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第五届生态毒理学学术研讨会

作者：宫玉峰张海军耿柠波罗云任晓倩邢立国陈吉平中国科学院大连化学物理研究所分离分析化学重点实验室大连 116023 中国科学院大学北京 100049 沈阳化工研究院安全评价中心国家沈阳新药安全评价研究中心沈阳 110021

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基于LC-MS/MS的酸乳肽谱及ACE抑制活性

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食品科学 2017年第5期38卷 208-212页

作者：于洋于文皓晏嘉泽董浩董家耕靳艳祁艳霞大连海洋大学食品科学与工程学院辽宁大连116023 中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室辽宁大连116023 辽宁辉山生物科技研究有限公司辽宁沈阳110031

利用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的方法,对4种酸乳(优味舒风味发酵乳、风味发酵乳、初乳24+K风味发酵乳和十天风味发酵乳)的肽谱进行分析,分别鉴定到152、125、364条和274条肽段。利... 详细信息

利用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的方法,对4种酸乳(优味舒风味发酵乳、风味发酵乳、初乳24+K风味发酵乳和十天风味发酵乳)的肽谱进行分析,分别鉴定到152、125、364条和274条肽段。利用血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的抑制活性比较以上4种酸乳的生物活性,在相同质量浓度2.0 mg/L时,4种酸乳ACE抑制率分别为46.84%、42.75%、77.41%和63.84%。初乳24+K风味发酵乳含有肽的数量大、ACE抑制活性高可能与其独特的原料成分相关。对4种酸乳的肽谱及ACE抑制活性的考察,为进一步研究酸乳肽的功能特点和ACE抑制活性提供了理论依据。

关键词：酸乳肽谱液相色谱-串联质谱 ACE抑制活性

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应用随机寡核苷酸文库修饰磁性颗粒提高血浆蛋白质的鉴定覆盖度

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色谱 2017年第3期35卷 280-285页

作者：邓楠梁振边阳阳张明建张柯张丽华张玉奎中国烟草总公司郑州烟草研究院河南郑州450001 中国科学院大连化学物理研究所中科院分离分析化学重点实验室国家色谱研究分析中心辽宁大连116023 郑州大学第一附属医院医学研究中心河南郑州450052

基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法。采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒(MNP@ssDNA)材料,在生理缓冲体系条件下捕获... 详细信息

基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法。采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒(MNP@ssDNA)材料,在生理缓冲体系条件下捕获血浆样品中的蛋白质。比较了两种洗脱体系的洗脱效果,并利用nano-RPLC-ESIMS/MS对获得的蛋白质酶解液组分进行分析。结果表明,MNP@ssDNA材料处理后的血浆蛋白质鉴定数量提升了约29.5%,两种洗脱体系呈现良好的互补性(26.7%)。血浆中前10种高丰度蛋白质的谱图占有率从处理前的31.82%降低到21.31%(洗脱体系1)和26.20%(洗脱体系2)。在鉴定到的蛋白质中,丰度最低的蛋白质在血浆中的质量浓度约为0.29 ng/mL,该蛋白质仅在MNP@ssDNA材料处理后被鉴定到。结果证明MNP@ssDNA策略不仅能有效降低血浆中高丰度蛋白质的丰度,也为低丰度蛋白质的深度挖掘提供了新的思路。

关键词：随机寡核苷酸文库血浆蛋白质高丰度低丰度谱图数量

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高效液相色谱法分析微藻中类胡萝卜素

高效液相色谱法分析微藻中类胡萝卜素

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第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：金高娃薛松郭志谋梁鑫淼中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室

＜正＞1.引言海洋微藻作为海洋的初级生产者和海洋生物种属的主体,在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着重要作用。独特的生存环境和原始地位赋予微藻多种新颖独特的具有生物活性的脂质代谢产物,尤其作为天然类胡萝卜素的最佳来源... 详细信息

＜正＞1.引言海洋微藻作为海洋的初级生产者和海洋生物种属的主体,在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着重要作用。独特的生存环境和原始地位赋予微藻多种新颖独特的具有生物活性的脂质代谢产物,尤其作为天然类胡萝卜素的最佳来源受到人们广泛的关注。类胡萝卜素为抗氧化剂,具有预防和治疗人类疾病以及改善人体健康的功效[1]。目前微藻中类胡萝卜素的提取方法主要有有机溶剂提取法、加压溶剂提取法、超临界流体萃取法、原位萃取法和双水相萃取法等[1]。这些方法均有一

关键词：基质分散固相法微藻类胡萝卜素高效液相色谱

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酪氨酸磷酸化蛋白质组学在肝癌细胞耐药性中的研究

酪氨酸磷酸化蛋白质组学在肝癌细胞耐药性中的研究

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第三届全国质谱分析学术报告会

作者：刘震姚亚婷叶明亮中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室

肝细胞肝癌是当前死亡率最高的恶性肿瘤之一。近期对肝癌的治疗有了长足的发展,在切除手术的基础上加以化疗药物如5-Fu虽然改善了初治肝癌的预后,但其总体发病率仍无明显改善。究其根源是,由于长期使用化疗药物,使肝癌细胞获得耐药性,... 详细信息

肝细胞肝癌是当前死亡率最高的恶性肿瘤之一。近期对肝癌的治疗有了长足的发展,在切除手术的基础上加以化疗药物如5-Fu虽然改善了初治肝癌的预后,但其总体发病率仍无明显改善。究其根源是,由于长期使用化疗药物,使肝癌细胞获得耐药性,因此逆转细胞的耐药性对提高患者生存率、改善预后有着重要的意义。翻译后修饰如磷酸化在肿瘤的发生发展中扮演着重要的作用,研究表明酪氨酸磷酸化与肿瘤耐药性密切相关。Lee等通过SILAC定量蛋白质组结合酪氨酸磷酸化抗体的结果表明在耐多西他赛的前列腺癌细胞中FAK激酶作为关键的调控者[1]。Wu等通过SILAC定量蛋白质组结合酪氨酸磷酸化抗体和TiO的结果表明在耐他莫昔芬的乳腺癌细胞中FAK激酶作为关键的调控者[2]。在肝癌细胞中酪氨酸磷酸化还没有报道,并且与耐5-Fu相关的酪氨酸磷酸化更是未知。本研究前期利用细胞活性和克隆形成实验已验证肝癌耐药细胞株Bel-7402/5-Fu（图1）,通过Ti-IMAC[3]富集Bel-7402和Bel-7402/5-Fu的蛋白质磷酸化,SH2结构域[4]富集酪氨酸磷酸化,流程如下所示（图2）,我们的结果显示Bel-7402/5-Fu细胞激活12种蛋白激酶（MAPK1、MAPK7、MAPK12、MAPK13、MAPK14、LCK、PRKCD、GSK3A、PRP4B、CDK3、DYRK1B、PIK3R2）。我们的结果为临床研究肝癌细胞耐药性提供了新的思路。

关键词：肝癌翻译后修饰质谱酪氨酸磷酸化

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基于真空紫外灯的化学电离微型飞行时间质谱及其应用

基于真空紫外灯的化学电离微型飞行时间质谱及其应用

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第三届全国质谱分析学术报告会

作者：侯可勇周丽娟李金旭李海洋中国科学院分离分析化学重点实验室中国科学院大连化学物理研究所

工业过程和环境监测由于样品量少、需要连续监测等特点亟需在线或者现场检测技术[1-2]。质谱已成为化学定性分析的"金标准",敏度高、携带方便的微型质谱成为现场在线检测的趋势[3]。但是,微型化后的质谱由于真空系统缩小,其... 详细信息

工业过程和环境监测由于样品量少、需要连续监测等特点亟需在线或者现场检测技术[1-2]。质谱已成为化学定性分析的"金标准",敏度高、携带方便的微型质谱成为现场在线检测的趋势[3]。但是,微型化后的质谱由于真空系统缩小,其进样量小,灵敏度不足,难以满足痕量样品检测需求。我们在已有的真空紫外灯（VUV）单光子（SPI）软电离质谱基础上[4-5],利用高气压条件下,VUV灯电离区中施加射频电场,研制了一种新型射频增强化学电离源微型质谱。该新型电离源采用10.6 eVVUV灯,电离区包括8个不锈钢圆形电极,分别为:1个推斥电极;6个聚焦电极（SE1-SE6）;1个孔电极。电极之间均通过聚四氟乙烯绝缘,从光窗到孔电极表面的总长度为17.4 mm。推斥电极、末端聚焦电极（SE6）和孔电极分别施加电压V1、V2和V3,推斥电极和聚焦电极之间均使用阻值为2 MΩ的R电阻分开,形成均匀电场。另外,相邻聚焦电极上通过10 nF电容耦合180度相位的射频电压V。电离源内部电极排布结构见图1（左图）。在一定的气压条件下,射频电场增强了化学电离中离子与中性分子的碰撞,同时离子的径向运动还延长了分子离子反应时间,有效改善了微型质谱仪器灵敏度。实验结果表明,与传统直流场相比,射频电场的引入,对苯、甲苯、硫化氢等化合物的灵敏度分别提高了2～3个数量级见图1（右图）。50 s分析时间HS的检出限达到0.057 mg/m。射频场O试剂离子的引入实现了电荷转移化学电离,将VUV灯SPI的检测范围从10.6 eV电离能的化合物拓展到12 eV。VUV灯体积小、功耗低,在现场检测仪器中具有先天优势,基于VUV灯微型质谱采用射频场增强化学电离技术后,灵敏高显著提升、检测范围进一步拓展,该仪器有望在现场挥发性有机污染物在线检测中获得广泛的应用。

关键词：真空紫外灯化学电离在线分析微型质谱

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二维液相色谱-质谱三维信息用于代谢组深度覆盖的研究

二维液相色谱-质谱三维信息用于代谢组深度覆盖的研究

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第三届全国质谱分析学术报告会

作者：许国旺王霜原吕王洁于迪周丽娜曾仲大石先哲路鑫中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室

代谢组学主要关注生物体内小分子代谢物对病理生理刺激或基因修饰的反应,包括代谢物质和量的动态变化。通常以质谱、核磁共振为主要分析平台,检测体液、组织、细胞等样品中的"所有"的代谢物,并在所获取的复杂代谢组数据中挖... 详细信息

代谢组学主要关注生物体内小分子代谢物对病理生理刺激或基因修饰的反应,包括代谢物质和量的动态变化。通常以质谱、核磁共振为主要分析平台,检测体液、组织、细胞等样品中的"所有"的代谢物,并在所获取的复杂代谢组数据中挖掘与病理生理相关的重要代谢物信息,以解决疾病诊疗、药物开发等过程中所面临的问题。代谢物的组成十分复杂、性质差异巨大,分析所有的代谢物还只是一个"梦想"。到目前为止,用的最多的技术是液相色谱-质谱。不足之处是,反相色谱只适合于疏水性代谢物的分离,HILIC适合于亲水性代谢物,要实现尽可能多的代谢物覆盖不仅需要两次分析,而且受到峰容量的限制。二维液相色谱利用了在每一维上不同的分离机理,不仅可实现一次进样对亲水性和疏水性化合物的互补分离,而且可增加峰容量,通过切换通路的设计可实现多种形式的二维色谱。不仅如此,高分辨质谱可提供非常丰富的有结构规律的碎片信息,可实现第三维的分离分析。本报告将基于本实验室近年来的研究工作,着重阐明如何根据代谢组分析的不同需求,构建中心切割、全二维、平行柱、停止流等多种形式的多维液相色谱系统,在此基础上,辅以结构导向的信息依赖的高分辨质谱数据采集方法,通过"计算代谢组学"实现利用三维信息对代谢组和脂质组的深度覆盖和高质量分析。

关键词：代谢组学多维色谱高分辨质谱,深度覆盖

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基于蛋白质组学技术的复杂体系酶促动力学研究

基于蛋白质组学技术的复杂体系酶促动力学研究

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第三届全国质谱分析学术报告会

作者：邓真真叶明亮中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室

复杂体系酶促反应经常出现在各种生化分析过程中,比如酶底物的筛选、酶促标记以及蛋白质的酶解等。复杂体系中的酶底物不仅种类丰富,丰度的分布也在几个数量级以上,因此充分了解酶底物自身丰度与酶促反应速率之间的相互关系,有助于我们... 详细信息

复杂体系酶促反应经常出现在各种生化分析过程中,比如酶底物的筛选、酶促标记以及蛋白质的酶解等。复杂体系中的酶底物不仅种类丰富,丰度的分布也在几个数量级以上,因此充分了解酶底物自身丰度与酶促反应速率之间的相互关系,有助于我们更好地理解复杂体系中酶促反应的进行,从而进一步从结果中提取更有意义的酶促信息,比如酶与特定底物之间的特异性常数等。我们之前的工作己经从实验结果角度己经发现复杂体系中的酶解反应速率几乎与底物的丰度无关,但是并没有足够的理论支持。这次我们在原有的工作基础上[1-3],以经典米氏动力学方程为基础,构建复杂体系中酶促反应动力学模型,从理论以及实验角度来全面地对体系中底物的丰度与其相应酶促速率之间的关系进行研究。从得到的方程p=1-（1-p）~((k)/（κ）/(k)/（k）)（1）中可以看到,复杂体系中任意底物的消耗百分比不仅与自身动力学性质以及浓度相关,同样受到存在竞争关系的其他底物的影响。进一步对方程进行处理,我们得到方程ln（1-p）=((ln（1-p）)/((k)/（K）)((k)/（K）(2),将该方程应用到多底物体系可以得到:ln（1-p）:ln（1-p）:…:ln（1-p）:…:ln（1-p_n）=(k)/（K）:(k)/（K）:…:(k)/（k）:...:(k~n)/（K~n）(3),也就是说在一个确定的复杂体系当中,当酶促反应进行一定时间后,体系中各个底物剩余百分比的自然对数值与底物的催化效率常数之间存在线性关系,并且与底物的丰度无关。再进一步,当复杂体系中底物种类不变,但是底物之间相对丰度发生变化时,同样会存在:(ln（1-p）:ln（1-p）:…:ln（1-p）:…:ln（1-p_n）=(k)/（K）:(k)/（K）:...:(k)/（K）:...:(k~n)/（K~n）=(ln（1-p）:ln（1-p）:...:ln（1-p）:...:ln（1-p_n）}（4）。完善理论模型之后,我们分别利用多条标准肽段构成的模拟复杂体系对方程（2）以及细胞裂解液构成的实际复杂体系对方程（4）的准确性进行考察（见图1及图2）,并且得到相应线性关系,验证我们的理论模型的正确性。因此,从我们的理论推导和实验结果中都可以发现,对于一个存在多种底物且底物丰度分布多样的复杂酶促体系,任意底物的消耗速率会受到自身以及其他共存底物性质与浓度的影响,但是底物之间的消耗速率之比与其催化效率之间存在线性关系,与丰度无关,该发现有利于进行复杂体系酶促体系的深入研究。

关键词：生物质谱酶促反应底物筛选催化效率常数反应速率

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如何从少量临床样本中获取大量的代谢组信息?

如何从少量临床样本中获取大量的代谢组信息?

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第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：许国旺石先哲王霜原罗萍秦倩陈世礼中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室

代谢组学试图分析生物体内的所有代谢物。这些代谢物的组成十分复杂、性质差异巨大,若想获得尽可能全面的代谢物和脂质的信息,需要用多个方法以及与之相应的多次预处理,费时费力且耗费较多的样品量。然而,一些临床样品,如活检穿刺的组... 详细信息

代谢组学试图分析生物体内的所有代谢物。这些代谢物的组成十分复杂、性质差异巨大,若想获得尽可能全面的代谢物和脂质的信息,需要用多个方法以及与之相应的多次预处理,费时费力且耗费较多的样品量。然而,一些临床样品,如活检穿刺的组织、干细胞等,数量非常有限,迫切需要发展高灵敏、高覆盖度的代谢组学分析方法,一次预处理和分析获取最大量的代谢组信息。为此,我们从样品预处理和分离两个方面提出了系统解决方案,并成功用于代谢组学研究。在少量/微量样品的高效预处理方法方面,发展了一种基于甲基叔丁基醚/甲醇/水双相体系同时提

关键词：代谢组学少量样本固相衍生同位素标记多维色谱

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利用质谱PRM技术实现对血清中D-二聚体高灵敏度定量

利用质谱PRM技术实现对血清中D-二聚体高灵敏度定量

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第三届全国质谱分析学术报告会

作者：张娜秦洪强叶明亮中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室

随着质谱技术的发展,基于质谱的蛋白质组学在疾病的标记物的发现和定量中应用越来越广泛,尤其是将基于选择反应监测模式(selected reaction monitoring, SRM)的靶向蛋白质组学技术应用于临床诊断中各种疾病标记物的定量已经逐渐成为一... 详细信息

随着质谱技术的发展,基于质谱的蛋白质组学在疾病的标记物的发现和定量中应用越来越广泛,尤其是将基于选择反应监测模式(selected reaction monitoring, SRM)的靶向蛋白质组学技术应用于临床诊断中各种疾病标记物的定量已经逐渐成为一些诊断检测中的标准方法。近几年,随着高分辨率/高质量精度质谱技术的发展,利用四级杆-轨道阱质谱的高分辨率和捕获能力的平行反应监测模式(parallel reaction monitoring, PRM)应运而生,它相对于传统的基于三重四级杆的SRM模式灵敏度更高、方法建立更简单[1]。D-二聚体是凝血过程中纤维蛋白原交联水解的特异性产物,因而是血栓栓塞(包括深静脉血栓栓塞和肺栓塞)疾病诊断的重要标记物[2]。传统的基于抗体的D-二聚体检测方法特异性低,无法区分其他纤维蛋白原降解产物[3]。本研究中,我们将血清蛋白直接酶解,并利用色谱方法对该交联肽段进行富集,最后使用PRM模式进行检测,以实现对血清中D-二聚体高灵敏度和高特异性的定量。该方法将是首次完全不依赖于抗体的对D-二聚体高灵敏度定量的方法,为在血栓栓塞疾病中D-二聚体检测的标准化提供新的思路。

关键词：靶向蛋白质组学选择反应检测模式平行反应检测模式 D-二聚体

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