检索结果-内蒙古大学图书馆

串联双SUMO融合促进重组CRM197蛋白在大肠杆菌中高效可溶表达及其纯化与表征

中国生物工程杂志 2025年第05期 40-48页

作者：黄靖倍汪欣郑永祥余蓉刘永东孟奂张纯四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室

白喉毒素突变体蛋白(cross-reacting material 197, CRM197)是一种常用的多糖结合疫苗载体，其在大肠杆菌体系中往往以包涵体形式表达。为了改善通过包涵体复性来制备CRM197而导致的收率低、操作烦琐等不足，研究设计了一种基于SUMO标... 详细信息

白喉毒素突变体蛋白(cross-reacting material 197, CRM197)是一种常用的多糖结合疫苗载体，其在大肠杆菌体系中往往以包涵体形式表达。为了改善通过包涵体复性来制备CRM197而导致的收率低、操作烦琐等不足，研究设计了一种基于SUMO标签串联的策略，改善重组CRM197的可溶性，同时使用Origami B (DE3)大肠杆菌宿主，成功使重组CRM197蛋白上清液可溶比例提高至95%以上。同时简化了CRM197蛋白的获取途径，经两步Ni亲和层析和一步酶切除去融合标签等手段建立了从破菌上清液中纯化CRM197的方法，获得纯度高于98%的CRM197且收率大于80%。通过圆二色光谱及荧光发射光谱分析等证实纯化所得CRM197空间结构折叠正确。抗原性ELISA实验结果表明所制得的CRM197蛋白与CRM197标准品蛋白抗原性相当。研究结果表明串联双SUMO标签对重组CRM197在大肠杆菌中高效、可溶表达具有促进作用，并建立了快速纯化体系，获得了具有较好免疫原性的CRM197蛋白，为改善重组蛋白在原核表达体系的可溶表达设计提供了新思路。

关键词： CRM197蛋白原核表达体系胞内可溶表达串联双SUMO标签

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慢病毒载体定量检测方法的研究进展

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生物工程学报 2021年第7期37卷 2283-2292页

作者：陈思琪张松平杨延丽李贺平王歈刘幽燕广西大学化学化工学院广西南宁530000 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 北京永泰瑞科生物科技有限公司北京100176

免疫疗法正在发展成为一种可用于多种恶性肿瘤的有效且侵入性较小的治疗方法。慢病毒载体(Lentiviral vectors,LVs)因其能够稳定地整合相对较大的外源DNA,并且有效地转导分裂细胞和非分裂细胞,已在免疫治疗中显现出巨大潜力。临床应用... 详细信息

免疫疗法正在发展成为一种可用于多种恶性肿瘤的有效且侵入性较小的治疗方法。慢病毒载体(Lentiviral vectors,LVs)因其能够稳定地整合相对较大的外源DNA,并且有效地转导分裂细胞和非分裂细胞,已在免疫治疗中显现出巨大潜力。临床应用对慢病毒载体具有较高的质量要求,需要对最终产品进行严格的质量控制以保证其纯度、效力和安全性。其中慢病毒载体的定量检测是产品研发和质控的关键环节之一。文中总结了LVs定量检测的现有方法,包括流式细胞术(Fluorescence activated cell sorter,FACS)、P24酶联免疫法(P24 enzyme-linked immunosorbent assay,P24 ELISA)、实时荧光定量PCR方法 (Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)、纳米粒子跟踪分析(Nanoparticle tracking analysis,NTA)、可调电阻式脉冲传感(Tunable resistive pulse sensing,TRPS)和病毒计数仪(Virus counter,VC),并对其优缺点进行比较,对发展新的检测方法和存在的挑战进行了展望。

关键词：慢病毒载体定量感染性滴度颗粒分析

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鱼胶原蛋白肽经Strat-M^(TM)膜透皮吸收试验研究

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农产品加工 2023年第7期 14-17页

作者：刘利格李志国宋萃许智敏刘爱青高建萍王海燕北京盛美诺生物技术有限公司北京100062 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 中国科学院大学化学工程学院北京100049

鱼胶原蛋白肽具有美白护肤、改善皮肤状态等多种生理调节功能,在食品药品和化妆品中广泛应用,试验证实添加胶原蛋白肽的外用制剂都具有有益效果,但是对其渗透性能和作用机理研究较少。在医药和化妆品领域,透皮试验常用来评价外用制剂的... 详细信息

鱼胶原蛋白肽具有美白护肤、改善皮肤状态等多种生理调节功能,在食品药品和化妆品中广泛应用,试验证实添加胶原蛋白肽的外用制剂都具有有益效果,但是对其渗透性能和作用机理研究较少。在医药和化妆品领域,透皮试验常用来评价外用制剂的透皮吸收性能,渗透介质包括离体皮肤和人工合成膜。选用人工合成膜Strat-M^(TM)研究了几种鱼胶原蛋白肽的体外透皮性能,以期避开使用离体动物皮肤透皮的弊端。结果表明,鱼胶原蛋白肽经Strat-M^(TM)膜和小鼠皮肤的透皮速率随时间延长均呈线性增长;不同平均分子量和不同来源的鱼胶原蛋白肽对渗透速率有影响,分子量越小渗透越快;且胶原蛋白肽溶液浓度影响经Strat-M^(TM)透皮速率和单位面积累计透过量。鱼胶原蛋白肽经Strat-M^(TM)透皮符合一般透皮规律,可以替代离体皮肤进行胶原蛋白肽透皮试验研究。

关键词：鱼胶原蛋白肽 Strat-M^(TM)膜透皮吸收透皮速率单位面积累计透过量

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血栓调节蛋白在疾病中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第8期37卷 998-1004页

作者：牛小芸谢喜秀宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)是一种单链的跨膜糖蛋白质,主要存在于血管内皮细胞中,也可以在造血祖细胞、单核细胞和巨噬细胞中表达。血栓调节蛋白主要由5个结构域组成:发挥抗炎作用的N-端凝集素样结构域、发挥凝血和纤溶作用的6个... 详细信息

血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)是一种单链的跨膜糖蛋白质,主要存在于血管内皮细胞中,也可以在造血祖细胞、单核细胞和巨噬细胞中表达。血栓调节蛋白主要由5个结构域组成:发挥抗炎作用的N-端凝集素样结构域、发挥凝血和纤溶作用的6个表皮生长因子样重复序列、富含丝氨酸苏氨酸的区域、跨膜结构域和胞质结构域。血栓调节蛋白可与凝血酶结合激活蛋白C,从而发挥抗炎和抗凝血作用,血栓调节蛋白与凝血酶形成的复合物,也可激活纤溶抑制物从而起到抗纤溶的作用。研究发现,血栓调节蛋白可通过抑制上皮间充质细胞转化、抑制丝裂原活化蛋白激酶或激活蛋白C和纤溶抑制物等3个方面,阻止肿瘤的发生与发展。在动脉粥样硬化中,血栓调节蛋白可阻断凝血酶介导的PAR-1的激活、抑制内皮细胞自噬和凋亡,进而阻止动脉粥样硬化的发生发展。血栓调节蛋白凝集素样结构域还能与凝血酶结合抑制其活性,进而抑制血栓形成、肺纤维化及炎症反应。不仅如此,在糖尿病肾病、子痫前期和缺血再灌注损伤中,血栓调节蛋白均与其发病机制相关。目前,血栓调节蛋白在临床上仅用于治疗败血症和血管内弥散性凝血。血栓调节蛋白在心脑血管疾病、癌症和神经退行性疾病等方面的作用及治疗潜力值得进一步的探究。

关键词：血栓调节蛋白炎症凝血纤溶

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两亲性脂肽纳米混悬液冻干粉的制备及其表征

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过程工程学报 2021年第4期21卷 463-470页

作者：张梦秋靳惠娟巩方玲张佑红韦祎何玉先马光辉武汉工程大学环境生态与生物工程学院湖北武汉430205 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所卫生部病原体系统生物学教育部重点实验室北京100190

为解决抗艾滋药物两亲性脂肽LP-98溶解度低的问题,采用高压均质技术制备LP-98纳米混悬液冻干粉,并对其进行理化性质表征及药代动力学研究。最优制备工艺为:稳定剂为SDS,浓度为0.80wt%,高压均质压力为150 MPa,高压均质次数为5次。制备得... 详细信息

为解决抗艾滋药物两亲性脂肽LP-98溶解度低的问题,采用高压均质技术制备LP-98纳米混悬液冻干粉,并对其进行理化性质表征及药代动力学研究。最优制备工艺为:稳定剂为SDS,浓度为0.80wt%,高压均质压力为150 MPa,高压均质次数为5次。制备得到的LP-98纳米混悬液冻干粉复溶后平均粒径为261.5±1.1 nm,Zeta电位为-31.5±0.2 m V。圆二色光谱仪与单周期病毒感染实验结果显示LP-98的结构与生物活性均未改变。药代动力学结果表明,LP-98纳米混悬液冻干粉生物利用度为原料药的98.1%。LP-98在水中溶解度由184μg/m L提升至1733μg/m L,与原料药相比提高了8倍,解决了注射时药物难混悬的问题。

关键词：两亲性脂肽纳米混悬液高压均质法溶解度药代动力学

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一步离子交换层析从Cohn组分Ⅴ上清液中分离人血清白蛋白

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过程工程学报 2021年第1期21卷 92-99页

作者：向杰张松平张贵锋罗坚余蓉四川大学华西药学院生物技术药物学系靶向药物与释药系统教育部重点实验室四川省植物来源工程实验室和四川省小分子药物精准化工程技术研究中心四川成都610041 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

传统的血浆低温乙醇沉淀工艺中Cohn组分Ⅴ上清液由于其乙醇浓度高(体积浓度40%),进一步回收残余蛋白困难而被作为废弃组分。本研究探索了采用一步层析从Cohn组分Ⅴ上清中回收人血清白蛋白的方法。首先以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,比... 详细信息

传统的血浆低温乙醇沉淀工艺中Cohn组分Ⅴ上清液由于其乙醇浓度高(体积浓度40%),进一步回收残余蛋白困难而被作为废弃组分。本研究探索了采用一步层析从Cohn组分Ⅴ上清中回收人血清白蛋白的方法。首先以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,比较了三种不同类型介质在不同乙醇-水溶液中的吸附容量。疏水介质在乙醇-水溶液中对BSA吸附能力很弱,增加乙醇浓度导致吸附量趋近于零;阳离子交换介质在低乙醇浓度下有较高的吸附量,但随乙醇体积浓度增高下降较大。相比之下阴离子交换介质展示了最好的吸附性能,在乙醇体积浓度40%的乙醇-水溶液中吸附容量仍达34.66 mg/m L。进一步实验表明,在乙醇存在下BSA在阴离子交换介质上的吸附可用Langmuir等温吸附方程描述。将阴离子交换介质DEAE Sepharose Fast Flow装填层析柱,用于从Cohn组分Ⅴ上清液中分离人血清白蛋白,将40%乙醇的Cohn组分Ⅴ上清液直接进料阴离子交换层析柱,采用两步洗脱策略,第一步改变pH值由7.0到4.5以洗脱目标产物人血清白蛋白,第二步将氯化钠浓度从0增加到1 mol/L以洗脱紧密结合的部分酸性糖蛋白。SDS-PAGE电泳检测人血清白蛋白纯度为96.35%,得率为43 mg/L Cohn组分Ⅴ上清液。圆二色谱和荧光光谱检测表明经过离子交换回收的白蛋白二级结构和三级结构与对照的医疗制品无明显差异。活性分析表明回收的白蛋白与配体华法令钠的结合常数与对照的医疗制品的结合常数相似。本研究表明,离子交换层析可用于从含乙醇的溶液中分离蛋白质,一步离子交换层析就可从血浆工业废弃液中回收高纯度的人血清白蛋白。

关键词：人血清白蛋白组分Ⅴ上清液离子交换层析低温乙醇沉淀蛋白结构

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植物免疫诱导剂酰氨寡糖素对环境非靶标生物的毒性研究

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现代农药 2022年第3期21卷 50-53,63页

作者：周欣欣吴声敢王倬焦思明蓝帅袁善奎农业农村部农药检定所北京100125 浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所杭州310021 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

为明确植物免疫诱导剂酰氨寡糖素对4种环境非靶标生物的毒性风险,本文参照GB/T 31270—2014《化学农药环境安全评价试验准则》中的3种方法,即饲喂法(鸟类、蜜蜂经口)、半静态法(鱼类)和静态法(溞类),分别评估了95%酰氨寡糖素醋酸盐原药(... 详细信息

为明确植物免疫诱导剂酰氨寡糖素对4种环境非靶标生物的毒性风险,本文参照GB/T 31270—2014《化学农药环境安全评价试验准则》中的3种方法,即饲喂法(鸟类、蜜蜂经口)、半静态法(鱼类)和静态法(溞类),分别评估了95%酰氨寡糖素醋酸盐原药(TC)和7.5%酰氨寡糖素醋酸盐可溶液剂(SL)对4种环境非靶标生物的急性毒性。结果表明,在限度试验下,供试物对非靶标生物均表现为低毒,且非靶标生物均未出现死亡。其中,95%酰氨寡糖素醋酸盐TC和7.5%酰氨寡糖素醋酸盐SL对日本鹌鹑的7 d半致死剂量(7 d-LD_(50))分别为>2.24×10^(3) mg a.i./kg和>762.6 mg a.i./kg;对意大利蜜蜂的48 h-LD_(50)值分别为>130μg a.i./蜂和>118μg a.i./蜂;对斑马鱼的96 h半致死浓度(96 h-LC_(50))分别为>168 mg a.i./L和>150 mg a.i./L;对大型溞的48 h半数有效浓度(48 h-EC_(50))分别为>224 mg a.i./L和>152 mg a.i./L。以上结果说明,95%酰氨寡糖素醋酸盐TC和7.5%酰氨寡糖素醋酸盐SL对上述4种非靶标生物安全。本研究结果可为合理应用酰氨寡糖素提供参考。

关键词：酰氨寡糖素生物农药生态毒性非靶标生物

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基于核磁共振饱和转移差谱技术筛选Protein A仿生多肽配基

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生物加工过程 2021年第1期19卷 40-46页

作者：王伟颖葛佳苏志国马光辉郑永祥郝冬霞余蓉四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室四川成都610041 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 中国科学院大学北京100049

核磁共振饱和转移差谱(STD-NMR)技术能够用于检测小分子配基与大分子蛋白之间的亲和性。利用STD⁃NMR技术评价了基于Protein A设计的仿生肽段与人抗体(hIgG)的亲和力以及结合机制,从中筛选出了与抗体亲和性最强的仿生六肽FYEILH,利用静... 详细信息

核磁共振饱和转移差谱(STD-NMR)技术能够用于检测小分子配基与大分子蛋白之间的亲和性。利用STD⁃NMR技术评价了基于Protein A设计的仿生肽段与人抗体(hIgG)的亲和力以及结合机制,从中筛选出了与抗体亲和性最强的仿生六肽FYEILH,利用静态吸附试验确定了此六肽与抗体的亲和力(Kd)为0.8×10^-6 mol/L,静态结合载量为61.22 mg/mL,与目前文献中报道的许多多肽配基相比,具有明显的优势。在本研究中成功将Protein A最小化,获得了与抗体具有高亲和性的Protein A仿生多肽配基。

关键词：最小化配基蛋白A 人抗体hIgG 理性设计核磁共振饱和转移差谱仿生多肽

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基于疫苗颗粒完整性的硅胶吸附/解吸附纯化重组乙肝表面抗原工艺研究

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过程工程学报 2020年第10期20卷 1198-1209页

作者：胡胜杰黄永东赵岚朱凯苗壮王飞晋洪超李建杨珺汪和睦马光辉袁洪水河北农业大学生命科学学院河北保定071001 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 北京石油化工学院化学工程学院北京102617 天津和睦健民生物科技有限公司天津300384 中国科学院大学化学工程学院北京100049

针对重组汉逊酵母乙肝表面抗原(HBsAg)在传统纯化过程中稳定性差的问题,采用静态光散射、荧光光谱和动态光散射等分析手段,从颗粒完整性角度研究其在不同pH条件下的稳定性变化。以其为指导,采用硅胶吸附/解吸附纯化HBsAg,建立该过程中... 详细信息

针对重组汉逊酵母乙肝表面抗原(HBsAg)在传统纯化过程中稳定性差的问题,采用静态光散射、荧光光谱和动态光散射等分析手段,从颗粒完整性角度研究其在不同pH条件下的稳定性变化。以其为指导,采用硅胶吸附/解吸附纯化HBsAg,建立该过程中关键因素的响应面模型,并与疏水层析联用,进一步纯化HBsAg,分析纯化效果以及纯化后疫苗颗粒完整性。采用透射电镜观察纯化后疫苗形貌,用高效分子排阻色谱法(HPSEC)分析颗粒稳定性。结果表明在酸性溶液下,pH接近HBsAg等电点时,抗原颗粒间静电斥力减小,颗粒容易聚集;碱性条件下,抗原颗粒内部疏水基团暴露,造成颗粒解聚。建立响应面模型,以活性收率为响应值时,最佳纯化工艺为吸附pH=7.43,洗脱pH=10.48,洗脱温度55.4℃,此时活性收率最高为39.1%;以纯化倍数为响应值时,吸附pH=7.16,洗脱pH=10.52,洗脱温度55.1℃,此时纯化倍数最高为1.90。进一步对洗脱液进行疏水层析纯化,活性收率为49.73%,颗粒完整性为85.79%,透射电镜观察到抗原颗粒粒径为20~40 nm。与传统疏水层析方法相比,采用硅胶吸附/解吸附与疏水层析联用的纯化方法,疫苗活性收率提高31.99个百分点,颗粒完整性提高20.90个百分点,颗粒稳定性提高22.93个百分点。该研究为高效纯化重组HBsAg及提高疫苗纯化过程的颗粒完整程度等提供新思路。

关键词：乙肝表面抗原颗粒完整性硅胶吸附/解吸附响应面法疏水层析

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猪小肠黏膜下层脱细胞基质中Ⅰ、Ⅲ型胶原检测方法研究

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生物学杂志 2020年第5期37卷 108-111页

作者：张扬陈毅高建萍夏磊磊李勇超王清石张贵锋赵博北京博辉瑞进生物科技有限公司北京100026 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 河南科技学院生命科技学院新乡453003

猪小肠黏膜下层脱细胞基质(SⅠS,Small intestinal submucosa)的主要成分为Ⅰ、Ⅲ型胶原,拟建立一种基于液相质谱联用(HPLC-MS)的胶原类型识别和定量检测方法。首先利用胰蛋白酶将胶原标准品和样品酶解,利用离子阱质谱(Ⅰon trap mass s... 详细信息

猪小肠黏膜下层脱细胞基质(SⅠS,Small intestinal submucosa)的主要成分为Ⅰ、Ⅲ型胶原,拟建立一种基于液相质谱联用(HPLC-MS)的胶原类型识别和定量检测方法。首先利用胰蛋白酶将胶原标准品和样品酶解,利用离子阱质谱(Ⅰon trap mass spectrometry, LCQ)识别出Ⅰ、Ⅲ型胶原的特征多肽分别为GETGPAGPAGPVGPVGAR、GPPGAVGPSGPR,再利用三重四极杆质谱(Triple quadrupole mass spectrometry, TSQ)对其进行定量;然后通过胶原标准品浓度和峰面积的线性关系计算Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结果表明VⅠDASⅠSTM和Biodesign■中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量总和与高效液相色谱法检测结果一致,通过HPLC-MS检测猪跟腱和真皮中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的结果符合其在组织中的分布规律;方法学实验表明HPLC-MS的精密度(RSD=2.38%)较高、稳定性良好。

关键词：猪小肠黏膜下层脱细胞基质 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原液质联用

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