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2020年全国无机硅化物行业协会年会暨行业高质量发展研讨会

作者：胡胜杰黄永东赵岚朱凯苗壮王飞晋洪超李建杨珺汪和睦马光辉袁洪水河北农业大学生命科学学院中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京石油化工学院化学工程学院天津和睦健民生物科技有限公司中国科学院大学化学工程学院

针对重组汉逊酵母乙肝表面抗原(HBsAg)在传统纯化过程中稳定性差的问题,采用静态光散射、荧光光谱和动态光散射等分析手段,从颗粒完整性角度研究其在不同pH条件下的稳定性变化。以其为指导,采用硅胶吸附/解吸附纯化HBsAg,建立该过程中... 详细信息

针对重组汉逊酵母乙肝表面抗原(HBsAg)在传统纯化过程中稳定性差的问题,采用静态光散射、荧光光谱和动态光散射等分析手段,从颗粒完整性角度研究其在不同pH条件下的稳定性变化。以其为指导,采用硅胶吸附/解吸附纯化HBsAg,建立该过程中关键因素的响应面模型,并与疏水层析联用,进一步纯化HBsAg,分析纯化效果以及纯化后疫苗颗粒完整性。采用透射电镜观察纯化后疫苗形貌,用高效分子排阻色谱法(HPSEC)分析颗粒稳定性。结果表明在酸性溶液下,pH接近HBsAg等电点时,抗原颗粒间静电斥力减小,颗粒容易聚集;碱性条件下,抗原颗粒内部疏水基团暴露,造成颗粒解聚。建立响应面模型,以活性收率为响应值时,最佳纯化工艺为吸附pH=7.43,洗脱pH=10.48,洗脱温度55.4℃,此时活性收率最高为39.1%;以纯化倍数为响应值时,吸附pH=7.16,洗脱pH=10.52,洗脱温度55.1℃,此时纯化倍数最高为1.90。进一步对洗脱液进行疏水层析纯化,活性收率为49.73%,颗粒完整性为85.79%,透射电镜观察到抗原颗粒粒径为20～40 nm。与传统疏水层析方法相比,采用硅胶吸附/解吸附与疏水层析联用的纯化方法,疫苗活性收率提高31.99个百分点,颗粒完整性提高20.90个百分点,颗粒稳定性提高22.93个百分点。该研究为高效纯化重组HBsAg及提高疫苗纯化过程的颗粒完整程度等提供新思路。

关键词：乙肝表面抗原颗粒完整性硅胶吸附/解吸附响应面法疏水层析

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生物3D打印蓖麻油基水性聚氨酯涂层固定化碳酸酐酶

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化工学报 2018年第8期69卷 3577-3584,3765页

作者：崔建东崔兆惠苏志国郑春杨马光辉张松平河北科技大学生物科学与工程学院河北石家庄050018 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 北京奥格诺生物科技有限公司北京100192

以蓖麻油基阴离子水性聚氨酯为载体,采用生物3D打印技术制备含碳酸酐酶的生物活性聚氨酯涂层,并与传统涂覆法制备的含酶涂层进行对比。通过动态光散射、红外、扫描电镜-X射线能谱、热重、接触角等各种手段对涂层中酶与水性聚氨酯之间的... 详细信息

以蓖麻油基阴离子水性聚氨酯为载体,采用生物3D打印技术制备含碳酸酐酶的生物活性聚氨酯涂层,并与传统涂覆法制备的含酶涂层进行对比。通过动态光散射、红外、扫描电镜-X射线能谱、热重、接触角等各种手段对涂层中酶与水性聚氨酯之间的相互作用进行了分析表征。结果表明,在形成生物活性涂层过程中,碳酸酐酶是通过与聚氨酯链段上阴离子基团的静电吸引被固定在聚氨酯涂层中。催化活性结果表明,与传统涂覆法相比,涂层的酶活回收率为50.51%,比传统涂覆法提高了4倍。这可能是由于生物3D打印技术制备的含酶涂层更薄、更均匀,表面更平滑。

关键词：生物3D打印蓖麻油基水性聚氨酯涂层酶固定化生物催化

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静注人免疫球蛋白层析纯化条件的优化

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国际生物制品学杂志 2019年第3期42卷 125-128页

作者：李冠军张学成张剑涛刘亚芳罗坚华兰生物工程股份有限公司研发中心河南省新乡453003 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

目的利用响应面法对阴离子交换介质在静注人免疫球蛋白层析纯化中的应用条件进行优化,确立最佳层析参数。方法采用双因素三水平响应面法设计层析参数pH值和电导率,用双缩脲法和高效液相色谱法分别测定蛋白浓度和分子大小分布,以蛋白回... 详细信息

目的利用响应面法对阴离子交换介质在静注人免疫球蛋白层析纯化中的应用条件进行优化,确立最佳层析参数。方法采用双因素三水平响应面法设计层析参数pH值和电导率,用双缩脲法和高效液相色谱法分别测定蛋白浓度和分子大小分布,以蛋白回收率、单体+二聚体含量评价纯化效果,获得最优层析参数并进行验证。结果优化的层析纯化平衡和上样条件为pH5.4,电导率1.05 mS/cm。在该条件下以血浆组分Ⅱ为原料,层析后蛋白回收率为(96.6±3.1)%,IgG单体和二聚体比例为(99.98±0.02)%,IgA含量为(2.6±1.1) mg/L,IgM含量为(4.5±1.4) mg/L。结论经响应面法优化后的阴离子交换层析,可用于纯化血浆组分Ⅱ制备静注人免疫球蛋白制品。

关键词：静注人免疫球蛋白阴离子交换树脂类响应面法

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应用体积排阻色谱法测定口蹄疫灭活疫苗中的146S抗原含量

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生物工程学报 2018年第5期34卷 676-684页

作者：徐嫄邹兴启李翠朱元源何天慈杨延丽林旋宋艳民郑金来张松平赵启祖中国兽医药品监察所北京100081 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 北京标驰泽惠生物科技有限公司北京102600

旨在应用体积排阻色谱法测定口蹄疫灭活疫苗中的146S抗原含量。使用TSKgel G4000SWXL(7.8 mm×30 cm)色谱柱,以pH 7.2的缓冲盐体系作为流动相,流速为0.6 mL/min,进样量为100μL,检测波长为259 nm。以口蹄疫病毒(O型)灭活146S抗原纯... 详细信息

旨在应用体积排阻色谱法测定口蹄疫灭活疫苗中的146S抗原含量。使用TSKgel G4000SWXL(7.8 mm×30 cm)色谱柱,以pH 7.2的缓冲盐体系作为流动相,流速为0.6 mL/min,进样量为100μL,检测波长为259 nm。以口蹄疫病毒(O型)灭活146S抗原纯化样品建立标准曲线;使用灭活抗原液配制3份口蹄疫灭活疫苗,并进行精密度、重复性、特异性、耐受性验证;应用该方法快速测定16批疫苗的146S含量。结果表明,抗原浓度在0.56–67.42μg/mL范围内,其峰面积与浓度的线性关系良好(R^2=0.996,n=10),3份疫苗146S抗原测定回收率分别为93.6%(RSD=2.7%,n=3)、102.3%(RSD=2.6%,n=3)、95.5%(RSD=5.1%,n=3),方法重复性好、准确性强(RSD=0.5%,n=6),且操作简便、高效,对16批疫苗的测定结果较理想。应用该方法有望快速高效地检测口蹄疫灭活疫苗的146S抗原含量,为疫苗的质量控制提供有力支持。

关键词：体积排阻色谱口蹄疫灭活疫苗 146S抗原

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基于微胶囊技术对油脂包埋的研究进展

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现代食品科技 2018年第10期34卷 271-280,195页

作者：王慧梅范艳敏王连艳东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150040 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

油脂来源广泛、营养丰富,在医药、食品及化妆品等领域中具有很高的应用价值,但因含有不饱和脂肪酸而易被氧化变质,使其应用受到一定的限制。微胶囊技术是一项具有很高实用价值并被广泛应用的新技术。采用微胶囊化技术可将油脂包埋形成... 详细信息

油脂来源广泛、营养丰富,在医药、食品及化妆品等领域中具有很高的应用价值,但因含有不饱和脂肪酸而易被氧化变质,使其应用受到一定的限制。微胶囊技术是一项具有很高实用价值并被广泛应用的新技术。采用微胶囊化技术可将油脂包埋形成微胶囊,一方面可以将油脂与空气隔离,防止被氧化,同时可以掩蔽不良风味;另一方面,油脂的微胶囊化可以改善油脂的多方面性质,使其转化成固体粉末,并使其获得更多的特殊功能,拓宽油脂的应用范围。本文将主要围绕微胶囊的结构组成、微胶囊的制备方法、微胶囊释放机制、油脂微胶囊化的优势及微胶囊化技术在各类油脂中的应用现状进行综述,为油脂微胶囊化研究提供一些理论依据,为油脂产品或其他生物活性物质进一步的使用和开发提供借鉴。

关键词：油脂微胶囊技术应用

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DDAB/PLA纳米颗粒佐剂浓度对免疫效果的影响

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现代预防医学 2018年第14期45卷 2603-2609页

作者：王红芳王连艳杨婷媛殷瑛阎雪莹黑龙江中医药大学药学院中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室

目的以市售铝盐佐剂为对照,考察不同纳米颗粒佐剂浓度对rPA抗原免疫效果的影响,优化增强rPA抗原免疫效果的纳米颗粒佐剂浓度。方法采用间接ELISA、CCK8、流式细胞术、Luminex方法研究DDAB/PLA纳米颗粒佐剂浓度对免疫效果的影响。结果根... 详细信息

目的以市售铝盐佐剂为对照,考察不同纳米颗粒佐剂浓度对rPA抗原免疫效果的影响,优化增强rPA抗原免疫效果的纳米颗粒佐剂浓度。方法采用间接ELISA、CCK8、流式细胞术、Luminex方法研究DDAB/PLA纳米颗粒佐剂浓度对免疫效果的影响。结果根据体外DC细胞、体内免疫后脾细胞体外孵育刺激后的活化及其细胞因子分泌水平结果,优化的纳米颗粒佐剂浓度为3 mg/ml;体内免疫后特异性抗体分泌水平结果显示,随纳米颗粒佐剂浓度增加,抗体分泌水平也提升;与铝盐佐剂相比,纳米颗粒佐剂对脾细胞的活化以及其细胞因子分泌的效果更佳。结论 3 mg/ml为纳米颗粒佐剂最佳佐剂浓度;纳米颗粒作为rPA疫苗佐剂可显著提高免疫效果。

关键词：纳米颗粒佐剂 rPA 免疫效果

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鲤疱疹病毒Ⅱ型的核酸恒温扩增微流控快速检测芯片的建立

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沈阳农业大学学报 2018年第2期49卷 220-226页

作者：齐立斐毛瑞吴萍王倬叶元土杜昱光中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 中国科学院大学北京100049 苏州大学基础医学与生物科学学院江苏苏州215123

鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)主要感染锦鲤、鲫鱼及其变种,导致造血器官坏死,其致死率高,给养殖业造成了巨大损失。为建立一种快速、灵敏、准确的CyHV-2检测方法,可于大规模暴发之前进行疫情的早期诊断和及时防控,对C... 详细信息

鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)主要感染锦鲤、鲫鱼及其变种,导致造血器官坏死,其致死率高,给养殖业造成了巨大损失。为建立一种快速、灵敏、准确的CyHV-2检测方法,可于大规模暴发之前进行疫情的早期诊断和及时防控,对CyHV-2建立了一种集核酸快速提取方法、竞争性互补介导核酸恒温扩增(competitive annealing mediated isothermal amplification,CAMP)与微流控芯片(microfluidic chip)于一体的检测方法。以CyHV-2基因保守区域片段为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立了一种基于CAMP技术的CyHV-2可视化检测方法,并且对该方法进行了特异性、灵敏性及临床样本的检测进行评估。结果表明:所建立CAMP方法的灵敏度最低检测限为10拷贝;对与其基因型有较高相似性的鲤疱疹病毒Ⅲ型(Cyprinid herpesvirus3,CyHV-3)无非特异性扩增,特异性良好;用本方法对89批次的临床样本进行检测,显示灵敏度及特异性均为100%。核酸快速提取的方法能够较快获得纯度较高的核酸,缩短了核酸提取时间,且极大节约了检测成本,具有操作简单、样本用量少等特点,且经核酸快速提取方法处理的病鱼组织样本能够满足CAMP现场检测的要求。此外,将针对CyHV-2所建立的CAMP可视化检测方法结合微流控芯片,可实现多目标病原的高通量、多指标筛查,将极大提高检测效率。本试验对鲤疱疹病毒Ⅱ型所建立的核酸快速提取、CAMP检测及微流控芯片的方法可在70min内实现对该病毒的现场快速检测及诊断,极大地提高了对CyHV-2疫病的早期防控能力,将为CyHV-2的快速检测及疫情早期预警提供参考。所建立的方法亦可应用于其他经济水生生物病原的现场快速检测及后续防控。

关键词：鲤疱疹病毒Ⅱ型 CAMP 核酸快速提取现场检测微流控芯片

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(131)~I标记卵清蛋白及其载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒SPECT显像

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科学技术与工程 2018年第8期18卷 27-33页

作者：马文颜康磊王连艳霍焱申镐源王艳萍天津科技大学食品工程与生物技术学院天津300457 北京大学第一医院北京100034 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

制备载(131)~I-OVA的荷正电聚乳酸-乙醇酸(PLGA/DDAB)纳米粒,探讨其在活体动物体内的生物分布与转运研究。氯胺T法对卵清蛋白(OVA)进行(131)~I标记,Sephadex G 25纯化标记抗原,纸层析法测定标记物的生物活性和体外稳定性。纳米沉淀法制... 详细信息

制备载(131)~I-OVA的荷正电聚乳酸-乙醇酸(PLGA/DDAB)纳米粒,探讨其在活体动物体内的生物分布与转运研究。氯胺T法对卵清蛋白(OVA)进行(131)~I标记,Sephadex G 25纯化标记抗原,纸层析法测定标记物的生物活性和体外稳定性。纳米沉淀法制备PLGA/DDAB纳米球,将其与(131)~I-OVA共混吸附,制备载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒。动物试验选择C57/BL6小鼠,肌肉注射载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒,分析(131)~I-OVA在小鼠组织器官中的分布情况,并于注射疫苗制剂后不同时间行SPECT正位静态显像,观察小鼠不同组织内放射性浓聚情况。结果显示,标记抗原经纯化后,测得(131)~I-OVA比活度达32~42μCi·μg-1,标记率达(71.92±0.08)%,放射性化学纯度为(85.94±0.15)%。标记物在新鲜血清中存放72 h后,仍保持很高的反应活性,表明标记的OVA稳定性良好。采用纳米沉淀法制备PLGA/DDAB纳米球,平均粒径、分散系数和Zeta电位分别为122.8 nm、0.084和+31.5 m V。将其与(131)~I-OVA共混吸附,抗原携载率达(89.60±0.21)%。注射载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米球疫苗制剂,与无佐剂疫苗相比,抗原在注射部位消失的速度更为缓慢。结果表明,成功制备了载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米球,生物活性较好,可用于抗原在活体动物的生物分布与转运研究。

关键词：放射性核素131I PLGA 纳米粒子 SPECT显像

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藏红花素Ⅰ的分离制备及抗氧化与稳定性研究

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食品研究与开发 2018年第24期39卷 63-70页

作者：陈哲赵庆生秦雯赵兵葛思琪赵强查圣华北京城市学院北京100094 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 南阳泰瑞生物科技股份有限公司河南南阳473412

建立硅胶柱层析法分离制备栀子黄色素中藏红花素Ⅰ的方法,并对所得产品进行抗氧化性与稳定性研究。建立了乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为100∶20∶15至100∶25∶15)的梯度洗脱体系,以及层析柱硅胶与栀子黄色素的质量比为350∶1的上样量比例... 详细信息

建立硅胶柱层析法分离制备栀子黄色素中藏红花素Ⅰ的方法,并对所得产品进行抗氧化性与稳定性研究。建立了乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为100∶20∶15至100∶25∶15)的梯度洗脱体系,以及层析柱硅胶与栀子黄色素的质量比为350∶1的上样量比例,并制备出纯度为98.39%的藏红花素Ⅰ单体样品,其得率为15.58%,回收率为50.42%。抗氧化与稳定性研究结果表明,藏红花素Ⅰ具有优良的抗氧化活性;藏红花素Ⅰ在高温、强光照射、强酸强碱环境中均会产生损失。含藏红花素Ⅰ成分的产品应贮存于低温、避光、pH值为6的环境中,且与适量抗坏血酸联用可以提高其稳定性。

关键词：栀子黄色素藏红花素Ⅰ 硅胶柱层析稳定性体外抗氧化

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脱细胞猪小肠黏膜下层基质中纤维连接蛋白定量检测方法研究

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生物学杂志 2018年第2期35卷 97-100页

作者：陈毅夏磊磊张扬高建萍李赛娜雷雄心李勇超张贵锋赵博北京博辉瑞进生物科技有限公司北京100026 河南科技学院生命科技学院新乡453003 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190

采用分批次酶解和高效液相色谱与质谱分析联用技术(HPLC-MS)对脱细胞猪小肠黏膜下层(p-SIS)基质材料中纤维连接蛋白(FN)进行了定量检测。分批次酶解消除了静态酶解时间长、酶解效率低的不足,将酶解时间从96 h缩短至6 h,降解率可以达到95... 详细信息

采用分批次酶解和高效液相色谱与质谱分析联用技术(HPLC-MS)对脱细胞猪小肠黏膜下层(p-SIS)基质材料中纤维连接蛋白(FN)进行了定量检测。分批次酶解消除了静态酶解时间长、酶解效率低的不足,将酶解时间从96 h缩短至6 h,降解率可以达到95%以上。采用胰蛋白酶特异性酶解得到猪源FN的一个特征多肽为SSPVVIDASTAIDAPSNLR,HPLC-MS对这一特征肽段定量检测结果表明,VIDASISTM和Biodesign两种脱细胞材料中FN的含量分别为0.43%和0.17%。方法学实验证明该方法精确度较高(RSD为1.31%)。结果表明基于质谱的分析技术可有效检测脱细胞基质中FN含量。

关键词：猪小肠黏膜下层脱细胞基质纤维连接蛋白特征肽段液质联用技术

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