白喉毒素突变体蛋白(cross-reacting material 197, CRM197)是一种常用的多糖结合疫苗载体，其在大肠杆菌体系中往往以包涵体形式表达。为了改善通过包涵体复性来制备CRM197而导致的收率低、操作烦琐等不足，研究设计了一种基于SUMO标...
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白喉毒素突变体蛋白(cross-reacting material 197, CRM197)是一种常用的多糖结合疫苗载体，其在大肠杆菌体系中往往以包涵体形式表达。为了改善通过包涵体复性来制备CRM197而导致的收率低、操作烦琐等不足，研究设计了一种基于SUMO标签串联的策略，改善重组CRM197的可溶性，同时使用Origami B (DE3)大肠杆菌宿主，成功使重组CRM197蛋白上清液可溶比例提高至95%以上。同时简化了CRM197蛋白的获取途径，经两步Ni亲和层析和一步酶切除去融合标签等手段建立了从破菌上清液中纯化CRM197的方法，获得纯度高于98%的CRM197且收率大于80%。通过圆二色光谱及荧光发射光谱分析等证实纯化所得CRM197空间结构折叠正确。抗原性ELISA实验结果表明所制得的CRM197蛋白与CRM197标准品蛋白抗原性相当。研究结果表明串联双SUMO标签对重组CRM197在大肠杆菌中高效、可溶表达具有促进作用，并建立了快速纯化体系，获得了具有较好免疫原性的CRM197蛋白，为改善重组蛋白在原核表达体系的可溶表达设计提供了新思路。
以脱脂火麻仁粉(defatted hemp seed meal,HPM)为原料,采用两种方法进行火麻仁蛋白(hemp seed protein isolate,HPI)的提取分离,碱提/酸沉法制备得到碱提蛋白(hemp seed protein isolate-alkaline extraction,HPI-AE),盐溶/盐析法制备...
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以脱脂火麻仁粉(defatted hemp seed meal,HPM)为原料,采用两种方法进行火麻仁蛋白(hemp seed protein isolate,HPI)的提取分离,碱提/酸沉法制备得到碱提蛋白(hemp seed protein isolate-alkaline extraction,HPI-AE),盐溶/盐析法制备得到盐提蛋白(hemp seed protein isolate-salt extraction,HPI-SE)。HPI-SE的蛋白含量(94.8%)高于HPI-AE的蛋白含量(85.9%);并且HPI-SE的外观色泽更加亮白。蛋白质凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果表明,两种方法提取的火麻仁蛋白主要成分均为火麻仁球蛋白,二者氨基酸组成相似,均含有丰富的精氨酸。不同pH值条件下,HPI的溶解性曲线均呈U型,但是在相同pH值条件下,二者的溶解性存在较大的差异。火麻仁蛋白的起泡性和蛋白质的溶解性呈现出正相关,当pH值远离等电点时,同种电荷的静电斥力提高了蛋白质的溶解性,从而改善了蛋白质的起泡性。荧光光谱显示,在不同pH值条件下,HPI的蛋白构象不随pH值变化发生明显改变,但HPI-SE的荧光强度高于HPI-AE的荧光强度,显示HPI-SE的蛋白质聚集程度高于HPI-AE。
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