检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 610-614页

作者：徐义辉梁国栋孙兆军陈飞付士红柴玉波侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所

从我国特有的双胸蚓属 (Lumbricusbimastus)蚯蚓体内提取到一种有纤维蛋白平板溶解活性的蛋白质 ,采用聚偏二氟乙烯膜 (PVDF)微量测序法测得蛋白质的N端氨基酸序列 ,依此设计简并引物 ,通过RT PCR获得其对应cDNA .该cDNA全长 888bp ,1～... 详细信息

从我国特有的双胸蚓属 (Lumbricusbimastus)蚯蚓体内提取到一种有纤维蛋白平板溶解活性的蛋白质 ,采用聚偏二氟乙烯膜 (PVDF)微量测序法测得蛋白质的N端氨基酸序列 ,依此设计简并引物 ,通过RT PCR获得其对应cDNA .该cDNA全长 888bp ,1～ 72 6位核苷酸对应读码框架 (ORF) ,编码含 2 4 2个氨基酸的成熟肽 .终止子 (TAG)位于cDNA的 72 7～ 72 9位 ,其余核苷酸序列为 3′端非编码区 .成熟肽命名为蚯蚓纤溶酶PV2 42 .蛋白质预测得知蛋白质等电点为 4 33,含组氨酸 (His4 4 )及丝氨酸 (Ser191)两个活性位点 ;蛋白质由两个结构域组成 ,表面有活性裂隙 ;该蛋白质属丝氨酸蛋白酶超家族胰蛋白酶类 .经国际基因库等多种查询比较未见PV2 42 基因的报道 ,为首次发现的新基因 ,在国际基因库的输入号为GenBankAF10 96 4 8.随后构建了pTrxFUS PV2 42 重组质粒 ,并在大肠杆菌GI72 4中获得融合蛋白TrxA/PV2 42 的可溶性表达 ,采用离子交换层析法纯化表达蛋白 ,融合蛋白有纤维平板溶解活性 .

关键词：蚯蚓纤溶酶新基因 PV242 克隆表达双胸蚓属蛋白质测序

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重组腺伴随病毒载体介导的hEPO转移及表达

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生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 176-180页

作者：伍志坚吴小兵王宏卢斌董小岩侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室中国预防医学科学院病毒学研?

为实现人促红细胞生成素 (humanerythropoietin ,hEPO)基因在体内的持续表达 ,构建了携带hEPO的重组腺伴随病毒 (recombinantadeno associatedvirus,rAAV)载体质粒 ,建立了稳定携带hEPO表达盒的rAAV载体细胞株 ,采用“一种辅助病毒感染... 详细信息

为实现人促红细胞生成素 (humanerythropoietin ,hEPO)基因在体内的持续表达 ,构建了携带hEPO的重组腺伴随病毒 (recombinantadeno associatedvirus,rAAV)载体质粒 ,建立了稳定携带hEPO表达盒的rAAV载体细胞株 ,采用“一种辅助病毒感染一个载体细胞株”的rAAV生产策略 ,制备并纯化了携带hEPO的rAAV(rAAV hEPO)。结果表明 ,rAAV介导的hEPO转移能够使hEPO在培养的BHK 2 1细胞中得到有效表达 ;用rAAV hEPO对Balb/c小鼠进行一次肌肉注射 ,可使hEPO在小鼠体内持续表达 10周以上 ,并可明显升高小鼠的红细胞比容

关键词：重组腺伴随病毒 hEPO 基因转移基因治疗载体

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汉滩病毒核蛋白纯化及其免疫学特性的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第1期21卷 40-45页

作者：林静杭长寿中国预防医学科学院病毒学研究所

目的　研究汉滩病毒核蛋白及其免疫学特性 ,研制新一代的肾综合征出血热 (HFRS)亚单位疫苗。方法　用亲和层析法纯化重组杆状病毒表达的汉滩病毒核蛋白及野生汉滩病毒 76 118的核蛋白 ,以聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和免疫印迹实验 ... 详细信息

目的　研究汉滩病毒核蛋白及其免疫学特性 ,研制新一代的肾综合征出血热 (HFRS)亚单位疫苗。方法　用亲和层析法纯化重组杆状病毒表达的汉滩病毒核蛋白及野生汉滩病毒 76 118的核蛋白 ,以聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和免疫印迹实验 (Westernblot)鉴定纯化蛋白。用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠 ,分别以福氏佐剂 (FCA)和氢氧化铝 [Al(OH) 3]为佐剂。以免疫荧光法 (IFAT)及酶联免疫法 (ELISA)检测抗体滴度 ;用微量细胞病变中和试验检测中和抗体 ,用血凝试验检测血凝活性 ,用血凝抑制试验检测血凝抑制活性 ;用淋巴细胞转化试验 (3H TdR掺入法 )测定免疫小鼠脾淋巴细胞对汉坦病毒 76 118株 (野鼠型 )和L99(家鼠型 )的细胞免疫应答 ;动物保护试验以长爪沙鼠为感染动物模型 ,用纯化的核蛋白进行免疫 ,再用 10 0LD50 76 118进行攻击 ,然后以免疫荧光法观察鼠肺切片 ;用MTT比色法观察免疫小鼠巨噬细胞接种汉滩病毒后细胞活力的变化并用免疫荧光法检测免疫小鼠巨噬细胞中的病毒抗原。结果　SDS PAGE显示单一条带 ,相对分子质量均为 5 0× 10 3,Westernblot证明为汉滩病毒核蛋白。小鼠免疫血清抗体滴度分别为 1∶2 5 6 0 (IFAT)和 1∶2 0 480 (ELISA)。福氏佐剂比氢氧化铝佐剂能更好地加强抗原的免疫原性。小鼠免?

关键词：重组杆状病毒汉滩病毒核蛋白免疫学特性

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人朊病毒多肽抗体的制备及应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第1期20卷 70-73页

作者：孙宪锋董小平张宝云周伟王长安赵同兴洪涛中国预防医学科学院病毒学研究所

目的　利用人工合成人朊病毒蛋白(PrP)多肽制备特异性抗PrP抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断。方法　根据PrP基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA及Westernblot鉴定。结果　ELISA检测表明... 详细信息

目的　利用人工合成人朊病毒蛋白(PrP)多肽制备特异性抗PrP抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断。方法　根据PrP基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA及Westernblot鉴定。结果　ELISA检测表明所制备的抗血清可同多种PrP发生阳性反应;Westernblot结果显示抗血清可与正常组织PrPc和病理组织的PrPsc反应;用蛋白酶K处理,可鉴别二者。此外,人、小鼠和兔的脑组织细胞膜提取物在Westernblot中显示一相对分子质量约30×103的条带,而相应肝、脾细胞膜提取物中无此条带出现。结论　所制备的PrP多肽抗血清可识别正常的PrPc和病理的PrPsc,合成肽抗原是制备抗朊病毒PrP抗体的一条有效的途径,可用于临床病例的检测。

关键词：朊病毒多肽抗体病毒制备

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带瘤小鼠后期NK细胞功能下降的原因 Ⅱ.带瘤小鼠腹水上清及血清抑制小鼠NK细胞功能

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中国医学科学院学报 1989年第6期11卷 446-448页

作者：傅驾宇黄祯祥陆虹中国预防医学科学院病毒学研究所

NK细胞是肿瘤免疫监视的第一道防线,提高癌症患者的NK细胞功能是肿瘤免疫治疗的一个重要问题。作者的研究表明,带瘤小鼠后期NK细胞功能降低并非因其NK细胞数量减少,而与NK细胞功能受阻有关。本实验研究带瘤小鼠血清及腹水上清对NK细胞... 详细信息

NK细胞是肿瘤免疫监视的第一道防线,提高癌症患者的NK细胞功能是肿瘤免疫治疗的一个重要问题。作者的研究表明,带瘤小鼠后期NK细胞功能降低并非因其NK细胞数量减少,而与NK细胞功能受阻有关。本实验研究带瘤小鼠血清及腹水上清对NK细胞效应的影响,以探讨其免疫功能降低的原因。

关键词： NK细胞活性肿瘤免疫

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巨细胞病毒冻干保存

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微生物学报 1989年第6期29卷 467-469页

作者：赵素兰蒋泓中国预防医学科学院病毒学研究所

巨细胞病毒(Cyromegaloviyus,CMY)是疱疹病毒科的成员,人类及其它一些哺乳动物易受该病毒感染,于怀孕、多次输血及器官移植时可激活,造成显性感染。孕妇感染对胎儿危害较大,是人类先天性畸形的重要病原之一。近年来,随着国内外医学界对... 详细信息

巨细胞病毒(Cyromegaloviyus,CMY)是疱疹病毒科的成员,人类及其它一些哺乳动物易受该病毒感染,于怀孕、多次输血及器官移植时可激活,造成显性感染。孕妇感染对胎儿危害较大,是人类先天性畸形的重要病原之一。近年来,随着国内外医学界对该病毒的广泛研究,要求提供毒种进行研究的单位日益增多,但由于该病毒在培养过程中繁殖缓慢而且不易保存,一般都沿用液氮为主要保存手段。

关键词：巨细胞病毒冻干保存

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环磷酰胺对乙脑灭活疫苗和减毒活疫苗免疫效果的比较

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中国医学科学院学报 1989年第5期11卷 317-321页

作者：房强陈伯权中国预防医学科学院病毒学研究所

用环磷酰胺分别抑制乙脑灭活疫苗和减毒活疫苗免疫小鼠的免疫系统,比较观察免疫抑制对两种疫苗免疫效果的影响.实验发现,灭活疫苗三次接种免疫抑制后其免疫保护率由100％降至20％;而减毒活疫苗2-8株和5-3株的免疫效果没受环磷酰胺的影响... 详细信息

用环磷酰胺分别抑制乙脑灭活疫苗和减毒活疫苗免疫小鼠的免疫系统,比较观察免疫抑制对两种疫苗免疫效果的影响.实验发现,灭活疫苗三次接种免疫抑制后其免疫保护率由100％降至20％;而减毒活疫苗2-8株和5-3株的免疫效果没受环磷酰胺的影响.经过了二次接种,其保护率仍为100％.实验结果证明了应用减毒活疫苗有一定的优越性.

关键词：乙型脑炎疫苗免疫抑制环磷酰胺

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用BPV转化灶做选择标记表达HBsAg的研究

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中国医学科学院学报 1989年第5期11卷 373-375页

作者：温晓燕中国预防医学科学院病毒学研究所

作者构建了pBMTHBR2质粒,此质粒含有鼠MT启动子、完整的HBsAg基因(preS和S基因)、SV_(40)的拼接信号和完整的BPV基因组。用磷酸钙沉淀技术把此质粒导入鼠C_(127)细胞内,用BPV转化灶做标记,获得了转化细胞克隆。实验表明,57%的克隆细胞... 详细信息

作者构建了pBMTHBR2质粒,此质粒含有鼠MT启动子、完整的HBsAg基因(preS和S基因)、SV_(40)的拼接信号和完整的BPV基因组。用磷酸钙沉淀技术把此质粒导入鼠C_(127)细胞内,用BPV转化灶做标记,获得了转化细胞克隆。实验表明,57%的克隆细胞系均能分泌HBsAg。

关键词： HBsAg 基因表达牛乳头瘤病毒

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人血小板生成素在重组痘苗病毒中的分泌表达

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第4期19卷 315-318页

作者：魏博杨洁刘文军张玉倩阮力中国预防医学科学院病毒学研究所遗传室

目的研究人血小板生成素（ｈＴＰＯ）在重组痘苗病毒中的表达。方法以ＰＣＲ法从人胚肝ｃＤＮＡ文库中克隆完整的ｈＴＰＯ基因，将所克隆基因插入痘苗病毒表达质粒ｐＪＳＡ１１７５ＳｍａⅠ位点，置于７．５Ｋ启动子控制之下，并构建在... 详细信息

目的研究人血小板生成素（ｈＴＰＯ）在重组痘苗病毒中的表达。方法以ＰＣＲ法从人胚肝ｃＤＮＡ文库中克隆完整的ｈＴＰＯ基因，将所克隆基因插入痘苗病毒表达质粒ｐＪＳＡ１１７５ＳｍａⅠ位点，置于７．５Ｋ启动子控制之下，并构建在３４９位氨基酸变异与非变异的两种ＴＰＯ重组痘苗病毒。以Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法和促ＴＰＯ依赖细胞增殖的活性测定，进行表达产物的检测。结果研究证实：ｈＴＰＯ可分泌性的表达于重组痘苗病毒感染细胞上清中，并具有特异性的生物学活性。结论ｈＴＰＯ在重组痘苗病毒中的表达为ＴＰＯ结构与功能研究提供了一条新途径。

关键词：人血小板生成素重组痘苗病毒基因表达

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甲型流感病毒H9N2亚型毒株血凝素基因特性的研究

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Chinese Medical Journal 2001年第1期114卷 109-110页

作者：郭元吉董婕王敏张烨郭俊峰吴昆昱中国预防医学科学院病毒学研究所流感研究室北京100052

目的　了解人甲型流感病毒H9N2亚型毒株的来源及从分子生物学角度来弄清不同宿主来源的H9N2亚型毒株间相互关系。方法　病毒在鸡胚中传代 ,从收获的尿囊液中提取病毒粒RNA ,通过逆转录合成cDNA。cDNA通过PCR进行扩增 ,接着PCR产物用纯... 详细信息

目的　了解人甲型流感病毒H9N2亚型毒株的来源及从分子生物学角度来弄清不同宿主来源的H9N2亚型毒株间相互关系。方法　病毒在鸡胚中传代 ,从收获的尿囊液中提取病毒粒RNA ,通过逆转录合成cDNA。cDNA通过PCR进行扩增 ,接着PCR产物用纯化试剂盒进行纯化。而后 ,RNA序列测定是采用双脱氧链末端终止和克隆法。最后用MegAlign( 1.0 3版 )和Editseq( 3.69版 )软件进行种系发生学分析。结果　从中国所分离出的H9N2亚型毒株。它们的HA1与HA2间裂解部位的氨基酸序列均为R S S R ,除一株鸽病毒其HA蛋白分子上仅含 7个潜在的糖基化位点外 ,而其余的均含 8个。 6株H9N2毒株HA蛋白分子上氨基酸序列有 2 - 16个不同 ,这些不同分布在 2 4个不同的位点上。近来在中国同时流行着多种HA基因系的H9N2亚型毒株。结论　人甲型流感病毒H9N2亚型毒株可能性最大来自鸡的H9N2毒株 ,而不是来源于鸽的H9N2毒株。但 ,H9N2毒株是否具有人传人能力 ,至今仍不清楚。在中国同时流行着多种HA基因系的H9N2毒株。

关键词：甲型流感病毒 H9N2亚型 HA基因特性

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