检索结果-内蒙古大学图书馆

山西医科大学学报 2023年第2期54卷 236-243页

作者：杜加亮武刚梅玉婷于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、... 详细信息

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性、工作范围和耐用性进行验证。结果该方法专属性良好,在组氨酸的保留时间范围内,无基质缓冲液组分和分析溶剂的干扰,且供试品和对照品的组氨酸保留时间偏差为0.45%,符合可接受标准(≤5%)。5个水平的加标溶液(70%,85%,100%,115%和130%)的回收率在93.0%~102.4%之间,且3次独立测定各水平浓度的变异系数均小于5%,符合准确度、线性和检测范围的验证要求(回收率在95%~105%之间,变异系数≤5%)。组氨酸浓度在2.170~4.033 mg/ml(相当于每次进样10.85~20.15μg)范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(R 2=0.995),且y轴截距的95%置信区间包含原点。同一份供试品溶液的6次独立测定浓度的变异系数为1.2%,符合重复性的可接受标准(≤5%);两名实验人员分别在3个工作日对同一份供试品溶液的18次独立测定的浓度的变异系数为3.1%,符合中间精密度的可接受标准(≤10%)。衍生后的待测品和对照品溶液分别在(5±3)℃密封瓶条件下在自动进样器中暂存24 h和26 h后的回收率分别为100.3%和100.2%,符合耐用性的可接受标准(95%~105%)。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测抗体药物中组氨酸含量的方法,该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高,可对其组氨酸进行质量控制。

关键词：单克隆抗体辅料组氨酸反相高效液相色谱质量控制

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2种型号微流成像分析仪测定微粒标准品及单抗样品的结果对比

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药物分析杂志 2021年第4期41卷 655-665页

作者：郭莎武刚崔永霏赵国凤刘忞博王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629 杨森研发中心药物发现、产品开发及临床供应部生物制品分析方法开发上海201210

目的:采用5种不同粒径的聚苯乙烯微粒标准品以及6种单克隆抗体(单抗)样品作为模型体系,对比2种微流成像仪(MFI 5100仪和MFI 5200仪)在粒径测量、计数结果和图像质量上的差异。方法:采用配备自动进样器的MFI 5100仪和MFI 5200仪对5、10... 详细信息

目的:采用5种不同粒径的聚苯乙烯微粒标准品以及6种单克隆抗体(单抗)样品作为模型体系,对比2种微流成像仪(MFI 5100仪和MFI 5200仪)在粒径测量、计数结果和图像质量上的差异。方法:采用配备自动进样器的MFI 5100仪和MFI 5200仪对5、10、15、25和50μm 5种聚苯乙烯微粒标准品进行分析,将所得数据与光阻法分析结果以及标示值进行比较;采用配备自动进样器的MFI 5100仪和MFI 5200仪对6种单抗样品进行分析,将所得数据与光阻法分析结果进行比较。结果:对于聚苯乙烯微粒标准品,MFI 5100仪和MFI 5200仪均具有较好的粒径测量和计数分析精密度,其粒径分析结果与标示值吻合,而计数分析结果则较标示值及光阻法测定值偏低。MFI 5200仪的图像更为清晰,但MFI 5200仪对微粒标准品的计数值略低于MFI 5100仪,这可能是2种仪器的结构参数或软件参数差异导致的。单抗样品的计数结果更为复杂,MFI 5100仪和MFI 5200仪2种仪器在不同粒径区间检测不同产品的计数结果不尽相同。光阻法对单抗的计数结果较微流成像法偏低。结论:MFI系列微流成像仪对特定粒子具有较好的测量重复性和粒径测定精度,但仪器之间存在计数差异,实际应用时如作为《中华人民共和国药典》不溶性微粒检查法的补充,应考虑仪器之间的差异并基于样品特性及测试目的对仪器方法设定合理的标准并对数据进行恰当解读。

关键词：微流成像法光阻法聚苯乙烯微粒标准品单克隆抗体稳定性研究微粒粒径测定计数

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阿达木单抗还原肽指纹图谱鉴别方法的建立与验证

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山西医科大学学报 2024年第2期55卷 214-227页

作者：武刚刘冰陈全姚倪永波郭璐韵梅玉婷于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 重庆市食品药品检验检测研究院生物制品室烟台大学药学院

目的建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法。方法阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarit... 详细信息

目的建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法。方法阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarity determining region, CDR)特征肽段。建立能够有效鉴别阿达木单抗肽指纹图谱的液相色谱分析方法,并进行方法学验证和应用评价。结果阿达木单抗经胰蛋白酶(Trypsin)和胞内蛋白酶(Lys-C)酶解后,CDR肽段均由高分辨质谱完成确证。贝伐珠单抗和利妥昔单抗用于评估方法专属性,结果表明该方法专属性强。选择Fc段保守氨基酸序列作为参比峰,以CDR特征肽段的相对保留时间(RRT)和相对峰面积(RPA)考察方法的变异程度。Trypsin酶解的样品连续5次进样各特征肽段RRT的RSD在0.008%~1.097%之间,RPA的RSD在1.212%~7.951%之间;中间精密度考察各特征肽段RRT的RSD在0.010%~0.985%之间,RPA的RSD在2.306%~10.939%之间;酶切比例为1∶35~1∶45,酶切时间为3.5~4.5 h时,RRT和RPA的RSD均符合方法耐用性要求。Lys-C酶解的样品方法学验证结果也表明其精密度、耐用性均表现良好。不同色谱柱对肽段的选择性、保留强弱、分离效果以及峰强度等具有一定差异。结论建立的基于Trypsin/Lys-C酶切、鉴定CDR特征肽段的高效液相肽指纹图谱鉴别方法可用于阿达木单抗的质量控制及批检验放行,同时可为企业建立单抗肽指纹图谱鉴别方法提供参考。

关键词：阿达木单抗肽指纹图谱互补决定区高效液相色谱法液质联用方法学验证

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高效阴离子色谱结合脉冲安培检测器分析单抗N糖谱的方法学联合验证

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中国新药杂志 2020年第14期29卷 1654-1659页

作者：王文波武刚于传飞张峰王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室

目的:对高效阴离子色谱结合脉冲安培检测器（high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD）方法检测单抗N糖谱进行多家实验室的联合验证。方法:依据ICH;2;1指导原则和《中华人民共和国药典》2015年版通则9101,开展方法学验证。评价指标包括:特异性、线性、准确性、精密性、定量限、范围和耐用性。结果:验证数据表明,该方法具有良好的特异性、准确性、精密性和耐用性。在200～800μg蛋白范围内具有良好的线性,r2> 0. 96,且回收率在80%～120%范围内。精密性评价结果显示,该方法整体的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）<10%。该方法的定量限为0. 082%,可对在0. 082%～79. 082%比例范围内的单个色谱峰进行准确定量分析。同时多个条件下的耐用性评价结果表明该方法具有耐用性,峰面积百分比RSD <10%,保留时间RSD <6%。结论:组织开展了基于HPAEC-PAD的检测单抗N糖谱的方法学联合验证,为《中华人民共和国药典》标准提高提供方法学验证依据。

关键词：单克隆抗体 N糖基化修饰方法学验证高效阴离子色谱

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单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶活性测定方法的建立

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山西医科大学学报 2023年第8期54卷 1133-1137页

作者：崔春博刘春雨于传飞付志浩杜加亮王文波王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立并验证一种检测单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶(recombinant human hyaluronidase,rHuPH20)活性的方法。方法利用浊度法建立单克隆抗体药物中rHuPH20活性的检测方法,并对该方法的专属性、线性、中间精密度、准确度、重复性... 详细信息

目的建立并验证一种检测单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶(recombinant human hyaluronidase,rHuPH20)活性的方法。方法利用浊度法建立单克隆抗体药物中rHuPH20活性的检测方法,并对该方法的专属性、线性、中间精密度、准确度、重复性进行验证。结果该方法专属性良好,空白和不添加rHuPH20的单克隆抗体药物的rHuPH20活性均<4 U/ml。在3.5~26.7 U/ml范围内,供试品rHuPH20理论活性和实测活性线性相关,决定系数R^(2)>0.97;中间精密度试验结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;各rHuPH20活性的平均值回收率在95%~105%之间,符合线性、中间精密度和准确度的验证要求。6次独立测定3批供试品rHuPH20活性的变异系数分别为6.56%,2.96%和4.10%,符合重复性的可接受标准(≤10%)。结论该方法各项指标均符合要求,可对单克隆抗体药物中rHuPH20活性进行质量控制。

关键词：单克隆抗体药物皮下注射重组人透明质酸酶活性浊度法质量控制

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以CGRP为靶点的单抗药物的电荷变异体表征研究

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山西医科大学学报 2024年第4期55卷 500-508页

作者：陈全姚杜加亮刘万卉王兰烟台大学药学院药物分析教研室烟台264005 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室药品监管科学全国重点实验室北京102629

目的对抗降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)单抗及其电荷变异体进行充分表征分析。方法以抗CGRP单抗为研究对象,利用离子交换色谱对抗CGRP单抗电荷变异体进行分离收集,再利用液质联用技术(LC-MS/MS)从分子量、轻... 详细信息

目的对抗降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)单抗及其电荷变异体进行充分表征分析。方法以抗CGRP单抗为研究对象,利用离子交换色谱对抗CGRP单抗电荷变异体进行分离收集,再利用液质联用技术(LC-MS/MS)从分子量、轻重链亚基以及翻译后修饰等方面对抗CGRP单抗和收集到的组分进行表征。结果利用离子交换色谱(IEC)仪器收集到抗CGRP单抗的电荷变异体分为主峰、酸性峰组(A1-A3)和碱性峰组(B1-B4)。质谱鉴定的抗CGRP单抗的相对分子质量为147103(主要糖型A2G1F,A2G0F);糖肽水平上的分析发现,含有N糖基化修饰的肽段序列为“TKPREEQFNSTYR”,糖基化位点为N296。酸碱变异体组分的N糖型修饰中A2G0F(>30%)和A2G1F(>35%)占比最大,并且酸性变异体中均存在唾液酸修饰;在所有组分中均检测到脱酰胺存在,酸性变异体脱酰胺比例较高;重链第109位,抗体骨架区FR区域上的色氨酸残基发生氧化的比例最高,并且酸性变异体发生氧化的比例总体高于碱性变异体;酸性变异体组分发生焦谷氨酸环化的比例远高于碱性变异体组分;抗CGRP单抗的赖氨酸(K)糖化位点比较丰富,轻链K188位点和重链K149、K245位点的糖化比例相对较高。结论通过表征分析发现,抗CGRP单抗酸性变异体的唾液酸修饰、氧化和焦谷氨酸环化发生比例高于碱性变异体,并且成功鉴定了各修饰发生的位点以及相对丰度。这些信息有助于评估是否需要进一步的药物强制降解研究和制定合理的的药物质量控制方法。

关键词：偏头痛降钙素基因相关肽电荷变异体质谱表征翻译后修饰

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单抗N糖分析系统适用性对照品的建立

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中国药学杂志 2020年第4期55卷 317-321页

作者：王文波武刚于传飞张峰王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京102629

目的建立单抗N糖分析方法的系统适用性对照品,并设定相应的系统适用性要求。方法利用液质联用(LC-MS)仪对N糖系统适用性对照品进行N糖型的表征鉴别,并对对照品进行稳定性评价。结合方法特点和验证数据,对系统适用性要求进行设定。结果... 详细信息

目的建立单抗N糖分析方法的系统适用性对照品,并设定相应的系统适用性要求。方法利用液质联用(LC-MS)仪对N糖系统适用性对照品进行N糖型的表征鉴别,并对对照品进行稳定性评价。结合方法特点和验证数据,对系统适用性要求进行设定。结果建立的系统适用性对照品具有良好的稳定性,其糖型涵盖了单抗主要的N糖型种类。针对3种药典拟收录的单抗N糖分析方法,设定了以下系统适用性要求,包括:图谱与典型图谱相似、G1F(1,6)和G1F(1,3)的分离度应满足具体要求、G0F%应在规定的范围内、G0F保留时间的RSD应≤4%。结论建立了单抗N糖系统适用性对照品,可配合3种2020年版《中国药典》拟收录的N糖分析方法使用。

关键词：单克隆抗体 N糖基化修饰《中国药典》系统适用性

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抗GD2单克隆抗体药物的质量控制

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山西医科大学学报 2022年第9期53卷 1176-1183页

作者：杜加亮于传飞王文波武刚崔永霏郭璐韵杨雅岚俞小娟李萌王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的研究并建立针对抗双唾液酸神经节苷脂(disialoganglioside,GD2)单克隆抗体的关键质量属性质控策略。方法采用基于报告基因的抗体依赖性细胞介导的细胞吞噬(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)效应以及基于细胞增... 详细信息

目的研究并建立针对抗双唾液酸神经节苷脂(disialoganglioside,GD2)单克隆抗体的关键质量属性质控策略。方法采用基于报告基因的抗体依赖性细胞介导的细胞吞噬(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)效应以及基于细胞增殖抑制的补体依赖性细胞毒性(complement-dependent cytotoxicity,CDC)作用测定生物学活性。分别采用ELISA法和SPR-Biacore法测定GD2和CD16的结合活性。采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)测定单抗纯度。运用毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing electrophoresis,cIEF)测定电荷异质性。运用基于荧光检测器的超高效液相色谱法(UPLC)分析抗GD2单抗的糖基化(岩藻糖和半乳糖)。结果生物学活性中ADCP的半数最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))值为(24.24±0.57)ng/ml,CDC的EC_(50)值为(0.49±0.003)ng/ml。GD2结合活性的EC_(50)值为(17.53±2.14)ng/ml,CD16结合活性的EC_(50)值为(99.40±1.43)nmol/L。非还原CE-SDS主峰面积百分比为(98.61±0.17)%,还原CE-SDS重链(HC)和轻链(LC)的峰面积百分比之和为(97.39±0.15)%,SE-HPLC主峰峰面积百分比为(98.32±0.01)%。cIEF分析中峰“l”、峰“m”和峰“n”的峰面积百分比分别为(14.88±0.15)%,(37.18±0.37)%和(38.67±0.50)%。糖基化分析中岩藻糖基化单糖合计所占比例为(97.41±0.04)%,半乳糖基化单糖合计所占比例为(18.93±0.07)%。结论针对抗GD2单抗的关键质量属性,研究并建立了相应的质量控制策略,以确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制提供参考依据。

关键词：双唾液酸神经节苷脂单克隆抗体药物质量控制生物学活性结合活性

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重组抗IL-36受体单克隆抗体药物的质量控制研究

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山西医科大学学报 2022年第10期53卷 1331-1337页

作者：杜加亮于传飞王文波武刚崔永霏郭璐韵杨雅岚俞小娟李萌徐刚领刘春雨付志浩郭莎王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的研究并建立针对白细胞介素-36受体单克隆抗体(抗IL-36R单抗)的关键质量属性质控方法。方法采用基于胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱技术(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)的肽图法对抗IL-36R单抗进... 详细信息

目的研究并建立针对白细胞介素-36受体单克隆抗体(抗IL-36R单抗)的关键质量属性质控方法。方法采用基于胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱技术(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)的肽图法对抗IL-36R单抗进行特异性鉴别;采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)法、分子排阻(size exclusion,SE)-HPLC法测定抗IL-36R单抗的纯度;采用阳离子交换(cation exchange,CEX)-HPLC法测定抗IL-36R单抗的电荷异质性;采用亲水相互作用(hydrophilic interaction,HILIC)-HPLC法进行抗IL-36R单抗的寡糖图谱分析;采用IL-36R结合抑制法测定抗IL-36R单抗的生物学活性。结果利用基于胰蛋白酶酶切和RP-HPLC的肽图法可以获得具有特征性的抗IL-36R单抗色谱图,发挥了特异性的鉴别作用。非还原CE-SDS主峰面积百分比为(98.05±0.17)%,还原CE-SDS重链(HC)和轻链(LC)的峰面积百分比之和为(98.33±0.05)%。SE-HPLC单体和高分子量物质峰面积百分比分别为(99.53±0.01)%和(0.43±0.01)%。CEX-HPLC主峰、酸性峰和碱性峰的峰面积百分比分别为(61.47±0.79)%,(35.33±0.72)%和(3.19±0.12)%。HILIC-HPLC分析中含量最高的特征性寡糖的峰面积百分比为(63.68±0.08)%。抗IL-36R单抗相对于参比品的相对生物学活性为(95.87±6.10)%。结论针对抗IL-36R单抗的关键质量属性,研究并建立了相应的质量控制方法,以确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供参考依据。

关键词： IL-36R 银屑病单克隆抗体生物学活性肽图

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基于实验设计的抗PD-1/PD-L1单抗报告基因抗体依赖细胞介导的细胞毒效应生物学活性优化及验证方法的建立

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中国药学杂志 2019年第24期54卷 2010-2017页

作者：刘春雨于传飞崔永霏肖启东黄璟王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

目的利用实验设计(design of experiment,DOE)建立抗程序性死亡因子1(programmed cell death 1,PD-1)及其配体(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)单抗基于报告基因的抗体依赖细胞介导的细胞毒效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性优化及验证方法。方法利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,分别以293FT-PD-1细胞系和CHO-PD-L1细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(Bright GloTM Luciferase Assay system)建立抗PD-1/PD-L1单抗的ADCC生物学活性检测方法,并运用DOE方法进行试验优化和方法学验证。结果抗PD-1/PD-L1单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,方法经优化后确定抗体量效范围分别为10 000~4. 833 ng·m L^-1和2 000~0. 488 ng·m L^-1,效靶比(effect target ratio,E∶T)为分别为6∶1和3∶1,诱导时间均为20 h。该方法具有良好的专属性;抗PD-1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(51. 74±2. 22)%、(77. 12±3. 14)%、(118. 71±2. 83)%和(156. 20±12. 99)%;对应的回收率分别为(103. 49±4. 44)%、(102. 83±4. 19)%、(94. 96±2. 26)%和(104. 14±8. 66)%,抗PD-L1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(54. 32±4. 75)%、(75. 24±4. 25)%、(127. 40±2. 43)%和(156. 82±3. 27)%;对应的回收率分别为(108. 64±9. 51)%、(100. 33±5. 67)%、(101. 92±1. 94)%和(104. 55±2. 18)%,上述结果的RSD均小于10%。结论本实验利用DOE设计成功建立基于报告基因的抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的优化及验证方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的评价方法。

关键词：实验设计抗PD-1/PD-L1单抗单克隆抗体抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用生物学活性报告基因优化验证

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