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中国化学会首届全国质谱分析学术研讨会

作者：刘哲益刘静王方军邹汉法中国科学院大连化学物理研究所中科院分离分析化学重点实验室国家色谱研究分析中心

近年来,质谱技术的快速革新极大地推进了蛋白质组学的发展。作为蛋白质组学的重要分支,Top-Down蛋白质组学将整体蛋白质作为质谱分析的主体,可以有效弥补传统Bottom-Up蛋白质组学的不足,在蛋白质异构体、蛋白质位点突变以及蛋白质翻译... 详细信息

近年来,质谱技术的快速革新极大地推进了蛋白质组学的发展。作为蛋白质组学的重要分支,Top-Down蛋白质组学将整体蛋白质作为质谱分析的主体,可以有效弥补传统Bottom-Up蛋白质组学的不足,在蛋白质异构体、蛋白质位点突变以及蛋白质翻译后修饰的相互关联等分析中起着重要作用[1]。由于蛋白质分子量较大,整体蛋白质分析主要使用高分辨率的离子回旋共振质谱[2],该类型质谱仪价格昂贵且维护成本高,极大地限制了整体蛋白质分析的发展和推广。新型四极杆轨道阱质谱结合了四极杆高通量的选择性和轨道阱的高分辨率,在以肽段为主体的"鸟枪法"蛋白质组学分析中展现出巨大的潜力[3],但是其应用于高通量整体蛋白分析的研究较少。本研究利用蛋白标准品混合标样考察新型四极杆轨道阱质谱用于30 KDa以下整体蛋白的检测,并优化了相关参数。常规蛋白质色谱分析流动相中通常采用三氟乙酸(TFA)作为流动相添加剂以改善蛋白质的色谱分离效率。但在液质联用分析中,TFA具有较强的离子抑制效应。我们发现当蛋白浓度较高时,使用0.05%TFA作为流动相添加剂,相对于液质联用中常用的0.1%FA,质谱响应信号并没用表现出明显的降低。这可能归因于TFA对色谱峰型的改善增加了峰强度,从而在一定程度上弥补了其离子抑制效应。对于核酸酶B和细胞色素C的分析表明,糖基化修饰和共价配基的存在会极大地影响质谱数据的鉴定分析,同时二硫键的存在会阻碍整体蛋白的二级质谱碎裂。此外,我们还考察了高能碰撞碎裂(HCD)模式二级碎裂能量对整体蛋白碎裂的影响,随着能量的提高(25-45%),蛋白质二级碎裂质谱信息逐渐减少,对于一般的蛋白,最佳HCD能量为25%。糖蛋白由于糖基断裂在HCD过程中优先于蛋白骨架碎裂,当采用25%的HCD能量时,二级碎裂信息较少,最佳HCD能力为30-35%。

关键词：四极杆轨道阱质谱整体蛋白质分析液相色谱分离高能碰撞碎裂

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采用LC-MS技术研究不同地域下植物代谢物的差异

采用LC-MS技术研究不同地域下植物代谢物的差异

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第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会

作者：李丽丽赵春霞常玉玮路鑫许国旺中国科学院大连化学物理研究所中科院大连化物所分离分析化学重点实验室大连116023

光照、温度、水分、土壤等是植物生存必不可少的条件,它们直接影响着植物的生长发育。植物在长期进化过程中,形成了一套防御保护机制,在形态及生理生化代谢上进行调节以适应和抵御环境的变化。基于此,在不同的地域条件下,同一品种植物... 详细信息

光照、温度、水分、土壤等是植物生存必不可少的条件,它们直接影响着植物的生长发育。植物在长期进化过程中,形成了一套防御保护机制,在形态及生理生化代谢上进行调节以适应和抵御环境的变化。基于此,在不同的地域条件下,同一品种植物的代谢表型也是不

关键词： LC-MS 植物代谢组学不同地域条件

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基于反相有机整体柱的新型蛋白质酶反应器

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分析化学 2013年第1期41卷 10-14页

作者：刘静王方军张振宾邹汉法中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室中国科学院研究生院

以牛血清白蛋白(BSA)为标准样品,以鉴定的独立肽段数目、蛋白质鉴定覆盖率和漏切率为考察指标,通过考察酶解缓冲液、反相柱基质的多孔结构、酶解反应时间和整体柱的疏水性对反相蛋白质酶反应器酶解效率的影响,构建了一个基于反相有机整... 详细信息

以牛血清白蛋白(BSA)为标准样品,以鉴定的独立肽段数目、蛋白质鉴定覆盖率和漏切率为考察指标,通过考察酶解缓冲液、反相柱基质的多孔结构、酶解反应时间和整体柱的疏水性对反相蛋白质酶反应器酶解效率的影响,构建了一个基于反相有机整体柱的新型酶反应器,此反应器具有制备简单、通透性好、酶解时间短和蛋白质鉴定覆盖率高等特点。

关键词：反相有机整体柱蛋白质酶反应器液相色谱-质谱联用

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液相色谱-串联四级杆质谱联用测定大肠杆菌中的核苷

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分析化学 2013年第1期41卷 36-41页

作者：谢玉萍田晶高鹏许国旺费旭王一大连工业大学生物工程学院中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室

采用Acquity UPLC HSS T3色谱柱,以乙腈-10 mmol/L乙酸铵为流动相,0.2 mL/min梯度洗脱方式辅以电喷雾离子源正离子模式多反应监测(MRM)进行定性分析,建立了一种快速高效液相色谱-串联质谱(RRLC-MS/MS)同时测定19种核苷的分析方法。19种... 详细信息

采用Acquity UPLC HSS T3色谱柱,以乙腈-10 mmol/L乙酸铵为流动相,0.2 mL/min梯度洗脱方式辅以电喷雾离子源正离子模式多反应监测(MRM)进行定性分析,建立了一种快速高效液相色谱-串联质谱(RRLC-MS/MS)同时测定19种核苷的分析方法。19种核苷的定量限及检出限分别在0.05～20μg/L和0.02～10μg/L之间;其线性相关系数均大于0.99,且线性范围满足实验要求,回收率为79.01%～119.76%;标准偏差均小于14%。本方法快速、灵敏、稳定。将本方法应用于大肠杆菌中核苷的检测,在不同生长时期的大肠杆菌中检测到7种核苷。进一步的分析显示,随生长时间的延长,大肠杆菌胞内鸟嘌呤核苷含量显著下降。

关键词：液相色谱-串联质谱核苷大肠杆菌

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基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法研究进展

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色谱 2013年第6期31卷 496-502页

作者：周愿单亦初张丽华张玉奎中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室国家色谱研究分析中心辽宁大连116023 中国科学院大学北京100039

定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了... 详细信息

定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法,包括相对定量方法和绝对定量方法,并对其发展进行了展望。

关键词：定量蛋白质组学稳定同位素标记相对定量绝对定量

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含多面体低聚倍半硅氧烷杂化毛细管整体柱的制备及修饰

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色谱 2013年第4期31卷 322-328页

作者：欧俊杰林辉刘哲益张振宾董靖邹汉法中国科学院分离分析化学重点实验室中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心辽宁大连116023 中国科学院大学北京100049

本文采用自由基聚合法原位制备了两种杂化毛细管整体柱。首先以含有一个甲基丙烯酸基团的多面体低聚倍半硅氧烷(POSS)试剂(Bu-POSS)为单体、以含有多个甲基丙烯酸基团的POSS试剂(POSS-MA)为交联剂在二元致孔剂(正丙醇/聚乙二醇400)和引... 详细信息

本文采用自由基聚合法原位制备了两种杂化毛细管整体柱。首先以含有一个甲基丙烯酸基团的多面体低聚倍半硅氧烷(POSS)试剂(Bu-POSS)为单体、以含有多个甲基丙烯酸基团的POSS试剂(POSS-MA)为交联剂在二元致孔剂(正丙醇/聚乙二醇400)和引发剂(偶氮二异丁腈)存在下发生热引发聚合,在毛细管中形成聚(Bu-POSS-co-POSS-MA)杂化整体柱;另外仅以POSS-MA为单体在相同条件下制备聚(POSS-MA)杂化整体柱,并将这两种杂化整体柱应用于小分子的毛细管液相色谱(cLC)分析。结果表明,含POSS杂化整体柱具有制备简单、重现性好以及稳定性高的特点。此外,利用聚(POSS-MA)杂化整体柱表面剩余的甲基丙烯酸基团,可以将功能单体(甲基丙烯酸硬脂酸酯等)化学键合到整体柱上,不但可以提高色谱柱效,而且使其具有不同的选择性。本文所发展的以POSS试剂为原料采用自由基聚合法制备杂化整体柱的方法为新型杂化整体柱的制备提供了一种新思路。

关键词：多面体低聚倍半硅氧烷整体柱有机-无机杂化毛细管液相色谱

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层层自主装法制备包覆多层多聚糖亲水性磁性纳米材料用于糖肽富集

层层自主装法制备包覆多层多聚糖亲水性磁性纳米材料用于糖肽富集

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第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会

作者：熊志超张维冰邹汉法华东理工大学化学与分子工程学院上海市功能材料化学重点实验室中国科学院大连化学物理研究所中科院分离分析化学重点实验室

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,在蛋白折叠、信号传导、分子识别及免疫应答等生物学过程中发挥着重要的作用。在众多糖蛋白/糖肽富集技术中,亲水相互作用色谱法因其具有高选择性、无歧视性、不破坏糖型结构和重复性好等特点而得... 详细信息

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,在蛋白折叠、信号传导、分子识别及免疫应答等生物学过程中发挥着重要的作用。在众多糖蛋白/糖肽富集技术中,亲水相互作用色谱法因其具有高选择性、无歧视性、不破坏糖型结构和重复性好等特点而得到越来越广泛的关注。目前已报道的亲水材料多为以微米硅球、聚合物球、毛细管柱为基质,嫁接琼脂糖、纤

关键词：磁性纳米材料亲水相互作用层层自主装糖肽质谱

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亲水性磁性纳米材料的制备及其在糖肽富集中的应用

亲水性磁性纳米材料的制备及其在糖肽富集中的应用

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第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,在蛋白折叠、信号传导、分子识别及免疫应答等生物学过程中发挥着重要的作用。在众多糖蛋白/糖肽富集技术中,亲水相互作用色谱法因其具有高选择性、无歧视性、不破坏糖型结构和重复性好等特点而得到越来越广泛的关注。目前已报道的亲水材料多为以微米硅球、聚合物球、毛细管柱等为基质,嫁接琼脂糖、

关键词：磁性纳米材料亲水相互作用蛋白组学糖肽质谱

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在线微柱富集纳升液相色谱-串联质谱法测定大鼠脑组织中类固醇激素

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分析化学 2013年第4期41卷 517-522页

作者：石先哲蔡斌黄思腾单圆鸿张婷婷路鑫许国旺中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室赛默飞世尔科技中国有限公司天津大学化工学院

类固醇激素对脑功能的调节越来越受到人们的关注,但其在脑组织中极其微量而且脑组织样品量相对少,这对检测方法提出了更高的挑战。本研究优化了脑组织中提取类固醇激素的预处理方法,发现乙醇的提取效果最好。经过固相萃取柱进一步纯化... 详细信息

类固醇激素对脑功能的调节越来越受到人们的关注,但其在脑组织中极其微量而且脑组织样品量相对少,这对检测方法提出了更高的挑战。本研究优化了脑组织中提取类固醇激素的预处理方法,发现乙醇的提取效果最好。经过固相萃取柱进一步纯化的样品,基质干扰明显减少。采用75μm内径的C18捕集柱和分析柱,通过阀切换连接,构建了在线微柱富集纳升液相色谱分析系统,结合纳喷离子源串联质谱法实现高灵敏检测脑组织中类固醇激素。系统考察了方法的精密度、定量曲线、回收率等分析特性。日内和日间精密度分别在4.5%～12.8%和8.3%～20.3%之间。除了孕酮略有离子抑制外,其它激素基质效应不明显,而且低、中、高3个浓度下的回收率基本都在60%～115%之间。不同类固醇激素的检出限差异较大,在0.02～10μg/L之间。与常规尺寸液相色谱-质谱系统相比,相同进样量下,该方法的灵敏度显著提高了57～714倍,同时流动相消耗量降低了几百倍。将本方法用于大鼠脑组织中类固醇激素的检测,检测到4种类固醇激素,分别为睾酮(Testosterone)0.47 ng/g,肾上腺酮(Corticosterone)26.2 ng/g,醛甾酮(Aldosterone)0.49 ng/g和皮质醇(Hydrocortisone)0.06 ng/g。本方法具有灵敏度高、样品需要量少和溶剂消耗少等优势,可用于生物组织样品中类固醇激素的测定。

关键词：纳升液相色谱串联质谱类固醇激素脑组织

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亲水模式下流动相pH值对磷酸化肽在Click OEG-CD材料上富集选择性的影响

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色谱 2013年第8期31卷 763-768页

作者：赵艳艳郭志谋李秀玲梁鑫淼大连医科大学药学院辽宁大连116044 中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室辽宁大连116023

以标准蛋白质α-酪蛋白的酶解液作为研究对象,考察流动相pH值对磷酸化肽在Click OEG-CD材料上富集选择性的影响。首先以磷酸苯二钠作为模型化合物考察流动相pH值对其在Click OEG-CD材料上的保留影响,结果表明当pH值低于磷酸根的p Ka值时... 详细信息

以标准蛋白质α-酪蛋白的酶解液作为研究对象,考察流动相pH值对磷酸化肽在Click OEG-CD材料上富集选择性的影响。首先以磷酸苯二钠作为模型化合物考察流动相pH值对其在Click OEG-CD材料上的保留影响,结果表明当pH值低于磷酸根的p Ka值时,磷酸苯二钠难以电离,与材料的离子交换作用较弱,因而保留也较弱。然后在亲水模式下流动相pH值分别为2,4,6时考察Click OEG-CD材料对α-酪蛋白的酶解液中磷酸化肽的富集选择性影响。结果表明,当流动相pH为2时,磷酸化肽不能被材料富集;当pH为4时,磷酸化肽能够被富集,而且洗脱窗口较窄;当pH为6时,磷酸化肽也能够被富集,但是洗脱窗口较宽。因此适合亲水模式下富集磷酸化肽的流动相pH值为4。本研究结果能够为今后将Click OEG-CD材料更好的应用于磷酸化肽富集提供有意义的借鉴。

关键词：流动相pH值 Click OEG—CD材料磷酸化肽

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