检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科学技术大学学报 2009年第7期39卷 722-727页

作者：邵晓丽张旭东张远旭张华堂何有文中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室人类疾病灵长类模型研究海外团队和免疫生物学实验室云南昆明650223 中国科学技术大学生命科学学院安徽合肥230027 中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室人类疾病灵长类模型研究海外团队和免疫生物学实验室云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室人类疾病灵长类模型研究海外团队和免疫生物学实验室云南昆明650223 杜克大学医学中心免疫学系北卡罗来纳州达勒姆市NC27710

.3%～66.4%.RT-PCR检测发现,tsCD25 mRNA分布于树鼩的外周血、脾脏和肺,并受PMA 和 ionomycin 刺激的调节.我们的结果为下一步制备tsCD25单克隆抗体,抑制CD4+CD25+Tregs功能以及开展有关的研究工作奠定了基础.

关键词：树鼩 CD25 逆转录-聚合酶链式反应组织分布

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HIV-1核衣壳蛋白NCp7抑制剂体外筛选方法的建立

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中国药理学通报 2008年第1期24卷 136-139页

作者：王云华王睿睿杨柳萌李健峰徐维明郑永唐中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650231

目的表达HIV-1核衣壳蛋白(nucleocapside proteinp7,NCp7),并建立抑制剂筛选方法。方法从pBRU2/ADP202质粒经PCR得到HIV-1NCp7编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1NCp7表达载体。阳性克隆转染***21DE3,以IPTG诱导,细胞裂解液经Q SepharoseH.P和SP Sepharose H.P纯化后纯度达到90%以上。将具有锌离子逐出活性的H2O2和2,2′-联硫基二吡啶(2,2′-di-thiodipyridine,AT-2)与NCp7作用,用锌离子特异的荧光染料检测。用该方法检测KIZ-CM系列化合物。结果可以检测H2O2和AT-2的锌离子逐出活性,经该方法筛选,KIZ-CM10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性。结论在国内首次建立了HIV-1NCp7锌离子逐出方法,该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选。

关键词： HIV-1 NCp7 表达纯化抑制剂筛选

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碳离子辐照对神经胶质瘤干细胞杀伤的研究

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原子核物理评论 2017年第2期34卷 231-235页

作者：孙放张栩锐赵旭东周光明王菊芳中国科学院近代物理研究所空间辐射生物学实验室兰州730000 中国科学院大学北京100049 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室昆明650223

虽然重离子束治癌已经被证明有着射程精确、入口坪区剂量小、相对生物学效应高等显著优点,但重离子辐照对肿瘤干细胞所产生的辐射生物学效应特性依旧不明确。本研究使用人源神经胶质瘤干细胞来研究在面对肿瘤干细胞时,重离子相对于传统... 详细信息

虽然重离子束治癌已经被证明有着射程精确、入口坪区剂量小、相对生物学效应高等显著优点,但重离子辐照对肿瘤干细胞所产生的辐射生物学效应特性依旧不明确。本研究使用人源神经胶质瘤干细胞来研究在面对肿瘤干细胞时,重离子相对于传统X射线是否有明显的生物学优势。实验结果证明,在神经胶质瘤干细胞中,2 Gy碳离子造成的DNA损伤的修复率比X射线造成的损伤修复率要低;MTT实验则证明经过碳离子辐照的肿瘤干细胞活力要比X射线辐照的肿瘤干细胞低得多。综上所述,面对神经胶质瘤干细胞,碳离子能更有效地靶向肿瘤干细胞从而相对于传统X射线有明显的生物学优势。这些发现对于更好地理解重离子束治癌相关的生物学效应有重要的作用。

关键词：重离子辐照肿瘤干细胞神经胶质瘤

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树鼩肝细胞体外分离培养体系的复建及主要影响因素分析

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Zoological Research 2009年第1期30卷 24-30页

作者：张顶高丽张远旭孙丽冯悦何有文夏雪山张华堂中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室免疫生物学实验室和人类疾病灵长类动物模型研究团队云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 昆明理工大学生物与化学工程学院云南昆明650224

树鼩(Tupaia Belangeri)与人和灵长类亲缘关系较为接近,是乙型肝炎研究中备受关注的小动物模型,而其原代肝细胞的分离和培养则是建立HBV体外感染模型及应用和基础研究的关键的第一步,但由于以往的文献报道均较为简要,需要较长时间的摸... 详细信息

树鼩(Tupaia Belangeri)与人和灵长类亲缘关系较为接近,是乙型肝炎研究中备受关注的小动物模型,而其原代肝细胞的分离和培养则是建立HBV体外感染模型及应用和基础研究的关键的第一步,但由于以往的文献报道均较为简要,需要较长时间的摸索。本研究通过与机械分离法的直接比较,验证了两步灌注法在树鼩肝细胞分离中的优越性。进而发现,在分离后的体外培养过程中,二甲基亚砜不仅能够促进和维持原代肝细胞的分化,而且能够显著地抑制纤维状细胞群的出现。同时,肝细胞生长因子(HGF)和表皮生长因子(EGF)能够促进肝细胞在体外长期存活。在此优化的条件下,原代培养可持续4—5周,并且较多的细胞聚集形成类似肝窦结构的形态,从而为乙型肝炎病毒感染机理研究和药物筛选提供了必备的先决条件,也为丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒及单纯疱疹病毒等研究和药物筛选提供了可能。

关键词：树鼩肝细胞二甲基亚砜肝细胞生长因子表皮生长因子分化

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树鼩CD4全长编码序列的克隆及分子特征分析

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Zoological Research 2012年第1期33卷 60-66页

作者：田巍威高跃东郭彦黄京飞肖昌李作生张华堂西南大学生物技术学院重庆北碚400715 云南沃森生物技术股份有限公司云南昆明650106 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室免疫生物学实验室云南昆明650223 中国科学院昆明生物多样性大型仪器区域中心云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室云南昆明650223

树鼩作为多种人类疾病研究模型的可能性已受到广泛关注,但尚缺乏研究其免疫功能的基本标志以及单克隆抗体。该实验首先以树鼩外周血总RNA为材料,通过RT-PCR扩增得到长度为1365bp的树鼩CD4全长编码序列,并确定了数据库中缺失的两个片段,... 详细信息

树鼩作为多种人类疾病研究模型的可能性已受到广泛关注,但尚缺乏研究其免疫功能的基本标志以及单克隆抗体。该实验首先以树鼩外周血总RNA为材料,通过RT-PCR扩增得到长度为1365bp的树鼩CD4全长编码序列,并确定了数据库中缺失的两个片段,进而通过ClustalW等软件对其序列和分子特征进行分析,发现树鼩CD4氨基酸序列胞外和胞内域保守性较好,且与人类和猴的亲缘关系较近。虽然树鼩和人CD4分子表面大部分区域均带正电荷,但与人CD4胞外域D1相比,树鼩CD4D1结构区域表面带负电荷较多,且多出两个N-糖基化位点。这些差异对抗体的结合可能存在影响。该研究为今后树鼩CD4单克隆抗体制备及功能研究奠定了基础。

关键词：树鼩 CD4分子 RT-PCR 结构功能单克隆抗体

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树鼩PD-1基因的分离、鉴定及表达分析(英文)

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中国科学技术大学学报 2009年第7期39卷 714-721页

作者：张旭东邵晓丽张远旭张华堂何有文中国科学技术大学生命科学学院安徽合肥230027 中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室人类疾病灵长类模型研究海外团队和免疫生物学实验室云南昆明650223 杜克大学医学中心免疫学系北卡罗来纳州达勒姆市nc27710

PD-1(Programmed cell death 1)是一种抑制性的受体,是免疫球蛋白超家族的成员.大量研究证明PD-1能被诱导而在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NKT细胞和单核细胞上表达,从而在慢性感染的病因学中起着重要作用.树鼩(Tupaiabelangeri)做为... 详细信息

PD-1(Programmed cell death 1)是一种抑制性的受体,是免疫球蛋白超家族的成员.大量研究证明PD-1能被诱导而在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NKT细胞和单核细胞上表达,从而在慢性感染的病因学中起着重要作用.树鼩(Tupaiabelangeri)做为一个理想的模型可被应用于许多人类感染性疾病如乙型病毒性肝炎.为了充分利用树鼩对于感染性疾病的宿主免疫应答模型,我们分离出树鼩PD-1基因.利用迅速扩增cDNA末端PCR(RACE-PCR)技术,从树鼩脾组织中克隆了PD-1基因的全长cDNA序列.序列分析显示树鼩PD-1 cDNA的开放阅读框编码一个由242个氨基酸组成的跨膜蛋白,并且和人类、灵长类和啮齿类中的同源基因有高度相似性.组织分布分析表明在所检测的几种组织中PD-1基因只在脾中表达.此外,淋巴细胞刺激实验显示,利用PMA和ionomycin刺激新鲜分离的树鼩外周血单核细胞(PBMCs)能够诱导PD-1 mRNA水平上的表达.我们的结果为将来进一步探讨树鼩的免疫功能提供了良好的基础.

关键词：树鼩 PD-1 迅速扩增cDNA末端PCR 表达外周血单核细胞

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树鼩IL-2全长编码序列的克隆及分子特征分析

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Zoological Research 2013年第2期34卷 121-126页

作者：黄晓燕李明利徐娟高跃东王文广殷安国李晓飞孙晓梅夏雪山代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室:免疫生物学实验室云南昆明650223 中国科学院昆明生物多样性大型仪器区域中心云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室云南昆明650223 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500

树鼩作为多种人类疾病模型已受到广泛关注,而免疫因子对于树鼩模型评价至关重要,但目前对其白细胞介素-2(IL-2)的研究鲜有报道。该实验以经ConA(concanavalin)诱导培养的树鼩淋巴细胞总RNA为模板,RT-PCR克隆出465bp的树鼩IL-2全长编码序... 详细信息

树鼩作为多种人类疾病模型已受到广泛关注,而免疫因子对于树鼩模型评价至关重要,但目前对其白细胞介素-2(IL-2)的研究鲜有报道。该实验以经ConA(concanavalin)诱导培养的树鼩淋巴细胞总RNA为模板,RT-PCR克隆出465bp的树鼩IL-2全长编码序列,并采用ClustalW软件分析其序列和分子特征。结果表明树鼩IL-2cDNA编码一个由154个氨基酸组成的蛋白质,其cDNA及氨基酸序列与人的同源性分别为93%及80%,且其整体结构与人IL-2相似。MEGA5.0软件构建的进化树表明,树鼩与人及恒河猴的亲缘关系较近。Pymol软件对树鼩和人IL-2氨基酸序列进行的三维结构模建表明,两者的IL-2分子三维空间结构基本相似,表面大部分区域所带电荷相同,但在某些区域差异较大,且树鼩多出一个糖基化位点,这些差异对抗体的结合可能存在影响。该研究为今后树鼩IL-2单克隆抗体的制备及功能研究奠定了基础。

关键词：树鼩 IL-2 克隆结构功能

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树鼩CD3ε全长编码序列的克隆及分子特征分析

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Zoological Research 2010年第5期31卷 483-489页

作者：李乙江高跃东郭彦陆彩霞黄京飞夏雪山代解杰范泉水李作生张华堂云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 成都军区疾病预防控制中心云南昆明650032 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室免疫生物学实验室云南昆明650223 中国科学院昆明生物多样性大型仪器区域中心云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室云南昆明650223 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 昆明理工大学生命科学与技术学院

树鼩可作为人类疾病的良好模型,但缺乏对其免疫功能研究的基本标志和单克隆抗体。该研究应用RT-PCR技术,分别从3只树鼩的肝脏、脾脏和血液中克隆了CD3ε全长编码序列并用Discovery Studio等软件对其分子特征进行了分析。结果显示,树鼩CD... 详细信息

树鼩可作为人类疾病的良好模型,但缺乏对其免疫功能研究的基本标志和单克隆抗体。该研究应用RT-PCR技术,分别从3只树鼩的肝脏、脾脏和血液中克隆了CD3ε全长编码序列并用Discovery Studio等软件对其分子特征进行了分析。结果显示,树鼩CD3εcDNA的开放阅读框全长582bp,编码193个氨基酸。树鼩与其他哺乳动物的CD3ε蛋白整体结构近似,与人和恒河猴CD3ε的亲缘关系较近,胞内域与跨膜域高度保守,但胞外域出现2个潜在的糖基化位点,表面电荷亦存在差异。该研究为今后制备树鼩CD3单克隆抗体及功能研究奠定初步的基础。

关键词：树鼩 CD3ε cDNA 克隆结构功能单克隆抗体

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HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立

HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立

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中华中医药学会防治艾滋病分会2006年防治艾滋病学术研讨会

作者：王云华王睿睿杨柳萌李健峰徐维明郑永唐中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100039 中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室云南昆明650223 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650231

HIV-1蛋白酶在HIV-1生活周期中发挥重要的作用.目前临床使用的多种蛋白酶抑制剂具有较好的抗HIV活性,由于在临床上蛋白酶抑制剂的耐药突变越来越多,直接影响到这些药物的临床疗效,因此需要开发新的蛋白酶抑制剂。本文简要论述了经过检测... 详细信息

HIV-1蛋白酶在HIV-1生活周期中发挥重要的作用.目前临床使用的多种蛋白酶抑制剂具有较好的抗HIV活性,由于在临床上蛋白酶抑制剂的耐药突变越来越多,直接影响到这些药物的临床疗效,因此需要开发新的蛋白酶抑制剂。本文简要论述了经过检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性。检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选。

关键词：艾滋病蛋白酶纯化抑制剂

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重组HIV-1核衣壳蛋白的表达纯化及其体外抑制剂筛选方法的建立

重组HIV-1核衣壳蛋白的表达纯化及其体外抑制剂筛选方法的建立

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中华中医药学会防治艾滋病分会2006年防治艾滋病学术研讨会

在抗HIV治疗中,逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和进入抑制剂的使用提高了艾滋病患者的存活率。NCp7含有两个高度保守的CCHC型锌指结构(Cys-X2-Cys-X4-His- X4-Cys),锌指结构中氨基酸的突变或功能受抑制将导致HIV感染能力急剧下降.NCp7抑... 详细信息

在抗HIV治疗中,逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和进入抑制剂的使用提高了艾滋病患者的存活率。NCp7含有两个高度保守的CCHC型锌指结构(Cys-X2-Cys-X4-His- X4-Cys),锌指结构中氨基酸的突变或功能受抑制将导致HIV感染能力急剧下降.NCp7抑制剂可能是下一代有效而不容易产生耐药性的抗HIV药物,是一个很有前景的治疗靶点。本文研究了从pBRU2/ADP202质粒经PCR扩增得到HIV-1 NCp7编码序列,克隆到pet28a 质粒中构建HIV-1 NCp7表达载体。阳性克隆转染E. coli BL21 DE3,以IPTG诱导表达,细胞裂解液经Q sepherose H.P.纯化后超滤更换缓冲体系,再经SP sephrose H.P.纯化后纯度达到90％以上。将具有锌离子逐出活性的H2O2和AT-2与NCp7作用,用锌离子特异荧光染料TSQ [N-(6-methoxy-8- quinolyl)-p-toluenesulfonamide, N-(6-甲氧基-8-喹啉基)-p-甲基磺酰胺]检测化合物的锌离子逐出活性,结果表明该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选。经该方法筛选检测,KIZ-CM 10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性,值得进行深入研究。

关键词：艾滋病表达纯化抑制剂筛选方法

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