检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药学杂志 2016年第13期51卷 1085-1090页

作者：韩春梅范文红陶磊饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立酵母表达的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的质控方法和质量标准。方法采用荧光素酶报告基因法进行效价测定;分别用非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子筛液相色谱(SE-HPLC)测定纯度;反相高效液相色谱(RP-HPLC)进... 详细信息

目的建立酵母表达的重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白的质控方法和质量标准。方法采用荧光素酶报告基因法进行效价测定;分别用非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子筛液相色谱(SE-HPLC)测定纯度;反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行原液肽图分析;荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;液质联用技术分析重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白理化对照品的相对分子质量和氨基酸序列;其余检测项目按《中国药典》2010年版三部规定进行。结果用建立的方法对重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋白3批原液、3批成品及1批理化对照品进行了质量控制研究,建立了针对该制品原液和成品的质量标准,原液和成品的检验结果均在质量标准控制范围内,符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》2010年版三部的要求;理化对照品质谱相对分子质量测定结果为71 361.0,与理论相对分子质量一致,氨基酸序列覆盖率达到97%。结论建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。

关键词：重组人胰高血糖素样肽-1类似物融合蛋质量控制报告基因法高效液相色谱法

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肺炎链球菌蛋白PspC的制备与鉴定

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中国医药生物技术 2017年第5期12卷 397-401页

作者：谭亚军王丽婵卫辰张华捷侯启明张庶民马霄北京中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室 100050

目的对肺炎链球菌表面蛋白C(PspC)进行全基因合成、重组表达、纯化制备和鉴定。方法根据Gen Bank中Psp C的基因序列和氨基酸序列,通过密码子优化和全基因合成的方式获得目的蛋白基因,构建无标签、高效重组表达菌株,建立重组蛋白的纯化... 详细信息

目的对肺炎链球菌表面蛋白C(PspC)进行全基因合成、重组表达、纯化制备和鉴定。方法根据Gen Bank中Psp C的基因序列和氨基酸序列,通过密码子优化和全基因合成的方式获得目的蛋白基因,构建无标签、高效重组表达菌株,建立重组蛋白的纯化制备方法,并进行抗原鉴定及免疫原性检测分析。结果人工合成的Psp C基因序列经鉴定与预期一致,目的蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量在30%以上,经两步纯化后纯度达到95%。重组蛋白能与肺炎链球菌阳性血清产生特异性抗原抗体反应,免疫小鼠后可诱导产生较高水平的蛋白特异性抗体。结论获得了重组肺炎链球菌蛋白Psp C,其具有与天然抗原相似的抗原性和免疫原性,为今后开展疫苗研制、载体蛋白应用等研究奠定基础。

关键词：肺炎链球菌重组蛋白质类肺炎链球菌表面蛋白C

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建立我国HIV阳转血浆盘并评价HIV酶免血筛试剂窗口期

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第7期36卷 528-533页

作者：黄维金宋爱京许四宏王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立我国HIV系列阳转血清盘并用其评价HIV酶免血筛诊断试剂的窗口期。方法收集HIV感染者的系列血清,利用Western blot确认试剂、HIV抗原定量检测试剂、核酸定量检测试剂等检测系列样品,RT-PCR的方法扩增HIV env序列并测序和分型,... 详细信息

目的：建立我国HIV系列阳转血清盘并用其评价HIV酶免血筛诊断试剂的窗口期。方法收集HIV感染者的系列血清,利用Western blot确认试剂、HIV抗原定量检测试剂、核酸定量检测试剂等检测系列样品,RT-PCR的方法扩增HIV env序列并测序和分型,以确认HIV感染。对国内外5种第四代和14种第三代酶免HIV血液筛查诊断试剂的检测窗口期进行评价。结果共收集确认8套HIV感染者的阳转系列血浆,AE亚型6套,B亚型1套,未分型1套,共含有36份样品。用HIV系列阳转血清盘评价发现四代抗原抗体联合检测试剂较三代抗体检测试剂具有更早的窗口期检测能力,前者评分9.4分,后者3.6分,差异具有统计学意义（t=8.547,P〈0.01）；部分国产四代试剂质量已经达到进口试剂的水平；核酸试剂的窗口期检测能力高于酶免试剂,在3套血清盘中至少提高2周以上；确认试剂的灵敏度低于血筛试剂的灵敏度；4/5四代试剂在检测感染早期样品时会出现检测信号值/界值（ S/CO）下降的情况,存在第二窗口期漏检风险。结论本研究建立了8套我国的HIV系列阳转血清盘,评价发现我国HIV血液筛查酶免诊断试剂窗口期检测能力存在差异。

关键词：人类免疫缺陷病毒诊断窗口期血液筛查

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生长激素定量标记免疫分析试剂盒行业标准的验证

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中国医学装备 2017年第2期14卷 18-22页

作者：于婷曲守方黄杰中国食品药品检定研究院非传染病诊断试剂室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:制订生长激素(GH)定量标记免疫分析试剂盒行业标准,并采用该标准适用的化学发光标记、时间分辨荧光标记方法进行验证。方法:选择GH磁微粒化学发光法、电化学发光法、化学发光法和时间分辨荧光分析法试剂盒,按照拟定的行业标准规定... 详细信息

目的:制订生长激素(GH)定量标记免疫分析试剂盒行业标准,并采用该标准适用的化学发光标记、时间分辨荧光标记方法进行验证。方法:选择GH磁微粒化学发光法、电化学发光法、化学发光法和时间分辨荧光分析法试剂盒,按照拟定的行业标准规定,对空白限、线性、准确度、精密度、特异性和稳定性项目进行验证。结果:除部分试剂盒的准确度结果不能满足预期要求的±10%外,其余验证结果均能满足拟定行业标准中的要求。结论:根据验证情况,将准确度要求调整至±15%,其余项目要求不变,最终确定GH定量标记免疫分析试剂盒行业标准。该标准的制定,有助于统一GH定量标记免疫分析试剂盒的质量标准,为该类产品的研制、检验及上市后的监督管理提供依据。

关键词：生长激素试剂盒行业标准化学发光验证

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一种高效制备人乳酸脱氢酶LDH_5参考物质的方法及应用

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生物技术 2017年第2期27卷 174-179页

作者：刘赪阳王玉梅黄薇王萌张恩毅郭健肖飞北京大学第五临床医学院北京医院国家老年医学中心老年医学重点实验室北京100730 中国食品药品检定研究院体外诊断试剂室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京医院检验科北京100730

[目的]研究高效、廉价制备人乳酸脱氢酶LDH5参考物质的方法。[方法]选取人乳酸脱氢酶基因(LDHA)CDS序列进行分析及优化,合成优化后的基因,克隆至表达载体pRSF-Duet中构建重组乳酸脱氢酶LDH5表达载体。使用大肠杆菌*** BL21(DE3)菌株对... 详细信息

[目的]研究高效、廉价制备人乳酸脱氢酶LDH5参考物质的方法。[方法]选取人乳酸脱氢酶基因(LDHA)CDS序列进行分析及优化,合成优化后的基因,克隆至表达载体pRSF-Duet中构建重组乳酸脱氢酶LDH5表达载体。使用大肠杆菌*** BL21(DE3)菌株对目的基因进行表达,异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导,镍离子亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定酶纯度,BCA法分析酶浓度,全自动生化仪分析酶活性、稳定性。[结果]经优化后的LDHA基因的大肠杆菌密码子适应指数为1;纯化蛋白达到电泳纯,比活性达19.01 U/mg,在4℃及25℃可稳定保存8 d。[结论]重组乳酸脱氢酶的表达效率为100 mg/L,酶活性、稳定性、纯度达到临床生化检测的参考物质的条件,可以作为血清乳酸脱氢酶检测的标准物质。

关键词：乳酸脱氢酶基因重组密码子参考物质

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首批逆转录酶活性测定国家标准品的研制

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1067-1070页

作者：李永红王晨付志浩郭莹韩春梅饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的研制首批逆转录酶活性测定国家标准品。方法按《中国药典》2015年版三部相关要求,进行逆转录酶活性测定标准品的制备、检验,并使用热加速试验进行稳定性考察,以SYBR GreenⅠ实时定量聚合酶链式反应法分别在4个实验室进行协作标定... 详细信息

目的研制首批逆转录酶活性测定国家标准品。方法按《中国药典》2015年版三部相关要求,进行逆转录酶活性测定标准品的制备、检验,并使用热加速试验进行稳定性考察,以SYBR GreenⅠ实时定量聚合酶链式反应法分别在4个实验室进行协作标定。结果制备的逆转录酶活性测定标准品外观、无菌检查合格,水分含量为1.3%,分装精度为0.75%。在-20、4、25和37℃放置3个月和6个月的标准品与-70℃保存的标准品相比酶活性均没有下降。经4个实验室协作标定共22次,标准品酶活性的几何平均值为每支26 U,95%置信区间为每支22.95~30.45 U。结论该批逆转录酶活性测定标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,酶活性定为每支26 U。

关键词：逆转录酶国家标准品酶活性

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重组人白介素-15理化对照品的分析鉴定

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1076-1079页

作者：郭莹陶磊韩春梅杨靖清秦玺饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的为了对产品质量进行有效的控制,根据《中国药典》要求,对重组人白介素^(-1)5理化对照品进行分析鉴定。方法参照2010年版《中国药典》三部,测定该样品的生物学活性、蛋白含量、纯度、等电点等指标;通过测定N-末端氨基酸序列、质谱相... 详细信息

目的为了对产品质量进行有效的控制,根据《中国药典》要求,对重组人白介素^(-1)5理化对照品进行分析鉴定。方法参照2010年版《中国药典》三部,测定该样品的生物学活性、蛋白含量、纯度、等电点等指标;通过测定N-末端氨基酸序列、质谱相对分子质量与液质肽图,确证其一级结构。结果该样品的比活性为1.03×107IU·mg^(-1);蛋白含量为(0.879±0.065)mg·m L^(-1);非还原SDS-PAGE纯度为100.0%;分子排阻色谱纯度为100.0%;等电点测定结果为5.2;以上结果均符合质量标准要求。实测质谱相对分子质量(12 900.80)与理论值(12 900.71)一致;氨基酸序列与理论一致,氨基酸覆盖率100%;二硫键连接方式为Cys36-Cys86、Cys43-Cys89,与文献报道相符。结论该理化对照品质量合格、氨基酸序列正确,可用于白介素^(-1)5的常规质量控制。

关键词：白介素-15 理化对照品氨基酸序列二硫键

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一株气管炎疫苗生产菌株的鉴定更名

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第6期36卷 448-452页

作者：石继春杜慧竟梁丽李康徐潇邢玉华陈翠萍叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：对中国医学细菌保藏管理中心库藏气管炎疫苗生产菌株重新鉴定并更名。方法同时培养库藏待检菌株CMCC（B）29108和对照用模式株DSM30007T,比较二者的形态、生理生化、脂肪酸成分等特性,对16S rRNA和rpoB基因进行系统进化分析以及DN... 详细信息

目的：对中国医学细菌保藏管理中心库藏气管炎疫苗生产菌株重新鉴定并更名。方法同时培养库藏待检菌株CMCC（B）29108和对照用模式株DSM30007T,比较二者的形态、生理生化、脂肪酸成分等特性,对16S rRNA和rpoB基因进行系统进化分析以及DNA-DNA同源性测定。结果16S rRNA基因序列比对结果显示CMCC（B）29108与不动杆菌属（Acinetobacter）相近,与模式株鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）DSM30007T 相似性最高,形态学特性、生理生化特性以及脂肪酸成分构成均与DSM30007T 十分相似,仅存在个别差异。基于Acinetobacter属所有成员的16S rRNA和rpoB基因的系统进化分析均显示CMCC（B）29108与DSM30007T 稳定聚类成一个独立分支,且二者的DNA-DNA同源性为100%。结论基于表型、系统进化学以及化学成分的鉴定研究结果,CMCC （B）29108为鲍曼不动杆菌种内区别于模式株的一株菌,可用于气管炎疫苗生产,建议更名为鲍曼不动杆菌（ Acinetobacter baumannii）。

关键词：气管炎疫苗菌种鉴定鲍曼不动杆菌卡它布朗汉姆氏菌

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我国已上市重组人促红细胞生成素的一级结构比较

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1071-1075页

作者：陶磊李响周勇秦玺饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对我国已上市的重组人促红细胞生成素的一级结构进行比对分析。方法针对9家制药企业生产的重组人促红细胞生成素理化对照品,测定质谱相对分子质量、液质肽图、寡糖图谱及唾液酸含量,并对测定结果进行比对分析。结果各样品去除N-... 详细信息

目的对我国已上市的重组人促红细胞生成素的一级结构进行比对分析。方法针对9家制药企业生产的重组人促红细胞生成素理化对照品,测定质谱相对分子质量、液质肽图、寡糖图谱及唾液酸含量,并对测定结果进行比对分析。结果各样品去除N-糖基后实测相对分子质量均与理论值一致,误差均小于1;液质肽图测定中氨基酸覆盖率均为100%,序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser126,N-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致;唾液酸含量测定结果介于（物质的量的比11.5~15.7）促红细胞生成素之间。结论 9家EPO制品的一级结构基本一致,差异主要表现在糖基修饰水平。

关键词：一级结构重组人促红细胞生成素糖基化二硫键

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霍乱O139血清群多糖结合疫苗的生物合成研究

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生物技术通讯 2017年第3期28卷 281-285,346页

作者：黄竞董岩潘超胡显文曾明吴军朱力王恒樑军事医学科学院生物工程研究所北京100071 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:霍乱是由霍乱弧菌引起的一种烈性传染病,其防治已成为一个全球性的公共卫生问题。其中1992年出现的O139血清群是除O1外另一种病原体,发病数日益增多。因此,有必要寻找一种安全有效适用于各种人群的疫苗。方法:敲除霍乱弧菌O139血清... 详细信息

目的:霍乱是由霍乱弧菌引起的一种烈性传染病,其防治已成为一个全球性的公共卫生问题。其中1992年出现的O139血清群是除O1外另一种病原体,发病数日益增多。因此,有必要寻找一种安全有效适用于各种人群的疫苗。方法:敲除霍乱弧菌O139血清群93-3株脂多糖合成途径中O抗原连接酶基因waa L,在周间质产生游离的多糖,之后转入包含来自脑膜炎奈瑟球菌的糖基转移酶和霍乱毒素B亚单位(CTB)编码序列的共表达载体,经IPTG诱导后制备全菌蛋白样品,利用抗His抗体检测糖蛋白的表达,利用Ni柱和离子交换柱对糖蛋白进行纯化,并对其进行糖定量和蛋白定量。结果:以未糖基化、相对分子质量约为14×103的底物蛋白CTB为对照,当共表达CTB和糖基转移酶Pgl L时,通过Western印迹可检测到相对分子质量约为20×103的糖基化蛋白,经Ni柱及阳离子交换柱纯化,得到纯度较高的O139群霍乱O抗原多糖结合蛋白,其纯度约为84.2%,并计算得其糖-蛋白比为0.103∶1。结论:通过生物法合成了一种霍乱O139血清群的多糖结合疫苗,为后续进行动物评价打下了基础。

关键词：霍乱弧菌多糖结合疫苗 O-糖基化糖蛋白

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