目的:肺癌是目前世界上发病率和致死率最高的恶性肿瘤。原癌基因KRAS突变导致的KRAS异常活化在肺癌的发生和发展中起着重要作用。目前尚缺乏治疗KRAS突变型肺癌的药物。本课题以KRAS为靶点,寻找参与调控KRAS表达的microRNA,并探究其功能和作用机制,为肿瘤的治疗提供新的手段。方法:本课题使用两种方法预测可能调节KRAS的microRNAs,（1）利用TargetScan等在线生物信息学工具预测;（2）分析The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库中肺腺癌组织中表达下调microRNAs,然后使用TargetScan,筛选可能调节KRAS表达的microRNAs。检测通过上述两种方法获得的microRNAs对KRAS m RNA和蛋白表达以及肺癌细胞增殖能力的影响,进一步通过双荧光素报告基因的方法检测microRNAs对KRAS的作用机制。结果:miR-1205、miR-326、miR-532能通过直接作用于KRAS 3’UTR显著下调KRAS的表达,miR-1200则可能通过间接作用下调KRAS表达,同时这些microRNAs均能显著抑制肺癌细胞的增殖。
新药临床前安全性评价是决定新药能否进入临床试验的关键环节.为了提高药品非临床安全性评价研究质量,确保试验资料的真实性、完整性和可靠性,世界上有20多个国家实施了GLP(英文全称为Good Laboratory Practice for Nonclinical Laborat...
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新药临床前安全性评价是决定新药能否进入临床试验的关键环节.为了提高药品非临床安全性评价研究质量,确保试验资料的真实性、完整性和可靠性,世界上有20多个国家实施了GLP(英文全称为Good Laboratory Practice for Nonclinical Laboratory Studies,中文多译为"药物非临床研究质量规范").GLP法规的建设和完善需要各个国家的积极参与、相互借鉴和一些国际组织的协调.为了更好地理解GLP规范现状和与国际接轨,我们查阅了美国、加拿大、经济合作开发组织(Organization for Economic Cooperation and Development,OECD)和日本的GLP实施发展过程的相关资料,并对几个新规的主要的GLP法规文件内容做了比较.
目的探讨大黄素引起遗传毒性的可能机制。方法采用Ames试验,中性彗星试验,TK基因致突变试验,体内外微核试验对大黄素的遗传毒性进行全面评价。通过TopoⅡ介导的负超螺旋pBR322解旋反应和kDNA去连环反应检测大黄素对TopoⅡα活性的影响。运用in vivo complex of enzyme(ICE)的方法检测大黄素稳定TopoⅡα-DNA可切割复合物的能力,并通过计算机辅助模拟预测大黄素影响TopoⅡα活性的作用位点。结果Tk基因突变试验和体外微核试验表明,在非代谢活化的条件下,80? g/mL的大黄素具有弱的遗传毒性。中性彗星试验和磷酸化的H2AX的表达上调表明,大黄素能够引起DNA的双链断裂。体内微核试验显示4g/kg的大黄素单次给药,可以使小鼠骨髓中的微核率增加2倍。在非细胞体系中,大黄素能够抑制TopoⅡα介导的pBR322的解螺旋和kDNA的去连环。同时,大黄素可以诱导并稳定TopoⅡα-DNA的可切割复合物。分子模拟预测表明大黄素可能与ATP竞争结合TopoⅡα的ATP结合位点。结论大黄素可能通过结合TopoⅡα的ATP结合位点,抑制TopoⅡα的活性,通过捕捉和稳定TopoⅡα-DNA的可切割复合物导致DNA双链断裂的产生,引起遗传毒性。
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