检索结果-内蒙古大学图书馆

非晶状体βγ-晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物的细胞核转运及其选择性杀伤肿瘤细胞机制的研究

Zoological Research 2008年第4期29卷 386-398页

作者：何英英刘树柏钱金桥李文辉张云中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院研究生院北京100049 昆明医学院第一附属医院麻醉科云南昆明650032

非晶状体βγ晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物(βγ-CAT)是从大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离的分子量为72kDa的天然蛋白复合物。本研究通过激光共聚焦显微镜和Western blot分析βγ-CAT在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的细胞核... 详细信息

非晶状体βγ晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物(βγ-CAT)是从大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离的分子量为72kDa的天然蛋白复合物。本研究通过激光共聚焦显微镜和Western blot分析βγ-CAT在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的细胞核转运机制,以及βγ-CAT对多株肿瘤细胞(HCT116,HT29,A375,Hela,THP-1等)的细胞毒效应。结果表明:βγ-CAT的α亚基中含有典型的GTP/ATPase的保守结构模体Walker A和Walker B,体外检测到βγ-CAT具有GTP/ATP水解酶和GTP/ATP结合活性。在细胞核转运过程中,βγ-CAT的α亚基和β亚基参与形成约150kDa含有泛素化修饰信号的大分子复合物,且泛素化修饰信号和βγ-CAT的α亚基和β亚基共定位于细胞内和融合于细胞核区域的转运囊泡小体中。βγ-CAT能够选择性的杀伤肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞脱落和发生凋亡。上述结果为进一步深入研究βγ-CAT的细胞核转运和调节细胞功能的分子作用机制提供思路和线索。

关键词：非晶状体βγ-晶状体蛋白三叶因子非晶状体βγ-晶状体蛋白和三叶因子蛋白复合物 GTP/ATP水解酶肿瘤细胞脱落与凋亡泛素化修饰细胞核定位

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人精浆小分子抗菌肽的分离鉴定

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四川大学学报（医学版） 2008年第5期39卷 842-846页

作者：赵晖申吉泓李文辉张云李虹四川大学华西医院泌尿外科成都610041 昆明医学院第一附属医院泌尿外科中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室

目的从人精浆中分离小分子抗菌肽,探讨精浆的抗菌机制。方法收集正常人精液,室温液化后10000r/min离心10min去除精子得到精浆。采用琼脂糖弥散法检测抗菌活性,采用对大肠杆菌(ATCC25922)的抗菌活性作为检测指标,通过阳离子交换柱SP-Seph... 详细信息

目的从人精浆中分离小分子抗菌肽,探讨精浆的抗菌机制。方法收集正常人精液,室温液化后10000r/min离心10min去除精子得到精浆。采用琼脂糖弥散法检测抗菌活性,采用对大肠杆菌(ATCC25922)的抗菌活性作为检测指标,通过阳离子交换柱SP-Sepharose分离,将有抗菌活性的洗脱产物冻干后用去离子水溶解,经过AKTA Superdex 75柱分离,收集小分子部分,应用反相高效液相色谱技术分离纯化多肽(RP-HPLC分离),检测各峰抗菌活性,基质辅助激光解吸质谱法检测相对分子质量,并鉴定其抗菌活性。结果从人精浆中初步分离出多个相对分子质量小于10×103的肽混合物,其中部分与精液凝固蛋白Ⅰ片段相对分子质量大小一致,命名为HSLAMs(Human semen low-molecular-mass antibacterial mixtures),具有抗大肠杆菌的活性。结论HSLAMs可能是人精浆天然免疫机制中重要的效应分子,精液凝固蛋白Ⅰ可能是其来源之一。

关键词：精液抗菌肽分离纯化精液凝固蛋白Ⅰ

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蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性及机制的初步研究

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中草药 2008年第12期39卷 1833-1838页

作者：李春艳曾艳波彭芳戴好富郑永唐中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室云南昆明650223 大理学院药学院云南大理671000 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101

目的研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV-1活性,对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒性、合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护实验和HIV-1 p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性进行筛选和确认;采用重组HIV-1逆转录酶和蛋... 详细信息

目的研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV-1活性,对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒性、合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护实验和HIV-1 p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性进行筛选和确认;采用重组HIV-1逆转录酶和蛋白酶活性抑制实验,融合阻断实验初步探讨活性粗提物的作用机制。结果蒲葵籽的醋酸乙酯(P3)提取物具有较强的体外抗HIV-1活性,P3抑制HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为5.64μg/mL,对C8166细胞的毒性较小,CC50大于200μg/mL,治疗指数(TI)大于35.46;P3抑制HIV-1急性感染中p24抗原表达的EC50为23.04μg/mL,抑制正常C8166细胞与慢性感染细胞H9/HIV-1 B融合的EC50为8.00μg/mL;P3在质量浓度为200μg/mL时,对HIV-1逆转录酶的抑制率为28.86%;P3抑制重组HIV-1蛋白酶活性的EC50为1.77μg/mL。结论蒲葵籽的醋酸乙酯提取物(P3)具有较强的体外抗HIV-1活性,其作用机制可能主要为阻断病毒进入和抑制HIV-1蛋白酶活性。

关键词：蒲葵籽提取物抗HIV-1活性 HIV-1蛋白酶

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非晶状体βγ-晶状体蛋白的研究进展

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Zoological Research 2008年第6期29卷 679-688页

作者：刘树柏何英英钱金桥李文辉张云中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室生物毒素研究室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 昆明医学院第一附属医院麻醉科云南昆明650032

βγ-晶状体蛋白是主要分布于脊椎动物眼睛晶状体内的水溶性结构蛋白。非晶状体βγ-晶状体蛋白从微生物到高等哺乳动物都有过报道。微生物中发现的非晶状体βγ-晶状体蛋白主要作为环境胁迫应急蛋白,在恶劣环境中发挥对细菌的自我保护... 详细信息

βγ-晶状体蛋白是主要分布于脊椎动物眼睛晶状体内的水溶性结构蛋白。非晶状体βγ-晶状体蛋白从微生物到高等哺乳动物都有过报道。微生物中发现的非晶状体βγ-晶状体蛋白主要作为环境胁迫应急蛋白,在恶劣环境中发挥对细菌的自我保护作用,如ProteinS。在哺乳动物中,非晶状体βγ-晶状体蛋白被推测能够参与胚胎的皮肤发育与分化调节,具有肿瘤抑制等重要的生理功能,如黑色素瘤缺失蛋白。但是,对于它们的生化特性、生理功能和作用机制知之甚少。本文从蛋白结构、基因起源和生物学功能等方面简要介绍目前非晶状体βγ-晶状体蛋白的相关研究进展。

关键词：非晶状体βγ-晶状体蛋白非晶状体脚晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物黑色素瘤缺失蛋白

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电镜分析非晶状体βγ晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物在人红细胞膜上的孔道形成效应

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Zoological Research 2008年第5期29卷 503-510页

作者：刘树柏何英英钱金桥张云中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室生物毒素研究室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 昆明医学院第一附属医院麻醉科云南昆明650032

非晶状体βγ晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物(non-lens βγ-crystallin and trefoil factor complex,βγ-CAT)是一个从大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离的天然分子量为72kDa的全新的蛋白复合物。本研究测定了βγ-CAT处理... 详细信息

非晶状体βγ晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物(non-lens βγ-crystallin and trefoil factor complex,βγ-CAT)是一个从大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离的天然分子量为72kDa的全新的蛋白复合物。本研究测定了βγ-CAT处理红细胞后引起细胞内钾离子外流与溶血效应的时效曲线,结合扫描电子显微镜和透射电子显微镜分析βγ-CAT处理红细胞引起的早期形态学变化。结果表明:βγ-CAT(3nmol/L)37℃处理红细胞5min,(93.31±5.89)%的细胞内钾离子迅速外流(P<0.01),相应溶解率为(13.12±1.92)%(P<0.05)。电子显微镜观察发现红细胞形态发生明显变化,细胞体积增加,肿胀。少数红细胞表面向外形成棘状异常突起,部分肿胀细胞内的血红蛋白通过棘状突起缺口向细胞外喷射血红蛋白。表明βγ-CAT通过在红细胞膜上形成孔道使细胞内钾离子迅速外流导致红细胞内渗透压改变而溶血。其结果为理解βγ-CAT的溶血机制提供了直接的形态学证据。

关键词：三叶因子非晶状体βγ-晶状体蛋白非品状体βγ-晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物孔道形成蛋白扫描电子显微镜投射电子显微镜

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Sustained Contraction of Isolated Rabbit Thoracic Aortic Rings in Endothelial-dependent Manner Induced by βγ-CAT

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Zoological Research 2008年第5期29卷 493-502页

In vertebrates, non-lens βγ-crystallins are widely expressed in various tissues and their functions are not well known. The molecular mechanisms of trefoil factors （TFFs）, which involved in mucosal healing and tumorigenesis, have remained elusive. βγ-CAT is a novel multifunctional protein complex of non-lens βγ-crystallin and trefoil factor from frog skin secretions. Here we report that βγ-CAT could induce sustained contraction of isolated rabbit aortic rings in dosage （2-35nmol/L） and endothelium dependent manners （P〈0.01 ）. In addition, in situ immunofluorescence indicated that positive TNF-α signals were mainly detected at the endothelial cell layer of βγ-CAT （25nmol/L） treated rings. Furthermore, βγ-CAT induced primary cultured rabbit thoracic aortic endothelial cells （RAECs） rapidly to release TNF-α. After βγ-CAT （25nmol/L） treated for 10 and 30min, the levels of the endothelial cells released TNF-ct were 34.17±5.10 pg/mL and 98.01±4.67 pg/mL （P〈0.01）, respectively. In conclusion, βγ-CAT could induce sustained contraction of isolated aortic rings, and the contractile effect might be partially explained by the release of TNF-α. These findings will give new insight into understanding the functions and physiological roles of non-lens βγ-crystallins and trefoil factors.

关键词： Tumor necrosis factor-a Trefoil factor Non-lens βγ-crystallin Endothelium-dependent aorta vasoconstriction βγ-CAT

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八棱丝瓜蛋白1的体外抗HIV-1活性

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中国天然药物 2008年第5期6卷 372-376页

作者：龙晶侯晓敏张高红陈明晃郑永唐中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室中国科学院福建物质结构研究所结构化学国家重点实验室

目的:研究八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。方法:通过实验株HIV-1IIIB诱导合胞体形成抑制实验、HIV-1IIIB和临床分离株HIV-1KM018急性感染细胞以及HIV-1IIIB慢性感染细胞的p24抗原表达抑制实验检测八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-l活性。结果:八棱... 详细信息

目的:研究八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。方法:通过实验株HIV-1IIIB诱导合胞体形成抑制实验、HIV-1IIIB和临床分离株HIV-1KM018急性感染细胞以及HIV-1IIIB慢性感染细胞的p24抗原表达抑制实验检测八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-l活性。结果:八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1IIIB诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为0.025μmol·L1,治疗指数为76。八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1IIIB感染C8166和HIV-1KM018感染PBMC的p24抗原表达的EC50分别为0.033和0.207μmol·L1。八棱丝瓜蛋白1不抑制HIV-1IIIB在慢性感染H9细胞中的复制。结论:首次发现八棱丝瓜蛋白1是一种具有抗HIV-1活性的核糖体失活蛋白。

关键词：八棱丝瓜蛋白核糖体失活蛋白八棱丝瓜抗HIV药物 HIV-1

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人精液凝固蛋白SgI-52的表达与抗菌活性研究

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Zoological Research 2008年第2期29卷 139-144页

作者：赵晖刘孝东高振华张建华李虹张云李文辉申吉泓中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室云南昆明650223 昆明医学院第一附属医院云南昆明650032 四川大学华西医院泌尿外科四川成都610041

以人精囊腺cDNA为模板,用嵌套式PCR技术扩增出编码成熟人精液凝固蛋白I(semenogelin I,SgI)第85–136位氨基酸(SgI-52)的核苷酸序列并将其插入载体pMAL-p2X中,成功构建的表达载体pMAL-p2X/SgI-52转化大肠杆菌DH5α后,重组融合蛋白诱导... 详细信息

以人精囊腺cDNA为模板,用嵌套式PCR技术扩增出编码成熟人精液凝固蛋白I(semenogelin I,SgI)第85–136位氨基酸(SgI-52)的核苷酸序列并将其插入载体pMAL-p2X中,成功构建的表达载体pMAL-p2X/SgI-52转化大肠杆菌DH5α后,重组融合蛋白诱导表达于大肠杆菌周质中。经第X因子剪切及超滤处理,得到表达的重组SgI-52。质谱分析结果证明重组SgI-52为目的肽。重组人SgI-52对大肠杆菌ATCC25922标准株以及耐氨苄标准株ML-35P的最低抑制浓度MIC分别为32.45以及46.30?μg/mL。我们的结果及相关研究提示在人精液液化过程中人精液凝固蛋白I的不同降解产物可能行使不同的生物学功能,值得进行深入研究。

关键词：人精液凝固蛋白Ⅰ 表达抗菌

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猕猴MHC研究及在AIDS动物模型中的意义

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国际免疫学杂志 2008年第5期31卷 334-339页

作者：戴正喜张高红郑永唐中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室(硕士研究生) 昆明650223

主要组织相容性复合体（MHC）是与免疫应答和移植排斥直接相关的一组基因群。由于MHC高度的多态性，使其在脊椎动物的免疫遗传、进化、保护以及与疾病的相关性等方面的研究倍受关注。猕猴MHC尤其是MHCⅠ类基因的组成与人类有显著差异，... 详细信息

主要组织相容性复合体（MHC）是与免疫应答和移植排斥直接相关的一组基因群。由于MHC高度的多态性，使其在脊椎动物的免疫遗传、进化、保护以及与疾病的相关性等方面的研究倍受关注。猕猴MHC尤其是MHCⅠ类基因的组成与人类有显著差异，一个单体型中存在多个Mamu—A和Mamu—B基因。在猕猴AIDS模型中，MHC对病毒的免疫逃逸以及对AIDS疫苗的研究均有十分重要的作用，某些MHCⅠ类和MHCⅡ类基因能够显著延缓猕猴AIDS疾病的进展，为在人体中理解MHCⅠ类等位基因与免疫保护和控制病毒复制的相关性提供了一个良好的模型。

关键词：猕猴 MHC 多态性 AIDS 动物模型

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金环蛇蛇毒中的一种新型胰蛋白酶抑制剂(英文)

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中国天然药物 2008年第2期6卷 153-158页

作者：卢祥云王爱丽杨海龙赖仞常熟理工学院生物系常熟215500 南京农业大学生命科学学院农业部微生物环境工程重点实验室南京210095 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室动物毒素室昆明650223

目的:从金环蛇蛇毒中分离纯化名为bungaruskunin 1的一种新型胰蛋白酶抑制剂,并从其毒腺的cDNA文库中克隆出该胰蛋白酶抑制剂的cDNA全序列。方法:通过Sephadex G-50,CM-Sephadex C-25,HPLC,RP-HPLC(C4 col-umn)方法分离纯化bungaruskunin 1。样品的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性则是在室温条件下50mmol·L-1Tris-HCl,pH7.8的缓冲液中通过对显色底物的水解抑制作用来检测的。金环蛇毒腺RNA用TRIZOL提取,并用SMARTM PCR cDNA syn-thesis kit(Clontech)建成cDNA文库。根据其信号肽的保守区域合成引物从该文库中扩增出bungaruskunin 1的cDNA全序列,进行胶回收,酶连到pMD18-T载体中转化测序。结果:bungaruskunin1的前体由83个氨基酸组成,其中信号肽含有24个氨基酸,成熟肽即:bungaruskunin 1含有59个氨基酸。bungaruskunin 1的cDNA序列与从红腹伊澳蛇Pseudechis porphy-riacus中分离纯化得到的丝氨酸蛋白酶抑制剂blackelin的cDNA序列的相似性高达64%。bungaruskunin 1是一种含有保守Kunitz端的Kuntiz蛋白酶抑制剂家族的一员,从而能够抑制蛋白酶和弹性酶的活性。在cDNA文库中,我们同时还筛选到了2种新的β-bungarotoxin B链的序列。结论:这些发现很好地证明了蛇中Kunitz/BPTI胰蛋白酶抑制剂和毒性神经的家族可能起源于共同的祖先。

关键词：蛇毒丝氨酸蛋白酶抑制剂 Kunitz 金环蛇

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