苗的进一步研究提供重要的线索。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 灭活病毒分子筛层析纯化免疫原性

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中东呼吸综合征冠状病毒多重荧光定量RT-PCR检测技术的建立

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病毒学报 2016年第3期32卷 349-354页

作者：牛培华陆柔剑蓝佳明刘高山王文玲谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

建立中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染的筛查与诊断应用的核酸检测方法。本研究建立了基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重的三种荧光定量RT-PCR检测技术方法,分别与前期建立的单重荧光定量RT-PCR(upE或N2)... 详细信息

建立中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染的筛查与诊断应用的核酸检测方法。本研究建立了基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重的三种荧光定量RT-PCR检测技术方法,分别与前期建立的单重荧光定量RT-PCR(upE或N2)检测方法做了比较,并且采用MERS-CoV病毒毒株、上海提供的口岸发烧病人样本以及由首例中国MERS-CoV韩国地区输入病例的咽拭子样品和全血的样品做了临床验证。结果显示:采用MERS-CoV病毒毒株作为模板,三种新建立的多重检测方法与单重荧光定量RT-PCR检测方法最低检测限均能达到10PFU/mL,且与其他常见呼吸道病毒的阳性样本均无交叉反应,特异性良好。对临床样品的验证中,上海病人咽拭子样本均为阴性,而中国首例MERS输入病例的急性期咽拭子样品均为阳性,而全血样的检测结果显示N2靶标有较高检出率,明显优于基于upE单一靶标。本研究所建立的基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重荧光定量RT-PCR检测技术方法用于MERS-CoV感染的实验室诊断,具有较高灵敏度与特异性及适用性。

关键词：中东呼吸系统综合征冠状病毒荧光定量RT-PCR 多重检测

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柯萨奇病毒A组16型灭活抗原对小鼠免疫保护作用的研究

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病毒学报 2014年第3期30卷 226-232页

作者：陈祥鹏檀晓娟张勇许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

为了研究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)灭活抗原在小鼠体内所产生免疫保护作用效果,我们选用CVA16临床分离株521-01T,在Vero细胞中进行大量培养,并对培养产物进行甲醛灭活及超速离心纯化。SDS-PAGE和Western blot对纯化... 详细信息

为了研究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)灭活抗原在小鼠体内所产生免疫保护作用效果,我们选用CVA16临床分离株521-01T,在Vero细胞中进行大量培养,并对培养产物进行甲醛灭活及超速离心纯化。SDS-PAGE和Western blot对纯化的灭活病毒纯度及性质进行初步分析。Al(OH)3+CVA16及单独CVA16抗原,分别经皮下注射免疫雌性ICR小鼠;相同免疫途径、剂量于第14和28d加强免疫2次。ELISA法检测CVA16特异性血清IgG抗体滴度;微量中和试验法鉴定血清中和抗体滴度;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测特异性T淋巴细胞的活化。对Al(OH)3+CVA16抗原免疫组母鼠所产仔鼠进行脑腔攻毒,检测母传抗体对新生乳鼠的保护作用。结果显示,Al(OH)3+CVA16灭活抗原在小鼠体内能诱生高滴度的特异性抗体,3次免疫后产生的特异性血清IgG抗体滴度最高可达1∶1×105(P=0.000),中和滴度高于1∶256。同时,该抗原还可以诱导特异性T淋巴细胞的活化。以1 000LD50的病毒量脑腔接种48h内新生乳鼠的病毒攻击实验显示,该母传抗体对新生乳鼠具有100%的保护。这一结果表明该灭活CVA16病毒抗原具有较好的免疫原性及保护性,为CVA16灭活疫苗的研究及评价体系提供了参考。

关键词：柯萨奇病毒A组16型灭活疫苗中和抗体免疫保护

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重组人源抗狂犬病毒单克隆抗体鸡尾酒暴露后预防效果评价

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病毒学报 2016年第4期32卷 399-403页

作者：孙丽娜刘洋李川李德新梁米芳中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

本研究对重组人源抗狂犬病毒单克隆抗体鸡尾酒暴露后预防效果进行评价,选用狂犬病毒国内代表性疫苗株、实验室固定毒株及街毒株共11株病毒,通过荧光抗体病毒中和试验(FAVN)分析针对狂犬病毒糖蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号表位的三株单抗CR57(I)、RV... 详细信息

本研究对重组人源抗狂犬病毒单克隆抗体鸡尾酒暴露后预防效果进行评价,选用狂犬病毒国内代表性疫苗株、实验室固定毒株及街毒株共11株病毒,通过荧光抗体病毒中和试验(FAVN)分析针对狂犬病毒糖蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号表位的三株单抗CR57(I)、RV08(II)和RV3A5(Ⅲ)及其鸡尾酒配伍的中和谱,在此基础上选用狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11感染仓鼠腓肠肌,进一步研究重组人源抗狂犬病毒单抗及其鸡尾酒制剂暴露后保护效果,结果显示CR57、RV08、RV3A5及其三联配伍制剂对11株狂犬病毒均具有明确的中和作用,按中和效价1∶1∶1配伍组成的鸡尾酒组合制剂对这些毒株的中和能力没有减弱,表明三株抗体间无相互干扰,对个别毒株(JX08-45、Flury、SRV9)的中和活性表现出协同作用;三株单抗CR57、RV08和RV3A5单独应用或是三联配伍应用的暴露后保护率达100%,与HRIG单独免疫相比较具有更优秀的动物保护活性;在与疫苗联合应用方面重组人源单抗与HRIG在暴露后预防的效果相仿,均可达到100%的保护率,所以重组人源单抗具有替代HRIG应用于狂犬病暴露后预防与保护的潜力,为我国具有自主知识产权的狂犬单抗鸡尾酒制剂的研发打下基础。

关键词：狂犬病毒糖蛋白重组人源单抗

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流感病毒A/PR/8/34重配母本株高免疫原性HA蛋白制备及鉴定

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病毒学报 2016年第2期32卷 141-144页

作者：唐静辛丽郭俊峰朱闻斐张贺源郎绍辉王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

制备流感病毒经典重配过程中所需的A/PR/8/34母本株血凝素蛋白（Hemagglutinin,HA）抗血清。A/PR/8/34流感病毒灭活纯化后经菠萝蛋白酶消化。5%~20%蔗糖连续密度梯度离心法纯化HA蛋白。单向免疫扩散法（Single Radial Immunodiffusion,S... 详细信息

制备流感病毒经典重配过程中所需的A/PR/8/34母本株血凝素蛋白（Hemagglutinin,HA）抗血清。A/PR/8/34流感病毒灭活纯化后经菠萝蛋白酶消化。5%~20%蔗糖连续密度梯度离心法纯化HA蛋白。单向免疫扩散法（Single Radial Immunodiffusion,SRID）筛选目的蛋白。SDS-PAGE法鉴定目的蛋白。纯化的A/PR/8/34 HA蛋白免疫兔子制备抗血清,血凝抑制试验（Hemoglutination Inhibition Assay,HI）测定HA抗血清效价,经SRID法鉴定HA抗血清纯度。成功制备了高免疫原性A/PR/8/34HA蛋白;兔抗血清HI滴度可达10240,SRID法鉴定为高纯度HA抗血清。制备了流感病毒经典重配中关键试剂,摸索成功整套技术方法,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础。

关键词：流感病毒经典重配 HA蛋白高免疫原性 HA抗血清

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