利用肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白优势表位肽段构建融合蛋白抗原能有效抑制病毒感染,有望成为继灭活病毒后更为安全有效的疫苗品种。该融合蛋白能通过原核体系有效表达但形成无序包涵体,采用常规层析介质难以实现目标蛋白与宿主杂质的有效分离,阻碍了对该抗原蛋白进行全面临床前活性及安全性评价。在原有融合蛋白抗原N端插入组氨酸标签,对形成的包涵体变性溶解后直接采用镍金属螯合亲和介质进行分离纯化,获得了纯度大于95%的抗原纯品,目标蛋白收率46.8%。采用透析方式脱除纯化样品中高浓度脲,发现直接透析至无脲的缓冲液中蛋白质大量沉淀,而先稀释至2mol/L脲的缓冲液中然后用G25脱盐柱完全脱除脲则无任何沉淀形成,获得近100%的蛋白质收率。透射电镜分析最终样品发现融合蛋白形成了10nm左右粒径均一的类病毒蛋白颗粒,且在p H 8.0的磷酸盐缓冲液中保持稳定。该研究结果为将EV71融合蛋白抗原发展为安全有效且低成本的手足口疫苗奠定了基础。
将牛关节软骨用NaCl和盐酸胍预处理,在酸性条件下用胃蛋白酶降解杂蛋白,经盐析、透析和冷冻干燥后获得Ⅱ型胶原,对其进行鉴定.结果表明,提取的Ⅱ型胶原纯度为92.2%,得率为61.5%,单条链分子量为130 k Da,氨基酸组成中Gly含量超过30%,Pro...
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将牛关节软骨用NaCl和盐酸胍预处理,在酸性条件下用胃蛋白酶降解杂蛋白,经盐析、透析和冷冻干燥后获得Ⅱ型胶原,对其进行鉴定.结果表明,提取的Ⅱ型胶原纯度为92.2%,得率为61.5%,单条链分子量为130 k Da,氨基酸组成中Gly含量超过30%,Pro与Hyp总含量超过20%,具有胶原特有的超分子结构,中性条件下变性温度为43.68℃,符合II型胶原特性.
将F藻（Lessonia trabeculata）的茎部浸泡后粉碎至1-3 mm进行消化反应,考察了Na2CO3浓度、料液质量比、搅拌转速、消化温度和消化时间对褐藻胶消化得率和褐藻胶溶液粘度的影响,通过正交实验对消化工艺条件进行优化,并对褐藻胶进行红外光谱定性分析.结果表明,最佳消化条件为：温度70℃,Na2CO3浓度1.67%,搅拌转速400 r/min,料液质量比1：15,时间8 h.该条件下褐藻酸钠产品得率为34.80%,粘度为2261.67 m Pa·s,远高于市售产品的173.30m Pa·s.褐藻酸钠基本理化指标均符合国家标准、粘均分子量为11.85 k Da.
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