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VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc假病毒筛选抗HIV-1药物的条件优化及应用

中国药理学通报 2016年第3期32卷 433-438页

作者：王萍陈欢罗荣华卿晨张高红郑永唐昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室云南昆明650500 中国科学院昆明动物研究所中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室云南昆明650223 中国科学院大学北京100039

目的建立并优化VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc假病毒筛选抗HIV药物药效模型。方法参照Promega公司的荧光素酶活性分析系统,比较VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc对4种不同细胞的感染力。通过采用3种不同实验条件对不同类型HIV-1上市药物进行活性评价,进... 详细信息

目的建立并优化VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc假病毒筛选抗HIV药物药效模型。方法参照Promega公司的荧光素酶活性分析系统,比较VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc对4种不同细胞的感染力。通过采用3种不同实验条件对不同类型HIV-1上市药物进行活性评价,进一步验证了该模型的可行性与有效性。最后,应用该系统对特定靶点化合物进行筛选,并与HIV-1_(ⅢB)病毒筛选体系所得结果进行比较。结果 VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc对CRFK细胞的感染力最强,报告基因的表达水平与加入的病毒量呈剂量依赖关系。比较3种实验条件下不同阳性药物抑制VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc的半数有效剂量浓度EC50,发现第3种条件最优。而用该假病毒对合成化合物进行筛选,发现其EC50与病毒HIV-1_(ⅢB)所得EC_(50)基本一致。结论成功建立并优化了基于VSVG/HIV-1_(NL4-3)Luc假病毒的抗HIV药物筛选系统。

关键词： VSVG/HIV-1NL4-3Luc HIV 药物筛选阳性药物优化应用

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HIV-1整合酶抑制剂体外筛选方法研究进展

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中国药理学通报 2013年第1期29卷 14-17页

作者：张旋杨柳萌郑永唐中国科学院昆明动物研究所中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室云南昆明650223 昆明医学院药学院暨云南省天然药物药理重点实验室云南昆明650031 中国科学院大学北京100039

整合酶是HIV基因表达和复制所必需的酶,而且宿主细胞内不存在该酶的类似物。因此,HIV-1整合酶已成为设计、筛选抗HIV药物的理想靶点。迄今为止,Raltegravir仍是唯一上市的HIV整合酶抑制剂,而且临床上也已经出现耐药问题。研发新一代整... 详细信息

整合酶是HIV基因表达和复制所必需的酶,而且宿主细胞内不存在该酶的类似物。因此,HIV-1整合酶已成为设计、筛选抗HIV药物的理想靶点。迄今为止,Raltegravir仍是唯一上市的HIV整合酶抑制剂,而且临床上也已经出现耐药问题。研发新一代整合酶抑制剂非常必要。高通量、高灵敏度、简单易行的筛选方法是研究开发新一代HIV-1整合酶抑制剂的关键。目前,HIV-1整合酶抑制剂筛选方法有多种,各有优缺点,该文将对文献报道的整合酶抑制剂体外筛选方法的最新进展做一介绍。

关键词： HIV 整合酶抑制剂酶联免疫吸附时间分辨荧光法 AlphaScreen 荧光共振能量转移表面等离子共振实时荧光定量PCR 虚拟筛选

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中缅树鼩自然感染六种病毒的血清流行病学

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Zoological Research 2011年第1期32卷 11-16页

作者：韩建保张高红段勇马建平张喜鹤罗荣华吕龙宝郑永唐中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 昆明医学院第一附属医院检验科云南昆明650032 中国科学院研究生院北京100049 中国科学院昆明灵长类研究中心中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223

中缅树鼩作为一种新型实验动物,在医学生物学上,尤其是病毒学方面的应用受到越来越多的重视。实验动物自身病毒感染会影响动物健康和干扰实验结果,甚至危害实验人员生命安全。所以,实验动物病毒检测一直是动物质量控制的重要部分。中缅... 详细信息

中缅树鼩作为一种新型实验动物,在医学生物学上,尤其是病毒学方面的应用受到越来越多的重视。实验动物自身病毒感染会影响动物健康和干扰实验结果,甚至危害实验人员生命安全。所以,实验动物病毒检测一直是动物质量控制的重要部分。中缅树鼩研究迄今缺乏清晰的病毒自然感染资料。为调查中缅树鼩的病毒感染状况,采集野生俘获和人工繁殖的中缅树鼩血清样本272份,全部血清样本通过ELISA方法对乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原,丙型肝炎病毒(HCV)总抗体,以及戊型肝炎病毒(HEV)、腺病毒(ADV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)的IgG抗体进行了检测。结果表明,ELISA初筛HBV表面抗原有3份阳性样本,但通过乙型肝炎两对半定量检测进一步确认为阴性;抗HCV抗体和抗HEV、ADV、HSV-1IgG抗体检测均为阴性;抗HSV-2IgG检测有1份阳性样本。提示仅抗原或抗体血清学指标检测树鼩肝炎结果并不能反应个体携带病毒的状态,应该再进行病毒学指标确认。同时建议中缅树鼩繁殖群应进行HSV-2的筛选,以便杜绝和控制该病毒的感染。

关键词：中缅树鼩树鼩自然感染病毒血清流行病学

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三叶因子:从实验室研究到临床医学

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Zoological Research 2010年第1期31卷 17-26页

作者：杜廷义张勇张云中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 云南省第一人民医院检验科云南昆明650032 中国科学院研究生院北京100049

三叶因子(trefoil factor,TFF)家族是具有一个或多个三叶因子结构域的蛋白质多肽,在进化上具有高度的保守性,具有耐热、耐酶消化的理化特性。哺乳动物的TFF有三个成员(TFF1、TFF2和TFF3)。黏膜组织,如胃肠道和呼吸道黏膜等是TFF的主要... 详细信息

三叶因子(trefoil factor,TFF)家族是具有一个或多个三叶因子结构域的蛋白质多肽,在进化上具有高度的保守性,具有耐热、耐酶消化的理化特性。哺乳动物的TFF有三个成员(TFF1、TFF2和TFF3)。黏膜组织,如胃肠道和呼吸道黏膜等是TFF的主要合成场所。生理条件下,TFF的分布具有组织专一性,具有黏膜保护和创伤修复作用。TFF在肿瘤组织中广泛表达,在肿瘤的发生、发展、侵袭、转移过程中发挥着重要作用,可能是癌基因在对不同刺激做出反应时的共有递质。TFF生物学功能存在一个复杂的调控过程,单链TFF可通过膜受体而激活相关信号通路,TFF也可以通过与其它蛋白质的结合而协同发挥作用。TFF在临床医学领域主要运用在黏膜保护、黏膜损伤相关疾病的预防和治疗及肿瘤病理的诊断与干预等方面。TFF的作用机制和功能行使相关信号通路仍然是目前研究的重点,TFF与βγ-晶状体蛋白天然复合物的发现有助于对TFF的进一步认识和深入研究。

关键词：三叶因子生理功能病理功能黏膜保护创伤修复肿瘤

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野生和人工繁育树鼩部分生理指标检测与比较

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Zoological Research 2011年第1期32卷 4-10页

作者：马旭通李福林蒋宏君李文辉张云杜廷义中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 云南省第一人民医院检验科云南昆明650032

比较野生和人工繁育树鼩的部分生理指标,为人类疾病的动物模型创制提供基本参数。血液采自昆明地区54只野生树鼩(被捕获后人工饲养1—2月)和54只子一代人工繁育树鼩。该研究首次报道在两组动物中,肌酸激酶、肌钙蛋白I、总胆汁酸、果糖... 详细信息

比较野生和人工繁育树鼩的部分生理指标,为人类疾病的动物模型创制提供基本参数。血液采自昆明地区54只野生树鼩(被捕获后人工饲养1—2月)和54只子一代人工繁育树鼩。该研究首次报道在两组动物中,肌酸激酶、肌钙蛋白I、总胆汁酸、果糖胺、低密度脂蛋白胆固醇等在性别间差异无显著性;这些指标在人工繁育树鼩中的中位数(四分位数间距)依次为:1449(956)U/L、5.94(7.23)μg/L、15.6(19.7)μmol/L、393.5(80.8)μmol/L和0.36(0.32)mmol/L;在野生树鼩中依次为:986(564)U/L、4.01(4.10)μg/L、20.0(20.6)μmol/L、379.0(104.0)μmol/L和0.46(0.23)mmol/L。人工繁育树鼩生理指标表现出个体间离散程度降低趋势,但个别反映肝脏功能及心肌情况的指标表现出平均值上升,个体离散程度扩大的现象。这些生理指标为人类疾病的树鼩模型创制打下了基础。

关键词：野生树鼩人工繁育树鼩血液样本生理指标比较

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恒河猴TRIM5α的组织分布及不同刺激促进PBMC中TRIM5α转录水平的上调

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Zoological Research 2009年第4期30卷 354-360页

作者：汤霞戴正喜夏厚军刘丰亮况轶群张高红郑永唐中国科学院昆明动物研究所中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049

TRIM5α(tripartite motif protein 5-alpha)蛋白是恒河猴体内一种非常重要的限制因子,能抑制人免疫缺陷病毒(HIV-1, human immunodeficiency virus type 1)、马感染性贫血病毒(EIAV, equine infectious anemia virus)和猫免疫缺陷病毒 (FIV, feline immunodeficiencyvirus)等逆转录病毒的复制。恒河猴 TRIM5α的组织分布以及在受到外界刺激时 TRIM5α mRNA 表达量的变化研究还未见报道。本研究从中国恒河猴的各组织中提取总 RNA,以β-actin基因作为内参照,通过半定量 RT-PCR 检测各组织中 TRIM5α mRNA 的表达。选择 HIV-GFP-VSVG 假病毒感染外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),非特异性刺激剂——佛波脂(Phorbol myfismte acetate,PMA)+离子霉素(ionomycin,Ion)及 CD28 抗体+CD49d 抗体分别共刺激恒河猴 PBMC,研究不同刺激对恒河猴TRIM5α mRNA 表达水平的影响。结果表明:TRIM5α mRNA 表达于所研究的恒河猴 21 种组织中,免疫系统和泌尿生殖系统组织中表达量最高,而神经系统组织,如大脑、脊髓中表达较少,其他组织中未见明显的表达差异;HIV-GFP-VSVG 感染和用 PMA+Ion、CD28 抗体+CD49d 抗体分别共刺激 PBMC 能促进 PBMC 中 TRIM5α mRNA的转录水平的上调。

关键词： TRIM5α 恒河猴组织分布 PBMC 共刺激表达水平

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氯喹联合用药体外抗HIV-1作用研究

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药学学报 2018年第2期53卷 227-235页

作者：向思颖陈敏陈欢罗荣华杨柳萌卿晨郑永唐昆明医科大学药学院云南省天然药物药理重点实验室云南昆明650500 中国科学院昆明动物研究所云南省活性多肽研究与利用重点实验室/中国科学院动物模型与人类疾病机理重点实验室云南昆明650223 中国科学院大学北京100039

本文评价氯喹与已上市抗HIV药物联合使用的体外抗HIV-1作用和抑制TLR7激动剂引起的浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells,p DC)活化及Ⅰ型干扰素分泌上调的作用。采用MTT法检测氯喹对C8166、TZM-bl、PBMC细胞的毒性。采用... 详细信息

本文评价氯喹与已上市抗HIV药物联合使用的体外抗HIV-1作用和抑制TLR7激动剂引起的浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells,p DC)活化及Ⅰ型干扰素分泌上调的作用。采用MTT法检测氯喹对C8166、TZM-bl、PBMC细胞的毒性。采用荧光素酶活性检测方法、ELISA检测p24抗原测定氯喹分别与雷特格韦(rategrivir,RAL)、恩夫韦肽(enfuvirtide,T-20)、茚地那韦(indinavir,IDV)和依法韦仑(efavirenz,EFV)联合用药抗HIV-1_(ⅢB)、HIV-1_(KM018)活性。流式细胞术检测氯喹分别与RAL、IDV联合使用对细胞p DC活化水平的影响。定量PCR检测氯喹分别与RAL、IDV联合使用对细胞内IFN-α、IFN-βm RNA水平上调的影响。结果表明,氯喹对C8166、TZM-bl和PBMC细胞表现出较低的细胞毒性,半数细胞毒浓度(median cytotoxic concentration,CC_(50))分别为85.02±0.28、73.67±5.10和91.84±4.10μmol·L^(-1)。氯喹分别与RAL、T-20、IDV、EFV联合用药呈中度协同、强协同、相加、中度拮抗效果。氯喹分别与RAL、IDV的联合使用相比于氯喹单药使用对p DC活化水平和IFN-α、IFN-βm RNA表达水平的下调作用无统计学差异。本研究发现氯喹与不同类型的已上市抗HIV药物联合使用呈现不同程度的协同、拮抗或相加抗HIV-1作用。氯喹分别与RAL、IDV联合使用不影响氯喹对TLR7激动剂引起的p DC活化和Ⅰ型干扰素分泌上调的抑制作用。本研究希望能够给氯喹应用于抗HIV治疗提供参考,促进氯喹更广泛地应用于临床研究和治疗中。

关键词：氯喹人类免疫缺陷病毒-1 联合用药浆细胞样树突状细胞活化

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5-羟甲基胞嘧啶在脑发育和神经系统疾病中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第6期31卷 549-555页

作者：蒋德伟中国科学院昆明动物研究所中国科学院&云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室昆明650223 中国科学院大学昆明生命科学学院昆明650223

大脑的发育和神经系统疾病的发生发展是极其复杂的过程,涉及多种因素.大量研究证实,表观遗传调控系统,如组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和DNA甲基化,是其中一类重要的调控因素.近年来研究发现,DNA去甲基化中间产物5-羟甲基胞嘧啶(5hm C)是... 详细信息

大脑的发育和神经系统疾病的发生发展是极其复杂的过程,涉及多种因素.大量研究证实,表观遗传调控系统,如组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和DNA甲基化,是其中一类重要的调控因素.近年来研究发现,DNA去甲基化中间产物5-羟甲基胞嘧啶(5hm C)是一种新的表观遗传标记形式,且在神经元内呈现非常高的水平.这暗示5hm C可能在脑的生长发育以及中枢神经系统疾病的发生发展过程中有着重要的调控作用.本文综述了近年来该领域的重要研究进展,并且提出一些今后的研究展望.

关键词： 5-羟甲基胞嘧啶(5hmC) 脑发育神经系统疾病表观遗传调控

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大动物生物安全三级实验室的生物安全隐患与对策

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环境与健康杂志 2010年第10期27卷 918-919页

作者：韩建保张高红郑永唐中国科学院昆明动物研究所中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室云南昆明650223

生物安全即避免危险生物因子所造成的实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施川。随着近些年科学技术的迅速发展及新发传染病（如SARS、禽流感、甲型H1N1流感等）的不断暴发和流行，各国对生物安全实验室安全重要性的认识... 详细信息

生物安全即避免危险生物因子所造成的实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施川。随着近些年科学技术的迅速发展及新发传染病（如SARS、禽流感、甲型H1N1流感等）的不断暴发和流行，各国对生物安全实验室安全重要性的认识不断提高。虽然目前已经出台针对实验动物生物安全管理、实验操作规范等系统性、专业性指导文件，

关键词：动物生物安全三级实验室生物安全隐患对策

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中药有效部位复方奇士乐体外抗HIV-1活性研究

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中国药理学通报 2011年第4期27卷 566-571页

作者：杨柳萌王睿睿张高红张兴杰陈纪军郑永唐中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源可持续利用国家重点实验室云南昆明650204 中国科学院研究生院北京100049

目的评价有效部位复方奇士乐(QSL)的体外抗HIV-1药效学。方法通过合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护、HIV-1 p24抗原测定等方法检测急性感染中QSL对HIV-1实验株、临床分离株、耐药株的抑制作用和对慢性感染细胞中病毒复制的影响;通过ELISA... 详细信息

目的评价有效部位复方奇士乐(QSL)的体外抗HIV-1药效学。方法通过合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护、HIV-1 p24抗原测定等方法检测急性感染中QSL对HIV-1实验株、临床分离株、耐药株的抑制作用和对慢性感染细胞中病毒复制的影响;通过ELISA方法和荧光法分别检测了QSL体外抑制HIV-1逆转录酶和蛋白酶活性作用。结果有效部位复方制剂QSL能有效地抑制HIV-1ⅢB诱导淋巴细胞病变、保护HIV-1ⅢB感染MT-4细胞死亡、阻断HIV-1ⅢB慢性感染H9细胞与C8166细胞间融合的作用。QSL对HIV-1实验株HIV-1ⅢB、临床分离株HIV-1KM018、耐药株HIV-174V的病毒复制也有较好的抑制作用。QSL抑制HIV活性的作用机制可能为多靶点,主要是抑制HIV逆转录酶、蛋白酶和病毒进入细胞。结论 QSL是具有较好体外抗HIV-1活性的中药有效部位复方。

关键词：中药有效部分复方奇士乐艾滋病 HIV-1 抗HIV-1

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