检索结果-内蒙古大学图书馆

山西医科大学学报 2025年第3期56卷 290-293页

作者：崔春博武刚俞小娟刘春雨李萌倪永波崔永霏于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立并验证一种测定单克隆抗体药物中微量蛋白质含量的方法。方法采用高效液相色谱-荧光检测器(high performance liquid chromatography-fluorescence detector,HPLC-FLD)法建立单抗药物中蛋白质含量的检测方法,并对方法的专属性... 详细信息

目的建立并验证一种测定单克隆抗体药物中微量蛋白质含量的方法。方法采用高效液相色谱-荧光检测器(high performance liquid chromatography-fluorescence detector,HPLC-FLD)法建立单抗药物中蛋白质含量的检测方法,并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确度和耐用性进行验证。结果该方法专属性强。在250~750 ng进样量范围内,蛋白质进样量与峰面积呈良好的线性关系,决定系数R^(2)>0.99。两名实验人员分别在3个工作日对同一份供试品溶液进行18次独立测定,其蛋白质含量的变异系数为3.03%,蛋白质含量验证溶液(550 ng)的回收率在90%~110%内。6次蛋白质含量验证溶液(550 ng)蛋白质含量测定值的RSD为2.88%。不同色谱柱检测蛋白质含量验证溶液(550 ng)的变异系数为1.86%。结论成功建立了检测单克隆抗体药物中微量蛋白质含量的高效液相色谱法,该方法专属性强、重复性好、精密度及准确度高,可对单克隆抗体药物中微量蛋白质含量进行质量控制。

关键词：高效液相色谱荧光检测器单克隆抗体药物微量含量测定质量控制

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HPLC法同时测定单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇的含量

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山西医科大学学报 2024年第11期55卷 1419-1428页

作者：崔春博杜加亮武刚李萌徐刚领高旭俞小娟倪永波于传飞中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 北京市药品检验研究院

目的建立同时检测单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的方法。方法采用伯乐碳水化合物快速分析高效液相色谱柱(7.8 mm×100 mm,9μm)进行海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的测定,以超纯水为流动相,流速为0.5 mL/min,柱温为65℃,检... 详细信息

目的建立同时检测单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的方法。方法采用伯乐碳水化合物快速分析高效液相色谱柱(7.8 mm×100 mm,9μm)进行海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的测定,以超纯水为流动相,流速为0.5 mL/min,柱温为65℃,检测器为示差折光检测器。结果该方法专属性良好,在海藻糖、甘露醇和山梨醇的保留时间范围内,无分析溶剂的干扰。海藻糖、甘露醇和山梨醇含量在0.16~1.60 mg/mL范围内,进样量与峰面积均呈良好的线性关系(R^(2)>0.99)。对单抗药物同时加标0.4 mg/mL海藻糖、0.4 mg/mL甘露醇和0.4 mg/mL山梨醇的样品进行6次独立测定,其海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的变异系数分别为1.52%,2.54%和2.33%;对单抗药物同时加标0.8 mg/mL海藻糖、0.8 mg/mL甘露醇和0.8 mg/mL山梨醇的样品进行6次独立测定,其海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的变异系数分别为0.69%,0.27%和0.18%;对单抗药物同时加标1.2 mg/mL海藻糖、1.2 mg/mL甘露醇和1.2 mg/mL山梨醇的样品进行6次独立测定,其海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的变异系数分别为3.45%,6.55%和2.47%;以上结果均符合重复性的可接受标准(≤10%)。两名实验人员分别在3个工作日对上述3种加标溶液的海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的样品共进行18次测定,其海藻糖含量的变异系数分别为2.08%,2.82%和10.87%;甘露醇含量的变异系数分别为2.24%,1.99%和2.53%;山梨醇含量的变异系数分别为2.54%,1.62%和1.32%;以上结果符合中间精密度的可接受标准(≤15%)。上述3种加标溶液的回收率均在97.88%~101.39%之间,符合准确度的验证要求(90%~110%);上述3种加标溶液在(5±3)℃密封瓶条件下在自动进样器中暂存24 h后海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的平均回收率均在93.24%~101.49%之间,符合耐用性的可接受标准(90%~110%)。结论成功建立了同时检测单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的高效液相色谱法,该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高,可用于单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇的质量控制。

关键词：单克隆抗体药物海藻糖甘露醇山梨醇高效液相色谱法辅料质量控制

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手持拉曼光谱仪在抗体类药物鉴别中的应用研究

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中国药事 2023年第10期37卷 1160-1171页

作者：段茂芹于传飞付志浩梅玉婷王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的:基于主成分分析(PCA)算法的Trutools模式,利用手持拉曼光谱仪建立快速鉴别抗体类药物的方法。方法:通过选取抗PD-1抗体、抗VEGF抗体、抗Her-2抗体,采集拉曼光谱数据,建立数据模型,分别对3种抗体进行鉴别。选择其中一种抗PD-1抗体,... 详细信息

目的:基于主成分分析(PCA)算法的Trutools模式,利用手持拉曼光谱仪建立快速鉴别抗体类药物的方法。方法:通过选取抗PD-1抗体、抗VEGF抗体、抗Her-2抗体,采集拉曼光谱数据,建立数据模型,分别对3种抗体进行鉴别。选择其中一种抗PD-1抗体,采用加热和光照两种条件对其进行加速降解处理,利用手持拉曼光谱仪对加速降解的抗体进行检测,研究所建方法能否检出加速降解的抗体。并通过分子排阻色谱(SEC-HPLC)、离子交换色谱(IEC-HPLC)及竞争结合酶联免疫吸附测定(ELISA)法对加速降解的抗体进行检测,与拉曼光谱检测结果进行比较。结果:通过建立的拉曼光谱数据模型可以鉴别3种不同类型的抗体,且拉曼光谱可以鉴别加速降解后的抗PD-1抗体。结论:手持拉曼光谱仪可以用来快速鉴别抗体类药物。本研究首次将手持拉曼光谱仪引入到抗体药物大分子检测中,为抗体类药物的现场快速鉴别及打假工作提供了新的工具与方法。

关键词：主成分分析(PCA)算法拉曼光谱抗体分子排阻色谱离子交换色谱竞争结合酶联免疫吸附测定法鉴别

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抗HER2单抗注射液(皮下注射)的质量控制

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山西医科大学学报 2023年第5期54卷 643-651页

作者：杜加亮于传飞王文波武刚崔永霏郭璐韵梅玉婷俞小娟李萌王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的研究并建立针对抗HER2单抗注射液(皮下注射)的关键质量属性质控方法。方法分别采用胰蛋白酶或Lys-C酶切结合反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)的肽图分析法进行抗HER2单抗的... 详细信息

目的研究并建立针对抗HER2单抗注射液(皮下注射)的关键质量属性质控方法。方法分别采用胰蛋白酶或Lys-C酶切结合反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)的肽图分析法进行抗HER2单抗的特异性鉴别。采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate, CE-SDS)和分子排阻色谱(size-exclusion chromatography, SEC)法进行纯度控制。采用阳离子交换色谱(ion-exchange chromatography, IEC)法进行电荷异质性分析。采用亲水相互作用液相色谱(hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC)法进行寡糖图谱分析。采用酶活力测定法分析透明质酸酶含量。采用BT474细胞增殖抑制法测定生物学活性。采用紫外分光光度法测定蛋白含量。结果两种肽图检测法均获得特征图谱,对抗HER2单抗发挥很好的特异性鉴别作用。还原CE-SDS的重链和轻链峰面积之和百分比为(98.63±0.14)%,非还原CE-SDS主峰面积百分比为(98.20±0.11)%,前峰面积百分比总和为(1.47±0.04)%。SEC测得的单体峰面积百分比为(99.82±0.05)%。IEC测定的主要活性成分(峰3*+峰3)以及产品相关杂质(峰4)的峰面积百分比分别为(75.01±0.04)%和(6.72±0.03)%。寡糖图谱分析aFuc、G2和Man5的面积百分比分别为(9.20±0.01)%,(6.33±0.02)%和(1.92±0.01)%。透明质酸酶含量为(2 021.02±238.41)U/ml。供试品相对于参比品的生物学活性为(95.87±6.10)%,蛋白含量为(115.60±0.45)mg/ml。结论针对抗HER2单抗注射液(皮下注射)关键质量属性的质控方法的建立可以有效确保该类产品的安全性和有效性。

关键词：人表皮生长因子受体2 单克隆抗体乳腺癌皮下注射透明质酸酶肽图分析

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狂犬病病毒中和单抗表位鉴定和中和广谱性评价研究进展

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中国药事 2023年第10期37卷 1172-1179页

作者：王文波于传飞王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的:对狂犬病病毒(RABV)中和单抗的研发进展及其表位和中和广谱性研究评价进行综述,为行业提供参考。方法:通过文献检索,对国内外开展的狂犬病病毒中和单抗研究进行梳理和汇总。结果与结论:中和抗体在狂犬病暴露后预防中发挥着重要的作... 详细信息

目的:对狂犬病病毒(RABV)中和单抗的研发进展及其表位和中和广谱性研究评价进行综述,为行业提供参考。方法:通过文献检索,对国内外开展的狂犬病病毒中和单抗研究进行梳理和汇总。结果与结论:中和抗体在狂犬病暴露后预防中发挥着重要的作用,目前国内外已有多个RABV单抗品种上市并有多个品种处于临床评价阶段。RABV具有较高的突变频率且感染发病后致死率极高,为了最大程度地中和自然流行的RABV病毒株,以防止感染后狂犬病的发生,在单抗候选药物研发时应对其表位和广谱性进行充分的研究评价。

关键词：单抗狂犬病病毒表位鉴定中和广谱性

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反相高效液相色谱法测定抗体药物中组氨酸的含量

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山西医科大学学报 2023年第2期54卷 236-243页

作者：杜加亮武刚梅玉婷于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、... 详细信息

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性、工作范围和耐用性进行验证。结果该方法专属性良好,在组氨酸的保留时间范围内,无基质缓冲液组分和分析溶剂的干扰,且供试品和对照品的组氨酸保留时间偏差为0.45%,符合可接受标准(≤5%)。5个水平的加标溶液(70%,85%,100%,115%和130%)的回收率在93.0%~102.4%之间,且3次独立测定各水平浓度的变异系数均小于5%,符合准确度、线性和检测范围的验证要求(回收率在95%~105%之间,变异系数≤5%)。组氨酸浓度在2.170~4.033 mg/ml(相当于每次进样10.85~20.15μg)范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(R 2=0.995),且y轴截距的95%置信区间包含原点。同一份供试品溶液的6次独立测定浓度的变异系数为1.2%,符合重复性的可接受标准(≤5%);两名实验人员分别在3个工作日对同一份供试品溶液的18次独立测定的浓度的变异系数为3.1%,符合中间精密度的可接受标准(≤10%)。衍生后的待测品和对照品溶液分别在(5±3)℃密封瓶条件下在自动进样器中暂存24 h和26 h后的回收率分别为100.3%和100.2%,符合耐用性的可接受标准(95%~105%)。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测抗体药物中组氨酸含量的方法,该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高,可对其组氨酸进行质量控制。

关键词：单克隆抗体辅料组氨酸反相高效液相色谱质量控制

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阿达木单抗还原肽指纹图谱鉴别方法的建立与验证

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山西医科大学学报 2024年第2期55卷 214-227页

作者：武刚刘冰陈全姚倪永波郭璐韵梅玉婷于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 重庆市食品药品检验检测研究院生物制品室烟台大学药学院

目的建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法。方法阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarit... 详细信息

目的建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法。方法阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarity determining region, CDR)特征肽段。建立能够有效鉴别阿达木单抗肽指纹图谱的液相色谱分析方法,并进行方法学验证和应用评价。结果阿达木单抗经胰蛋白酶(Trypsin)和胞内蛋白酶(Lys-C)酶解后,CDR肽段均由高分辨质谱完成确证。贝伐珠单抗和利妥昔单抗用于评估方法专属性,结果表明该方法专属性强。选择Fc段保守氨基酸序列作为参比峰,以CDR特征肽段的相对保留时间(RRT)和相对峰面积(RPA)考察方法的变异程度。Trypsin酶解的样品连续5次进样各特征肽段RRT的RSD在0.008%~1.097%之间,RPA的RSD在1.212%~7.951%之间;中间精密度考察各特征肽段RRT的RSD在0.010%~0.985%之间,RPA的RSD在2.306%~10.939%之间;酶切比例为1∶35~1∶45,酶切时间为3.5~4.5 h时,RRT和RPA的RSD均符合方法耐用性要求。Lys-C酶解的样品方法学验证结果也表明其精密度、耐用性均表现良好。不同色谱柱对肽段的选择性、保留强弱、分离效果以及峰强度等具有一定差异。结论建立的基于Trypsin/Lys-C酶切、鉴定CDR特征肽段的高效液相肽指纹图谱鉴别方法可用于阿达木单抗的质量控制及批检验放行,同时可为企业建立单抗肽指纹图谱鉴别方法提供参考。

关键词：阿达木单抗肽指纹图谱互补决定区高效液相色谱法液质联用方法学验证

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单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶活性测定方法的建立

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山西医科大学学报 2023年第8期54卷 1133-1137页

作者：崔春博刘春雨于传飞付志浩杜加亮王文波王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立并验证一种检测单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶(recombinant human hyaluronidase,rHuPH20)活性的方法。方法利用浊度法建立单克隆抗体药物中rHuPH20活性的检测方法,并对该方法的专属性、线性、中间精密度、准确度、重复性... 详细信息

目的建立并验证一种检测单克隆抗体药物中重组人透明质酸酶(recombinant human hyaluronidase,rHuPH20)活性的方法。方法利用浊度法建立单克隆抗体药物中rHuPH20活性的检测方法,并对该方法的专属性、线性、中间精密度、准确度、重复性进行验证。结果该方法专属性良好,空白和不添加rHuPH20的单克隆抗体药物的rHuPH20活性均<4 U/ml。在3.5~26.7 U/ml范围内,供试品rHuPH20理论活性和实测活性线性相关,决定系数R^(2)>0.97;中间精密度试验结果的变异系数(coefficient of variation,CV)均<15%;各rHuPH20活性的平均值回收率在95%~105%之间,符合线性、中间精密度和准确度的验证要求。6次独立测定3批供试品rHuPH20活性的变异系数分别为6.56%,2.96%和4.10%,符合重复性的可接受标准(≤10%)。结论该方法各项指标均符合要求,可对单克隆抗体药物中rHuPH20活性进行质量控制。

关键词：单克隆抗体药物皮下注射重组人透明质酸酶活性浊度法质量控制

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高效液相色谱-电喷雾法测定单克隆抗体药物中海藻糖的含量

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药物分析杂志 2021年第10期41卷 1729-1733页

作者：俞小娟于传飞王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的:建立采用高效液相色谱-电喷雾检测器(high performance liquid chromatography-charged aerosol detector,HPLC-CAD)测定单克隆抗体类药物中海藻糖含量的方法。方法:采用HyperREZ XP Carbohydrate Ca_(2)*(300 mm×7.7 mm,8μm)色谱柱,以超纯水为流动相,流速0.8 mL·min^(-1),柱温60℃,检测时间15 min,进样量10μL,CAD雾化室温度为35℃,Filter为5.0。结果:海藻糖对照品50%、80%、100%、120%及150%浓度水平验证溶液的回收率在90.8%~105.5%范围内,3次进样的峰面积RSD均小于10%,100%浓度水平验证溶液6次进样海藻糖含量测定值的RSD为2.7%;3批样品每批平行配制3份,测定结果均值分别为1.054、1.041及0.995 mg·mL^(-1),RSD分别为3.4%、3.1%及6.1%。结论:该方法简便、快速、灵敏,可用于准确测定单克隆抗体药物单克隆抗体药物中海藻糖的含量。

关键词：高效液相色谱电喷雾检测器海藻糖葡萄糖残基非还原型二糖单克隆抗体辅料质量控制

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基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2024年第1期37卷 79-85页

作者：郭莎贾哲龙彩凤黄璟贺鹏飞高洁于传飞徐刚领刘万卉王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 烟台大学药学院山东烟台264005

目的建立基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法,并进行验证。方法以U937-NF-κB-Luc细胞系为效应细胞,通过荧光素酶发光原理建立阿达木单抗生物学活性检测方法,并优化方法的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac... 详细信息

目的建立基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法,并进行验证。方法以U937-NF-κB-Luc细胞系为效应细胞,通过荧光素酶发光原理建立阿达木单抗生物学活性检测方法,并优化方法的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度(以160 ng/mL为初始浓度,进行2倍系列稀释,共10个稀释度)、抗体起始浓度(起始终浓度设为2000 ng/mL,进行2倍系列稀释,共20个稀释度)、抗体稀释倍数(1.5、2、3、4倍)、细胞接种量(8×10^(3)、2×10^(4)、4×10^(4)、6×10^(4)个/孔)、孵育时间(0.5、1、2、3 h),验证方法的专属性、准确性、精密性及线性范围。采用优化的方法及基于L929细胞的TNF-α中和活性法分别检测5批阿达木单抗的相对效价。结果阿达木单抗国际标准品的剂量-效应曲线呈典型的S型,且所得数据符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,R~2>0.99。确定最适TNF-α浓度为5 ng/mL,抗体起始浓度为800 ng/mL,抗体稀释倍数为2倍,细胞接种量为2×10^(4)个/孔,诱导时间为2 h。阿达木单抗等3种TNF-α靶点的治疗性单抗均可获得较好的剂量-效应曲线,其他非TNF-α靶点的治疗性单抗未呈现该曲线;效价理论值对数与其实测值对数的直线回归方程的斜率为1.037,相对偏倚均在±12%范围内;各效价样品的相对效价测定值的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均<20%;理论效价在64%~156%范围内,与检测值呈良好的线性关系,拟合直线回归方程为y=1.0374 x-0.0237,R~2=0.9984。两种方法检测5批阿达木单抗的相对效价检测结果差异无统计学意义(t=1.198,P=0.2651)。结论建立的基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性检测方法具有良好的专属性、准确性及精密性,且耗时短(仅需3 h),可作为阿达木单抗生物学活性的快速评价方法。

关键词：阿达木单抗 U937-NF-κB-Luc细胞肿瘤坏死因子-α 生物学活性

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