检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理学报 2002年第4期34卷 469-474页

作者：修朝阳周贺钺俞璎戴金凤陈常庆中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心上海200233

采用全基因分段合成和补丁连接相结合的方法构建了人甲状旁腺素 (hPTH) (1～ 34)肽基因 ,并利用GST融合表达系统 ,在大肠杆菌中克隆和可溶性表达了hPTH(1～ 34)肽基因。融合蛋白表达量占菌体总蛋白质的 2 5 %以上 ,经高密度发酵、亲和... 详细信息

采用全基因分段合成和补丁连接相结合的方法构建了人甲状旁腺素 (hPTH) (1～ 34)肽基因 ,并利用GST融合表达系统 ,在大肠杆菌中克隆和可溶性表达了hPTH(1～ 34)肽基因。融合蛋白表达量占菌体总蛋白质的 2 5 %以上 ,经高密度发酵、亲和纯化后 ,在每升发酵液中得到了 10 g融合蛋白。融合蛋白经肠激酶一步加工并亲合纯化和反相脱盐后 ,最终可以得到约 0 .6g /L人甲状旁腺素 (1～ 34)肽纯品 ,样品的理论回收值达到了4 8.75 %。产物的纯度和性质经HPLC、毛细管电泳、质谱分析、N端测序等得到证明 ,并与化学合成产物的结果相吻合。兔肾皮质细胞测活表明 ,重组产物与化学合成人甲状旁腺素 (1～ 34)肽具有相近的腺苷酸环化酶激活活性。

关键词：甲状旁腺素肠激酶脱水糜蛋白酶亲和柱亲和纯化

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脂肪组织特异表达的脂连蛋白(Adiponectin)及其球状区的克隆表达及体内活性的检测(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第11期35卷 1023-1028页

作者：胡小波张育坚张惠堂杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心上海200233 中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心

3T3 L1脂肪细胞特异分泌一分子量约为 30kD的蛋白质 ,命名为ACRP30。ACRP30只在分化后的脂肪细胞中表达 ,在对胰岛素敏感度不一样的老鼠模型中 ,降低ACRP30的表达与胰岛素不敏感有关。为了研究人ACRP30同源基因 ,运用RT PCR方法分别克... 详细信息

3T3 L1脂肪细胞特异分泌一分子量约为 30kD的蛋白质 ,命名为ACRP30。ACRP30只在分化后的脂肪细胞中表达 ,在对胰岛素敏感度不一样的老鼠模型中 ,降低ACRP30的表达与胰岛素不敏感有关。为了研究人ACRP30同源基因 ,运用RT PCR方法分别克隆了脂连蛋白和球状区脂连蛋白 (脂连蛋白的C端球状区域 )基因 ,并在大肠杆菌中获得了融合表达。用融合球状区脂连蛋白蛋白免疫新西兰兔 ,得到了滴度为 1 0 0 0 0的多克隆抗体。用Western印迹方法检测到了人血液中一种能与该抗体作用的大小约为 38kD的蛋白质 ,此蛋白质也能被抗ACRP30的抗体检测到。单一注射融合脂连蛋白或者球状区脂连蛋白能显著降低糖尿病大鼠的血糖浓度 ,这些结果提示重组的脂连蛋白和球状区脂连蛋白具有生物学活性 ,为脂连蛋白的功能研究打下了一定的基础

关键词：脂连蛋白球状区脂连蛋白克隆和表达糖尿病

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新型高密度发酵基因工程菌G830

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生物化学与生物物理学报 2001年第3期33卷 296-302页

作者：杨运桂张惠堂童芹杨艳华王又杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心!上海200233 中国科学院上海生命科学研究院生?

运用PCR方法 ,从磷酸乙酰转移酶 (Pta) 乙酸激酶 (Ack)代谢途径缺失菌株E .coliPA1染色体上 ,扩增出天冬氨酸激酶 I 高丝氨酸脱氢酶 I(thrA)和高丝氨酸激酶 (thrB)基因部分序列 ,构建了整合型重组质粒 pVHb Kan ;应用染色体质粒同源重... 详细信息

运用PCR方法 ,从磷酸乙酰转移酶 (Pta) 乙酸激酶 (Ack)代谢途径缺失菌株E .coliPA1染色体上 ,扩增出天冬氨酸激酶 I 高丝氨酸脱氢酶 I(thrA)和高丝氨酸激酶 (thrB)基因部分序列 ,构建了整合型重组质粒 pVHb Kan ;应用染色体质粒同源重组的方法 ,将透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscillahaemoglobin ,VHb)基因整合到大肠杆菌PA1染色体上的thr操纵子 ,构建了新型整合工程菌G830。在高密度发酵条件下 ,G830的细胞呼吸强度、能量代谢、最高菌密度和细胞干重 ,均明显优于对照菌株PA1和BL2 1;重组蛋白脯氨酰内肽酶在G830和PA1中获得稳定高表达 ;重组菌生长状况及发酵指标均与空宿主菌基本一致且表达质粒能维持较好的稳定性。整合型vhb的表达及乙酸代谢途径 (Pta Ack)的缺陷 ,改善了宿主在贫氧条件下的生长 ,且促进了重组蛋白的表达。该工程菌具有良好的氧耐受力 ,且乙酸积累得到大幅度降低 ,可作为适于高密度发酵的基因工程菌

关键词：高密度发酵透明颤菌血红蛋白苏氨酸操纵子乙酸代谢途径脯氨酰内肽酶

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人B淋巴细胞刺激因子C端肽的免疫增强作用

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第12期35卷 1128-1132页

作者：田瑞阳韩威俞缨陈悦虞谷松杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心上海200233

用套式PCR从人胎脑cDNA文库中克隆了B淋巴细胞刺激因子C端肽 (C terminalpeptideofBlymphocytestimulator,C BLyS)的cDNA。在大肠杆菌BL2 1CodonPlus (DE3)RIL中以包含体形式表达了C BLyS。对包含体的复性条件进行了摸索 ,建立了C BLyS的透析复性与纯化方法。经复性和纯化的C BLyS可结合其受体B细胞成熟抗原 (Bcellmaturationantigen ,BCMA) 人IgG1Fc融合蛋白 ,刺激体外培养的小鼠脾脏细胞增殖 ,并且可明显增强小鼠对溶菌酶的免疫应答水平。

关键词： C-BLyS BCMA 复性包含体

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酵母双杂交检测C17orf2 5蛋白与ADP-核糖焦磷酸水解酶NUDT9的相互作用(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第8期35卷 747-751页

作者：张惠堂颜志强胡小波杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心上海200233

通过RACEPCR的方法从肝组织中分离得到C17orf2 5基因。利用酵母双杂交的方法以C17orf2 5为结合结构域筛选人HeLacDNA文库分离得到nudt9基因。NUDT9是一种焦磷酸酶 ,可以将ADP 核糖水解成AMP和核糖 5 磷酸。在大肠杆菌中直接表达了C17orf... 详细信息

通过RACEPCR的方法从肝组织中分离得到C17orf2 5基因。利用酵母双杂交的方法以C17orf2 5为结合结构域筛选人HeLacDNA文库分离得到nudt9基因。NUDT9是一种焦磷酸酶 ,可以将ADP 核糖水解成AMP和核糖 5 磷酸。在大肠杆菌中直接表达了C17orf2 5蛋白、6×His tag与NUDT9的融合蛋白质 ,两者均以包涵体形式存在。蛋白质条带割胶纯化 ,并复性。之后的NTA Ni2 + 亲和柱层析实验表明这两种蛋白质在体外相互作用。将C17orf2 5与绿色荧光蛋白基因在SMMC772 1中融合表达 ,结果表明C17orf2 5蛋白可能定位在线粒体中 ,侧面印证了在细胞内与NUDT9作用的空间可能性。ADP 核糖在体内具有重要的生理作用 ,在细胞内的累积对细胞生长不利 ;同时 ,ADP 核糖化是一种重要的蛋白质修饰方式 ,与多种细胞凋亡的发生有关。因此从实验结果可以判断 ,C17orf2 5对细胞生长的抑制作用可能通过与NUDT9的相互作用来实现

关键词： C17orf25 NUDT9 酵母双杂交线粒体 ADP-核糖

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新型大肠杆菌裂解系统在重组蛋白回收中的应用(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第3期32卷 211-216页

作者：杨运桂童芹胡泰山钱友存杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院上海生物工程研究中心!上海200233

溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌 ,利用此特性 ,构建温度敏感的内源裂解系统 ,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒 pSC lys(pSC10 1复制子 )和p15A lys(p15A复制子 ) ,质粒与工程菌构... 详细信息

溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌 ,利用此特性 ,构建温度敏感的内源裂解系统 ,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒 pSC lys(pSC10 1复制子 )和p15A lys(p15A复制子 ) ,质粒与工程菌构成了新型内源裂解系统 ,该系统可以与高拷贝复制子 (如 pMB1,ColE1)的重组蛋白表达质粒兼容。结果表明 ,裂解系统的最适裂解条件由三个要素构成 :pSC lys 工程菌、2～ 5倍浓缩培养物、裂解缓冲液 (2mmol/LEDTA ,5 0mmol/LTris HCl,pH 8.0 )。在最适裂解条件下 ,胞液 β 半乳糖苷酶 ,重组蛋白分子伴侣GroEL及ZZ融合鲑鱼降钙素六聚体均能简单、迅速、定量地释放到裂解液上清 ,两种重组蛋白的表达量均能维持原来的表达水平。此系统可以代替传统的菌体裂解方法 ,在重组蛋白纯化前的回收方面具有较大的应用价值。

关键词：大肠杆菌 T4溶菌酶裂解系统重组蛋白 β-半乳糖苷酶

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Kil蛋白介导的大肠杆菌外泌表达系统

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第5期33卷 537-541页

作者：童芹张惠堂杨运桂杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心!上海200233

利用大肠杆菌素释放基因 (kil)能有效地增加细菌外膜通透性促进周质蛋白外泌的原理构建了含kil基因的大肠杆菌外泌表达系统。将大肠杆菌本身的周质分泌蛋白β 内酰胺酶和异源周质分泌蛋白点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶作为报告蛋白 ,观察... 详细信息

利用大肠杆菌素释放基因 (kil)能有效地增加细菌外膜通透性促进周质蛋白外泌的原理构建了含kil基因的大肠杆菌外泌表达系统。将大肠杆菌本身的周质分泌蛋白β 内酰胺酶和异源周质分泌蛋白点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶作为报告蛋白 ,观察Kil蛋白对这两种通常极少分泌到胞外的周质蛋白胞外分泌的促进作用。我们的研究显示 :kil基因表达时 ,β 内酰胺酶的总活性较对照组提高 1倍 ,胞外分泌活性较对照组提高近 4倍。脯氨酰内肽酶的总活性较对照组提高 0 .8倍 ,胞外分泌活性较对照组提高 3倍

关键词： kil基因胞外分泌 β-内酰胺酶脯氨酰内肽酶

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大鼠脑特异基因rRP58的克隆及定位分析

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第5期33卷 563-568页

作者：康建胜杨永臣刘海兰李永红杜雨苍李荣秀中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所!上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心!上海200233

EST(AW 0 5 5 733)是在SD大鼠脑内一特异表达基因cDNA的 3′端片段 ,与人和小鼠的一个转录抑制因子基因 (RP5 8)同源。利用RT PCR的方法 ,从SD大鼠脑中得到rRP5 8基因两个不同长度的转录本。全长的rRP5 8基因编码产物为C2 H2 型锌指蛋... 详细信息

EST(AW 0 5 5 733)是在SD大鼠脑内一特异表达基因cDNA的 3′端片段 ,与人和小鼠的一个转录抑制因子基因 (RP5 8)同源。利用RT PCR的方法 ,从SD大鼠脑中得到rRP5 8基因两个不同长度的转录本。全长的rRP5 8基因编码产物为C2 H2 型锌指蛋白 ,含两个保守结构域 :氨基端的POZ结构域及羧基端的锌指结构域 (ZFD)。在POZ和ZFD结构域之间的序列 ,BLAST搜索未发现保守结构 ,但是富含酸性氨基酸残基。将编码ZFD结构域 (nt10 33～ 15 6 9)及POZ结构域 (nt 1～ 372 )的序列克隆到原核表达载体 pQE30中 ,表达并分离纯化了His6 ZFD和His6 POZ(融合了 6个组氨酸标签的蛋白质产物 )。用His6 ZFD和His6 POZ免疫兔子后 ,得到了ZFD和POZ两者的多克隆抗体 ,并利用所制备的抗体进一步分析了rRP5 8基因多转录本产物在大鼠中的组织分布 ,免疫组织化学实验结果显示rRP5 8蛋白主要分布在小脑颗粒细胞中

关键词： rRP58 锌指结构 POZ 大鼠脑抗体

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微生物混合培养从D山梨醇产生维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸

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微生物学报 2001年第6期41卷 709-715页

作者：尹光琳林文楚乔春红叶晴中国科学院上海生命科学研究院上海生物工程研究中心上海200233

氧化葡萄糖酸杆菌 (Gluconobacteroxydans)SCB3 2 9以D 山梨醇为底物培养时可产生微量 2 酮基 L 古龙酸 ;而葡萄糖酸杆菌 (Gluconobactersp .)SCB1 1 0能将D 山梨醇以较高效率转化为L 山梨糖 ,但不产 2 酮基 L 古龙酸。将两种微生物... 详细信息

氧化葡萄糖酸杆菌 (Gluconobacteroxydans)SCB3 2 9以D 山梨醇为底物培养时可产生微量 2 酮基 L 古龙酸 ;而葡萄糖酸杆菌 (Gluconobactersp .)SCB1 1 0能将D 山梨醇以较高效率转化为L 山梨糖 ,但不产 2 酮基 L 古龙酸。将两种微生物在以山梨醇为底物的培养基中混合培养 ,其代谢产物经分离提纯后进行熔点测定、元素分析、红外吸收光谱测定等 ,确定其主要的代谢产物是 2 酮基 L 古龙酸。

关键词：氧化葡萄糖酸杆菌SCB329 葡萄糖酸杆菌SCB10 D-山梨糖 2-酮基-L-古龙酸混合培养维生素C前体

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HRCA技术在转基因植物检测中的应用

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生物工程学报 2003年第3期19卷 294-300页

作者：陶震蔡兴锋颜志强胡小波杨胜利龚毅中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心上海200233

超分支滚环扩增技术 (Hyperbranchedrollingcycleamplification ,HRCA)在近几年中逐渐引起人们的注意 ,并越来越多的用于基础研究和实际检测中。在本文中我们对该技术在转基因植物检测中的应用情况作了较全面的探索 ;根据 4种转基因植... 详细信息

超分支滚环扩增技术 (Hyperbranchedrollingcycleamplification ,HRCA)在近几年中逐渐引起人们的注意 ,并越来越多的用于基础研究和实际检测中。在本文中我们对该技术在转基因植物检测中的应用情况作了较全面的探索 ;根据 4种转基因植物中常用的外源基因或DNA片段设计了 4条锁式探针 (Padlockprobe) ,利用质粒pKK2 32 8中的一段序列作为锁式探针中的共同连接部分 ,并根据该共同的连接部分序列设计一对通用的HRCA引物 ;利用同位素标记的锁式探针对HRCA反应中的连接一步的特异性研究表明 ,只有当锁式探针和相应的检测靶DNA同时存在于连接体系中时 ,锁式探针才能被有效地进行连接 ,从线性分子变为环型分子 ,在没有相应靶DNA存在时锁式探针仅以线性形式存在 ;连接时间的研究表明 ,如果所检测的靶DNA是质粒或较短的DNA片段时 ,较短的连接时间 (5～ 10min)就可以取得理想的最终检测效果 ,如果检测的靶DNA是复杂的植物基因组DNA时 ,连接时间需要较大程度的延长 (30～ 6 0min)才能取得理想的最终检测结果 ;HRCA的反应时间研究表明 ,较长的反应时间可以明显增加最终产物的量 ;对BstDNA聚合酶大片段酶用量的研究表明 ,在其它条件不变的情况下酶的用量可以在较大的范围内变化 (0 .5u～ 4u)而不影响最终检测结果 ;?

关键词： HRCA技术转基因植物检测锁式探针

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