检索结果-内蒙古大学图书馆

中国新药杂志 2015年第20期24卷 2312-2316+2345页

作者：王文波王兰王馨于传飞张峰刘春雨陈伟李萌高凯中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室

目的:利用毛细管电泳对原研抗CD20人鼠嵌合单抗和4个生物类似药的N糖谱进行分析。方法:对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸(APTS)染料进行标记,通过毛细管电泳对N糖链进行分析。结果:7批原研CD20单... 详细信息

目的:利用毛细管电泳对原研抗CD20人鼠嵌合单抗和4个生物类似药的N糖谱进行分析。方法:对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸(APTS)染料进行标记,通过毛细管电泳对N糖链进行分析。结果:7批原研CD20单抗N糖糖型和比例基本一致。4个生物类似药虽然在糖型上与原研单抗一致,但在比例上存在不同程度的差异。SBP-C4中G0F比例显著高于原研和其他生物类似药,而G1F和G2F比例显著较低。SBP-C1,C2和C3中分别含半乳糖修饰和岩藻糖修饰的糖型比例在(原研单抗±3SD)范围内,SBP-C4半乳糖修饰糖型比例明显较低,岩藻糖修饰的糖型比例较原研单抗略高。SBP-C1和C2的CDC活性与原研单抗(RBP-1)基本一致,SBP-C3的CDC活性略高于原研单抗,SBP-C4的CDC活性显著较低。4个生物类似药候选药物的ADCC活性与原研单抗(RBP-1)基本一致。结论:在对单抗的质量控制中,尤其是对于具有Fc功能的单抗,应重视N糖链检测的重要性。

关键词：单克隆抗体 N糖基化修饰毛细管电泳生物类似药

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抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1质控方法的建立

抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1质控方法的建立

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《中国药学杂志》岛津杯第十二届全国药物分析优秀论文评选交流会暨第二届药物分析国际论坛

作者：李萌于传飞王文波朱磊刘春雨张峰陈伟王兰高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugates,ADCs)抗HER2单抗-MCC-DM1 (T-DM1)的质控方法。方法：利用人乳腺癌BT-474细胞增殖抑制实验测定T-DM1的生物学活性;利用BIAcore技术测定其结合常数(KD);利用HER2抗原和抗DM1抗体双夹心... 详细信息

目的：建立抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugates,ADCs)抗HER2单抗-MCC-DM1 (T-DM1)的质控方法。方法：利用人乳腺癌BT-474细胞增殖抑制实验测定T-DM1的生物学活性;利用BIAcore技术测定其结合常数(KD);利用HER2抗原和抗DM1抗体双夹心酶联免疫法(ELISA)对T-DM1进行鉴别;利用液质联用法和紫外分光光度法测定药物抗体偶联比(DAR);利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定游离药物DM1的含量;利用毛细管凝胶电泳(CE-SDS)和分子排阻色谱(SE-HPLC)分析纯度;利用成像毛细管等点聚焦电泳(iCIEF)分析电荷异质性,其他各项指标均符合现行版《中国药典》的要求及其他相关要求。

关键词：抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1 药物抗体偶联比质量控制

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重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立

重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立

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2015年中国药学大会暨第十五届中国药师周

作者：王文波王兰于传飞张峰刘春雨李萌陈伟高凯中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室

目的重组抗埃博拉病毒抗体是由三种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本文分别对三种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC... 详细信息

目的重组抗埃博拉病毒抗体是由三种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本文分别对三种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC测定纯度;iCIEF法测定等电点及电荷异质性;切糖后对N-糖进行2AB标记,用正向色谱结合质谱对其糖型和含岩藻糖修饰糖型比例分析;利用高效液相色谱法测定其聚山梨酯20含量。结果:三种重组抗埃博拉病毒单抗结合活性的EC为12.53±1.62 ng·mL、11.10±0.62 ng·mL、6.09±0.35 ng·mL;LC-MS肽图法测定一级序列覆盖率均大于95%;非还原CE-SDS主峰纯度分别为94.41±0.05%、95.58±0.17%、96.11±0.05%;还原CE-SDS重链和轻链纯度之和分别为98.19±0.06%、97.97±0.03%、98.57±0.03%;SE-HPLC主峰分别为99.59±0.01%、99.56±0.01%、99.74±0.01%;iCIEF分析主峰等电点为8.70±0.01、8.26±0.01、8.85±0.01;三种单抗聚山梨酯20含量分别为0.34±0.00μg·mL、0.35±0.00μg·mL、0.35±0.01μg·mL;LC-MS法对N糖谱分析相对灵敏,三种单抗含岩藻糖糖型比例均小于0.5%;结论:本文的质控方法研究运用了现代化质控理念,建立的质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为突发状况下埃博拉疫情防控提供了用药储备的技术支持,也为其他组合抗体的质量控制积累了经验。

关键词：重组抗埃博拉病毒单抗质量控制

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抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定

抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定

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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：李萌于传飞王兰张峰刘春雨王文波郭玮高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的用两种方法即液质联用和紫外分光光度计对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定。方法采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析;采用紫外分光光度计在252及280nm处进行吸光值测量。结果两种方法测得的药物抗体偶联... 详细信息

目的用两种方法即液质联用和紫外分光光度计对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定。方法采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析;采用紫外分光光度计在252及280nm处进行吸光值测量。结果两种方法测得的药物抗体偶联比分别为3.21及3.25。结论两种方法测得的结果相似,都可用于抗体药物偶联物的药物抗体偶联比分析。

关键词：抗体药物偶联物药物抗体偶联比液质联用紫外分光光度计

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TNFR:Fc融合蛋白生物类似药质量可比性初步研究

TNFR:Fc融合蛋白生物类似药质量可比性初步研究

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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：王光裕高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

近年来,许多生物技术药专利陆续到期,国内外掀起了生物类似药物的研发热潮,如何对这些生物类似药进行有效的质量可比性研究显得尤为重要。相对于小分子药物,抗体及相关生物治疗药物分子量大,功能域多,如何界定类似药和参比药的一致性标... 详细信息

近年来,许多生物技术药专利陆续到期,国内外掀起了生物类似药物的研发热潮,如何对这些生物类似药进行有效的质量可比性研究显得尤为重要。相对于小分子药物,抗体及相关生物治疗药物分子量大,功能域多,如何界定类似药和参比药的一致性标准对于产品质量放行和头对头的研究是一个值得探讨的问题。本研究以结构复杂的重组人肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白为材料,依照FDA生物类似药指南进行可比性研究。实验选取原研药(RBP)及国内3个类似药或衍生物(SBP)作为实验材料,首先在蛋白一级结构、二级结构、唾液酸修饰、蛋白纯度、电荷异质性等方面进行了结构表征分析,其次在细胞毒中和活性、结合活性等方面进行了功能分析,最后还进行了药代动力学的初步比较,以期对大分子生物类似药的质量可比性研究提供参考和数据支持。在进行结构表征研究时,首先对氨基酸序列进行了鉴定,和RBP相比,SBP分为三类:SBP1与RBP序列一致;SBP2在TNFR段67/70位发生突变;SBP3在Fc段376/378位发生突变。二级结构比较时,各SBP与RBP无显著差异。SBP1、SBP2与SBP3的唾液酸含量均低于RBP。功能相关分析结果显示:SBP1的体外细胞毒中和活性、TNF-α亲和力与体内半衰期均与RBP无显著差别;SBP2的3种功能均显著高于RBP;对于SBP3,虽然在Fc段发生氨基酸突变,但细胞毒中和活性、亲和力与体内半衰期与RBP无显著差别。因此,SBP1应该可以被定义为生物类似药,SBP2在一定程度上可以被定义为一种新药;而SBP3由于氨基酸序列与RBP不同,按照EMA的标准,应该是新药,然而本实验的结果显示,除氨基酸序列差异外,SBP3在功能上与RBP并无显著差别,该产品在国内上市是否可以作为生物类似药还有待于非临床与临床实验的进一步研究。通过TNFR:Fc融合蛋白国内类似药与原研药比较,初步进行了该制品的质量可比性研究,建立了相关的分析方法和评价手段,探讨了在保证产品安全有效质量可控的前提下,产品存在非关键质量属性差异时是否可以列为生物类似药的问题。

关键词：抗体药物融合蛋白质量控制糖基化

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成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析

成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析

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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：于传飞郭玮王兰张峰刘春雨王文波李萌王军志高凯中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性。方法应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对两种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析。结果羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证... 详细信息

目的采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性。方法应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对两种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析。结果羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性引起;羧肽酶B处理和/或N-糖苷酶处理前后的抗体2成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性和N-糖的唾液酸修饰。结论采用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,可较好的分析单克隆抗体产品的电荷异质性;并且配合合适的酶切处理,进而可判断单克隆抗体产品主要电荷异质性的来源,为保证单克隆抗体产品技术药物生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。

关键词：单克隆抗体电荷异质性成像毛细管等点聚焦末端赖氨酸不均一性唾液酸修饰

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CD22单抗效应子功能的初步探究

CD22单抗效应子功能的初步探究

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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：王光裕高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

CD22单抗属于IgG1型抗体,用于治疗非霍奇淋巴瘤。该抗体结合靶细胞后会迅速内化,这使得用传统的肿瘤细胞增殖抑制法无法通过直接作用机理真实反映抗体作用机制。国外采用的活性检测方法是将CD22单抗包被到细胞板上后加入靶细胞,通过IgM... 详细信息

CD22单抗属于IgG1型抗体,用于治疗非霍奇淋巴瘤。该抗体结合靶细胞后会迅速内化,这使得用传统的肿瘤细胞增殖抑制法无法通过直接作用机理真实反映抗体作用机制。国外采用的活性检测方法是将CD22单抗包被到细胞板上后加入靶细胞,通过IgM抗体对B细胞受体的特殊致敏性来介导杀伤,但是该过程并未加入补体或杀伤细胞,不能客观有效模拟抗体作用机制和反映Fc段效应子是否存在功能。基于以上背景,本课题下篇采用膜表面表达CD22单抗独特型抗体的靶细胞株(人工构建,CD22单抗结合后不会内化),首先利用该细胞证明CD22单抗具有CDC和ADCC活性,随后用多种方法检验了抗体的脱糖效果,通过糖基化去除,进一步验证单抗Fab段结合能力与Fc段效应子生物学功能。实验分别通过CD20单抗与CD147单抗作为阳性对照,证明CD22单抗CDC和ADCC的活性检测系统可以正常工作。在CDC实验中,对补体添加顺序和靶细胞种类进行了优化;ADCC实验中,对细胞浓度,抗体稀释梯度进行了优化。在对切糖效果验证时发现,实验所用的酶切条件可以完全将糖基切除。在探究糖基化对功能的影响时,用两种方法(竞争流式细胞法和Biacore)比较了脱糖前后的Fab段结合力,发现切糖前后结合力并无显著差异。随后依据优化后的活性检测方法,选取合适的抗体剂量点,比较了脱糖前后的ADCC和CDC活性,发现脱糖后两种效应均显著降低,该结果证明了CD22单抗Fc效应子段具有CDC和ADCC功能。目前CD22单抗质量研究中并未纳入CDC与ADCC评价部分,所以该部分研究对于该抗体的质量评价具有重要意义。本研究对于存在迅速内化现象的单抗,在没有合适活性测定方法的情况下,本课题为评价Fc效应子CDC和ADCC功能提供了参考。通过以上两部分工作,本课题为抗体及抗体相关生物治疗药物质量评价指南的制定提供了参考和数据支持。

关键词：抗体药物融合蛋白质量控制糖基化

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TNFR:Fc融合蛋白生物类似药质量可比性初步研究

TNFR:Fc融合蛋白生物类似药质量可比性初步研究

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2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会

作者：王光裕高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

本研究以国外TNFR：Fc融合蛋白原研药及国内生产的类似药（1个与原研药序列一致，1个在TNFR段突变，1个在Fc段突变）作为实验材料，通过从蛋白结构、糖基化修饰、结合能力、生物学活性以及体内半衰期等多个方面的对比分析，找出结构和... 详细信息

本研究以国外TNFR：Fc融合蛋白原研药及国内生产的类似药（1个与原研药序列一致，1个在TNFR段突变，1个在Fc段突变）作为实验材料，通过从蛋白结构、糖基化修饰、结合能力、生物学活性以及体内半衰期等多个方面的对比分析，找出结构和功能之间的关系，探究结构属性对理化性质和生物学功能的影响，同时参照WHO、EMA、FDA、ICH相关法规之南，从生物治疗药物可比性研究的角度进行着重探讨，以期为生物类似药品的界定和可比性研究提供参考和数据支持。

关键词：抗肿瘤药物融合蛋白质量控制糖基化

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成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析

成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析

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2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会

作者：于传飞郭玮王兰张峰刘春雨王文波李萌王军志高凯中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性.方法:应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对两种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析.结果:羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证... 详细信息

目的:采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性.方法:应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对两种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析.结果:羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性引起;羧肽酶B处理和/或N-糖苷酶处理前后的抗体2成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性和N-糖的唾液酸修饰.结论:采用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,可较好的分析单克隆抗体产品的电荷异质性;并且配合合适的酶切处理,进而可判断单克隆抗体产品主要电荷异质性的来源,为保证单克隆抗体产品技术药物生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段.

关键词：单克隆抗体制品电荷异质性成像毛细管等点聚焦电泳法质量控制

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抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定

抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定

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2013中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：李萌于传飞王兰张峰刘春雨王文波郭玮高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京 100050

目的：用两种方法即液质联用和紫外分光光度计对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定.方法：采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析;采用紫外分光光度计在252及280nm处进行吸光值测量.结果：两种方法测得的药物抗体... 详细信息

目的：用两种方法即液质联用和紫外分光光度计对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定.方法：采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析;采用紫外分光光度计在252及280nm处进行吸光值测量.结果：两种方法测得的药物抗体偶联比分别为3.21及3.25.结论：两种方法测得的结果相似,都可用于抗体药物偶联物的药物抗体偶联比分析.

关键词：抗体药物偶联物比例测定液质联用紫外分光光度计

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