高温蛋白酶具有广泛的应用价值,开展产高温蛋白酶菌株筛选及其酶学性质研究,可为高温蛋白酶的进一步开发利用提供重要依据。以本实验室筛选到的产高温蛋白酶菌株中等嗜热菌BY25为对象,对其产生的蛋白酶的产酶条件及其酶学性质进行研究。结果表明,该菌株最高生长温度为55℃,最适生长温度50℃,最佳产酶温度30℃,最佳培养起始pH为pH8.0,最佳碳源为葡萄糖,高供氧量明显提高菌株产酶能力。在最优条件下培养52 h,上清液蛋白酶活达4170 U ml。酶学性质研究表明,该蛋白酶为高温中性金属蛋白酶;其最适反应pH为7.0,并具有良好的pH耐受性,在pH5~11范围内均具有良好的pH稳定性,在pH11缓冲液中孵育30 min剩余酶活力约为95%;具有较好的热稳定性,最适反应温度为55℃;EDTA能强烈抑制酶活力,而Fe、Cu对酶活力也具有一定抑制作用;表面活性剂SDS可抑制该蛋白酶活性。BY25可产生三种胞外蛋白酶,可通过培养基的更换调控产生蛋白酶的种类,如在F5M培养基中产生蛋白酶主要为碱性蛋白酶,而在J培养基中主要产生中性蛋白酶。通过硫酸铵分级沉淀、离子色谱、分子筛色谱等对F5M培养基中BY25产生的蛋白酶分离纯化,并进行纯化条件优化。
暂无评论