检索结果-内蒙古大学图书馆

陕西省2010-2012年柯萨奇病毒A组16型VP1基因特征分析

中华实验和临床病毒学杂志 2014年第3期28卷 181-183页

作者：冀天娇关路媛檀晓娟徐艺张宝敏王敬军余鹏博许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学和病毒病重点实验室北京102206 陕西省疾病预防控制中心

目的对陕西省2010-2012年来源于手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）病例的科萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16,CVA16）毒株的VP1基因特征进行分析,以阐明其分子流行病学特征.方法利用特异性引物对分离鉴定为CVA16的21... 详细信息

目的对陕西省2010-2012年来源于手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）病例的科萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16,CVA16）毒株的VP1基因特征进行分析,以阐明其分子流行病学特征.方法利用特异性引物对分离鉴定为CVA16的21株病毒进行VP1编码区扩增.对阳性产物进行序列测定,并用MEGA软件进行序列的生物信息学分析.结果根据亲缘性分析,本研究的CVA16分别属于B1a和B1b基因亚型,其中仅2011年分离自宝鸡市的10株属于B1a基因亚型,分离自其他4个地市的11株则属于B1b基因亚型.B1a和B1b基因亚型内核苷酸序列同源性分别为99.9％～100％和92.93％～ 100％.不同基因亚型毒株间核苷酸序列差异为8.43％～9.45％.结论 2010-2012年,属于B1a和B1b基因亚型的CVA16在陕西省共同循环,其中B1b基因亚型流行范围较广,可能为陕西省的优势亚型.

关键词：手足口病科萨奇病毒感染,流行病学分子

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宁夏2010年柯萨奇病毒A组16型VP1基因特征分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2014年第3期28卷 176-177页

作者：檀晓娟马江涛陈慧祝双利詹军许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学和病毒病重点实验室北京102206 宁夏自治区疾病预防控制中心

目的分析2010年宁夏回族自治区流行的柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16,CA16）VP1基因特征.方法用特异引物通过逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR）,对2010年分离自宁夏手足口病（hand,foot,and mouth disease,HFMD）病例的CA16毒株,进行VP1编码基因的扩增.扩增阳性产物进行序列测定,采用生物信息学软件进行分析.结果本研究共获得62株CA16的VP1编码序列,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别为90.1％～100％（平均94.5％）和98.7％～100％（平均99.6％）.在亲缘性关系树上与B1基因亚型毒株位于相同分支,且各个地市流行株又同时存在B1a和B1b分支.结论与全国流行情况相一致,宁夏2010年存在B1a和B1b分支CA16的共循环,毒株间具有较大的核苷酸序列差异,提示流行中存在多个传播链.

关键词：柯萨奇病毒感染手足口病流行病学,分子

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TRIzol（或TriPure）试剂结合QIAamp Viral RNA Mini试剂盒用于血标本中病毒RNA提取的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2014年第5期28卷 324-326页

作者：李伟红李建东李阿茜曲靖王芹张福顺芜为孙丽娜张硕李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学重点实验室北京102206

目的建立一种安全、简便、可靠的适用于血标本中有包膜RNA病毒核酸提取的方法,保证埃博拉病毒核酸筛查的实验室安全,提高标本的核酸检测效率.方法根据已发表可完全灭活埃博拉病毒的方法,通过实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT... 详细信息

目的建立一种安全、简便、可靠的适用于血标本中有包膜RNA病毒核酸提取的方法,保证埃博拉病毒核酸筛查的实验室安全,提高标本的核酸检测效率.方法根据已发表可完全灭活埃博拉病毒的方法,通过实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）方法,比较分析QIAamp Viral RNA Mini试剂盒、TRIzol（或TriPure）试剂裂解样本并用或不用氯仿萃取后结合QIAamp Viral RNA Mini试剂盒等3种方法提取核酸的效率,优化反应步骤,建立一种安全、简便的血标本中病毒RNA提取方法.结果血标本经TRIzol（或TriPure）试剂处理后,不经氯仿萃取,与QIAamp Viral RNA Mini试剂盒结合,提取病毒RNA,RNA提取效率优于QIAamp Viral RNA Mini试剂盒和美国CDC推荐的方法.结论采用TRIzol（或TriPure）试剂裂解病毒,结合QIAamp Viral RNAMini试剂盒提取病毒RNA的方法简便、可靠,可用于埃博拉出血热相关标本的核酸检测.

关键词： RNA 逆转录聚合酶链反应埃博拉病毒

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扎伊尔型埃博拉病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2014年第5期28卷 321-323页

作者：李阿茜李伟红李建东张硕曲靖李川张全福梁米芳李德新中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学重点实验室北京102206

目的建立扎伊尔型埃博拉病毒的核酸检测方法,以期用于埃博拉出血热临床标本的检测.方法针对扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白和糖蛋白基因设计引物和探针,建立单重和双重实时荧光RT-PCR检测方法,利用体外转录病毒RNA和埃博拉病毒系列参考品RN... 详细信息

目的建立扎伊尔型埃博拉病毒的核酸检测方法,以期用于埃博拉出血热临床标本的检测.方法针对扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白和糖蛋白基因设计引物和探针,建立单重和双重实时荧光RT-PCR检测方法,利用体外转录病毒RNA和埃博拉病毒系列参考品RNA评价其敏感性,利用马尔堡病毒、健康人、登革热患者和发热伴血小板减少综合征患者血清评价其特异性.结果所建立的实时荧光RT-PCR检测方法扩增效率在95％～105％,可特异性地检测扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白和糖蛋白基因,与马尔堡病毒、登革热和发热伴血小板减少综合征病毒均无交叉反应,体外转录的病毒RNA可检出10～100拷贝/μl.双重检测方法通过细胞培养的扎伊尔型埃博拉病毒RNA验证,可检出100 pfu/ml病毒.结论本研究建立的检测扎伊尔型埃博拉病毒的实时荧光RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于埃博拉出血热临床标本的检测.

关键词：扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白糖蛋白实时荧光逆转录聚合酶链反应

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铜绿假单胞菌外毒素A基因突变体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

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中国生物制品学杂志 2014年第1期27卷 23-27页

作者：姚立红徐一陈爱珺郭建强薄洪尉玉杰张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 中国动物疫病预防控制中心北京100125 莱阳市畜牧兽医局山东莱阳265200

目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pse... 详细信息

目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,***)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析。结果测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性。结论已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌外毒素基因突变体原核细胞基因表达

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长沙市甲型H1N1流感抗体水平趋势数学模型模拟研究

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中国预防医学杂志 2014年第3期15卷 173-180页

作者：陈田木陈涛刘如春谢知胡伟红李亚曼李叶兰长沙市疾病预防控制中心湖南长沙410001 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室

目的采用常微分方程（ordinary differential equation,ODE）模型模拟长沙市甲型H1N1流感抗体水平。方法根据甲型H1N1流感在人群中的传播及抗体消长特点,建立全人群及各年龄组人群抗体水平变化趋势的ODE模型,利用长沙市人口学资料、以... 详细信息

目的采用常微分方程（ordinary differential equation,ODE）模型模拟长沙市甲型H1N1流感抗体水平。方法根据甲型H1N1流感在人群中的传播及抗体消长特点,建立全人群及各年龄组人群抗体水平变化趋势的ODE模型,利用长沙市人口学资料、以及长沙市人群血清学横断面调查资料拟合模型参数,并模拟长沙市人群的抗体水平变化趋势、以及抗体水平低于人群最低免疫屏障的具体时间。结果大流行结束后疫苗接种者抗体水平高于未接种者,但前者的抗体消失速度高于后者,两者抗体水平分别在2010年12月和2013年1月开始接近人群最低免疫屏障。在疫苗接种人群中,抗体消失速度最快的是＂≥60岁＂年龄组,最慢的是＂0~5岁＂年龄组,而＂6~15岁＂、＂16~24岁＂、＂25~59岁＂3个年龄组人群抗体水平消失速度较为接近。在未接种疫苗人群中,抗体消失速度最快的是＂6-15岁＂年龄组,其次是＂16-24岁＂、＂0~5岁＂、＂≥60岁＂年龄组,最慢的是＂25-59岁＂年龄组。长沙市流感监测数据显示,2013年1月开始甲型H1N1流感成为优势毒株,并在1-4月份发生4起甲型H1N1流感暴发疫情和1起流感样病例暴发疫情,这与模型预测结果相似。结论本研究建立的ODE模型可以较好地模拟长沙市甲型H1N1流感抗体水平变化特点。疫苗接种获得的免疫屏障维持时间比自然感染短。不同年龄组获得免疫屏障水平不同、消减速度亦不同。

关键词：甲型H1N1流感抗体常微分方程模型模拟

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中国风疹病毒基因型流行趋势研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2014年第6期28卷 437-439页

作者：朱贞崔爱利张燕毛乃颖许松涛姬奕昕宋杰许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋区麻疹风疹参比实验室卫生部医学病毒学和病毒病重点实验室北京102206 吉林大学第二医院

目的分析1999-2012年中国（未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区）风疹病毒基因型的流行趋势.方法依据中国麻疹和风疹实验室网络病毒学监测数据库,以及国家麻疹和风疹实验室风疹病毒学监测数据,进行中国流行风疹病毒基因型的动态监... 详细信息

目的分析1999-2012年中国（未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区）风疹病毒基因型的流行趋势.方法依据中国麻疹和风疹实验室网络病毒学监测数据库,以及国家麻疹和风疹实验室风疹病毒学监测数据,进行中国流行风疹病毒基因型的动态监测.结果 1999-2012年从全国27个省（自治区、直辖市）分离到1017株风疹病毒株：其中847株为1E基因型（2001-2012年）,分布于我国所有已开展风疹病毒学监测的27个省、区;15株为1F基因型（1999-2002年）,分布于河南、安徽和山东三省;3株为疫苗类似株2A基因型（2001年）,分离于山东省;152株为2B基因型（2000、2006、2008、2011、2012年）,从全国13个省、区、市分离到.在2002年之后未再检测到1F和2A基因型.结论通过对1999-2012年中国27个省、区流行的风疹病毒的分子流行病学研究,阐明了我国流行的风疹病毒的基因型流行趋势及其在地域和年代上的分布,并证实近年来我国风疹病毒的流行是由1E和2B基因型共循环引起的多个传播链所致,其中1E基因型为优势,2B基因型为弱势.

关键词：风疹病毒属流行病学,分子基因型

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2012-2013流感监测年度中国大陆B型流感病毒抗原性及基因特性分析

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疾病监测 2014年第1期29卷 14-20页

作者：李希妍成艳辉谭敏菊王钊黄维娟郭俊峰隗合江肖宁蓝雨赵翔杨磊王大燕舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的了解2012-2013流感监测年度中国大陆地区B型流感的流行状况,分析B型流感病毒的抗原性和基因变异情况。方法选择2012-2013年我国分离的B型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析。利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用Neighbo... 详细信息

目的了解2012-2013流感监测年度中国大陆地区B型流感的流行状况,分析B型流感病毒的抗原性和基因变异情况。方法选择2012-2013年我国分离的B型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析。利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用Neighbor-Joining方法进行种系进化分析,通过基因进化树比较国内流行株与疫苗株的差异。结果 2012-2013监测年度内,B型流感病毒占所有流感病毒的9.93%,其中以B型Victoria系流感病毒为主。B型Victoria系流感病毒的抗原性与上一年度WHO推荐的疫苗株B/Brisbane/60/2008(83.5%)以及我国代表株B/Chongqing-Yuzhong/1384/2010(94.7%)的抗原性类似;而B型Yamagata系流感病毒绝大多数为WHO疫苗株B/Wisconsin/01/2010(99.3%)、WHO疫苗种子株B/Hubei-Wujiagang/158/2009(98.0%)的类似株;基因特性分析显示有1株B-Victoria系病毒发生了HA与NA基因分支间的重配,有1株B-Yamagata系病毒B/Sichuan-Gaoxin/1110/2012的NA基因位于Victoria系病毒的NA进化分支,也表明发生了种系间的基因重配。结论 2012-2013流感监测年度我国B型流感病毒活动水平较低,主要以Victoria系为主,而WHO推荐的疫苗组分是B-Yamagata系病毒,可见部分B型流感流行株与疫苗株并不匹配。

关键词： B型流感病毒抗原性基因特性

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慢性乙型肝炎病例乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量和乙型肝炎病毒e抗原状态与丙氨酸氨基转移酶的相关性研究

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中国疫苗和免疫 2014年第4期20卷 294-298,323页

作者：郑徽王富珍沈立萍张国民王锋陈园生龚晓红崔富强梁晓峰中国疾病预防控制中心免疫规划中心北京100050 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒学和病毒病重点实验室北京102206

目的研究慢性乙型肝炎（乙肝）病例（Chronic Hepatitis B Patient,CHBP）乙肝病毒（Hepatitis B Virus,HBV）复制、乙肝病毒e抗原（HBV e Antigen,HBeAg）状态与丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase,ALT）检测值之间的相关关系。方法对31个省（自治区、直辖市）发现的确诊CHBP采血,检测肝功能和HBV感染血清学标志物[乙肝病毒表面抗原（HBV Surface Antigen,HBsAg）、HBeAg]及乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV Deoxyribonucleic Acid,DNA）载量。ALT指标在采血24h内由当地医疗机构检测。HBsAg、HBeAg及HBV DNA载量检测由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所统一完成。HBsAg、HBeAg使用美国雅培（Abbott）试剂光化学发光微粒子免疫分析法（Chemiluminesent Microparticle Immunoassay,CMIA）检测。HBV DNA载量使用实时聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）工具包（中国复星医药有限公司）检测。结果〈20岁、20~40岁和〉40岁CHBP中,高病毒载量[HBV DNA〉105拷贝/毫升（Copies/ml）]者比例分别为70.21%、40.37%和28.75%（χ2=29.38,P〈0.001）。在HBV DNA低（〈103Copies/ml）、中（103~105Copies/ml）、高（〉105Copies/ml）载量组内,HBeAg阳性率分别为2.36%、9.40%和82.24%,两两差异均有统计学意义（χ2=5.57,P=0.02;χ2=177.78,P〈0.001;χ2=140.31,P〈0.001）。多因素分析结果显示,影响CHBP ALT的独立因素有年龄、性别和HBV DNA载量。相对于0~19岁CHBP,20~39岁CHBP ALT升高比值比（Odds Rate,OR）=3.27[95%可信区间（Confidence Interval,CI）：1.32~8.01],〉40岁CHBP ALT升高OR=3.92（95%CI：1.54~9.98）。相对于女性,男性CHBP ALT升高OR=2.93（95%CI：1.64~5.24）。中病毒载量和低病毒载量对CHBP ALT的影响差异无统计学意义（χ2=0.20,P=0.66）,但高病毒载量组ALT升高的OR=3.01（95%CI：1.33~6.80）。结论 HBeAg阳性CHBP体内HBV复制活跃,HBV DNA高病毒载量是CHBP ALT升高的危险因素。

关键词：慢性乙型肝炎病例乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸乙型肝炎病毒e抗原丙氨酸氨基转移酶

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柯萨奇病毒A组16型病毒样颗粒的制备及其免疫原性

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中国生物制品学杂志 2014年第11期27卷 1361-1368,1374页

作者：陈祥鹏毛乃颖张勇谢正德许文波首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿科学国家重点学科教育部儿科重大疾病研究重点实验室北京100045 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),通过条件优化,提高VLP的表达量,纯化后检测其免疫原性。方法对CVA16结构蛋白基因P1及蛋白酶基因3CD进行密码子优... 详细信息

目的应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),通过条件优化,提高VLP的表达量,纯化后检测其免疫原性。方法对CVA16结构蛋白基因P1及蛋白酶基因3CD进行密码子优化,插入启动子P10改造为CMV的重组杆状病毒表达载体p Fast Bac Dual-CMV中,获得重组穿梭质粒p Fast Bac Dual-CMV-P1-3CD,转化DH10 Bac TM Competent Cells,提取重组杆粒Bacmid-CMVP1-3CD,转染Sf9细胞,组装成重组杆状病毒Ac MNPV-CMV-P1-3CD,并进行扩增,采用间接免疫荧光法、Western blot法及透射电镜观察对表达产物进行初步鉴定。对重组CVA16 VLP的表达条件(病毒接种MOI值、感染时间及细胞培养方式)进行优化后,通过20%蔗糖垫层及氯化铯连续密度梯度离心法纯化CVA16VLP,并通过腹部皮下注射免疫ICR小鼠3次,采用间接ELISA法检测小鼠血清特异性Ig G抗体滴度,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度。结果重组杆状病毒Ac MNPV-CMV-P1-3CD经PCR及测序鉴定证实组装成功;重组CVA16 VLP在Sf9细胞中成功表达,优化的表达条件为:重组杆状病毒Ac MNPV-CMV-P1-3CD按MOI=5接种,Sf9细胞采用悬浮培养方式悬浮培养96 h,收集细胞及培养上清;纯化的CVA16 VLP纯度可达90%以上,针对VP2的单克隆抗体能与VP0及VP2发生特异性反应,电镜下可见大量形态规则的类球形VLP,直径约为27 nm;纯化的CVA16 VLP免疫ICR小鼠后,诱导机体产生的特异性血清Ig G滴度可达1∶105,中和抗体滴度达1∶358。结论应用杆状病毒表达系统成功表达了CVA16的P1和3CD蛋白,并组装形成完整的VLP;通过质粒启动子的改造及表达条件的优化,有效提高了CVA16 VLP的表达量;纯化的CVA16 VLP可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,为CVA16亚单位疫苗的研究提供了参考。

关键词：手足口病柯萨奇病毒A组16型病毒样颗粒免疫原性

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