检索结果-内蒙古大学图书馆

药物分析杂志 2020年第1期40卷 31-36页

作者：胡金盼李永红史新昌李响于雷郑红梅饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立U-2 OS细胞/CCK-8比色法,用于测定1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)溶瘤活性。方法:选择3株对HSV-1敏感的的细胞株,在细胞培养板上以梯度浓度的HSV-1感染一定时间后,加入CCK-8进行显色,用酶标仪检测后采用... 详细信息

目的:建立U-2 OS细胞/CCK-8比色法,用于测定1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)溶瘤活性。方法:选择3株对HSV-1敏感的的细胞株,在细胞培养板上以梯度浓度的HSV-1感染一定时间后,加入CCK-8进行显色,用酶标仪检测后采用四参数曲线法进行量效关系拟合。在选择出量效关系最好的细胞株基础上,对方法的各项实验条件进行优化,并采用活性测定标准品对结果进行校正分析。对建立的方法初步验证准确性和精密度,并用上述方法对3批样品的溶瘤活性进行检测。结果:优化后的实验采用U-2 OS细胞株,1∶4的样品系列稀释比例,5×10^4 PFU·mL^-1的样品系列稀释初始浓度,每孔2.5×10^4个细胞的铺板数量,72 h感染时间和4 h CCK-8试剂反应时间等条件进行样品测定,得到的四参数方程拟合的量效关系曲线R^2大于0.99,信噪比较高,初步验证结果显示该方法的回收率为113.4%,日间精密度分析的几何变异系数(GCV)为21.8%。3批测试样品的溶瘤活性分别为3.52×10^3、3.93×10^4和1.61×10^5 U·mL^-1。结论:建立的U-2 OS细胞/CCK-8法可用于以HSV-1为载体的基因治疗药物溶瘤活性测定。

关键词： 1型单纯疱疹病毒(HSV-1) 溶瘤活性标准品校正量效关系拟合四参数曲线法 U-2 OS细胞 CCK-8显色法

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基因治疗产品的质量控制分析方法及研究进展

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 4-12页

作者：李永红毕华秦玺饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

基因治疗产品近年来已成为国内外药物研发的热点。对研发阶段的基因治疗产品开展质量研究,建立相应的质量控制方法和质量标准,是产品安全、有效的重要保证和产业化进程中的重要环节之一。基因治疗产品的质量控制项目包括鉴别、含量、效... 详细信息

基因治疗产品近年来已成为国内外药物研发的热点。对研发阶段的基因治疗产品开展质量研究,建立相应的质量控制方法和质量标准,是产品安全、有效的重要保证和产业化进程中的重要环节之一。基因治疗产品的质量控制项目包括鉴别、含量、效价、纯度、杂质和其他常规检测项目等。本文较为详细地介绍了在各种基因治疗产品中这些质控项目可采用的分析方法。对于新型基因治疗产品,迫切需要研究适当的分析方法进行有效的质量控制,而已批准上市或进入临床研究产品的质控方法和标准则需要进一步的提高和完善。

关键词：基因治疗产品质量控制质量标准分析方法安全性有效性鉴别试验含量效价纯度杂质

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基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性研究

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 62-69页

作者：于雷裴德宁王光裕胡金盼李永红饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:研究基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性及粒径分布情况。方法:采用扫描电镜、动态光散射法、微流数字成像法、光阻法及目测法对腺病毒(adenovirus,AdV)、腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和单纯疱疹病毒(herpes simplex vir... 详细信息

目的:研究基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性及粒径分布情况。方法:采用扫描电镜、动态光散射法、微流数字成像法、光阻法及目测法对腺病毒(adenovirus,AdV)、腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)基因治疗产品中病毒颗粒的微粒特性、粒径分布及制剂外观进行观察研究。结果:扫描电镜结果显示,AdV、AAV、HSV均存在不完整颗粒(空心病毒颗粒、衣壳碎片),HSV病毒存在包膜脱落或融合的情况;动态光散射法结果显示AdV对温度敏感,易形成聚集体,AAV的粒径分布不均一,变异度大,HSV实测粒径偏大且分布不均一;微流数字成像法、光阻法及目测法结果提示样品中存在的50μm以上的微粒,与典型的蛋白聚集体形态相似,且50μm以上的颗粒数与液体的浊度呈正相关,100μm以上颗粒与絮状沉淀物相关。结论:不同病毒的微粒特性也不相同,微粒分布情况及动态变化过程与聚集体的形成有关,可采用多种方法优势互补,对微粒进行全范围监测。

关键词：基因治疗产品病毒颗粒微粒特性聚集体不溶性微粒可见异物

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牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子注射液的生物学活性测定方法研究

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 52-57页

作者：毕华裴德宁丁有学刘兰史新昌韩春梅李永红饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(vaccinia virus/GM-CSF)注射液的生物学活性测定方法。方法:采用噬斑法进行感染滴度测定,结合定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)进行病毒基因组滴度/感染... 详细信息

目的:建立牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(vaccinia virus/GM-CSF)注射液的生物学活性测定方法。方法:采用噬斑法进行感染滴度测定,结合定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)进行病毒基因组滴度/感染滴度测定;采用TF-1细胞增殖法,四参数方程拟合处理试验数据,检测不同浓度梯度的样品感染Hela细胞后表达的GM-CSF生物学活性;采用ELISA法,二次方程拟合处理试验数据,检测不同浓度梯度样品感染Hela细胞后的GM-CSF的表达量;采用ELISA法进行β半乳糖苷酶活性测定;采用肿瘤细胞(UACC 257)和正常细胞(GM 00038)进行溶瘤活性测定。结果:测定了1批牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子注射液,其病毒感染滴度为6.5×10^8 PFU·mL^-1,病毒基因组滴度/感染滴度为27,各浓度梯度孔GM-CSF表达量均大于10 pg,GM-CSF生物学活性为181 rGCU,溶瘤活性为144 rOnU,β-半乳糖苷酶活性为124 rBU。结论:对牛痘病毒GM-CSF注射液的生物学活性进行了相对全面的测定,各个项目均符合规定,能够用于该产品的质量控制,同时对同类产品的质量控制具有借鉴意义。

关键词：牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) 生物学活性感染滴度溶瘤活性 β-半乳糖苷酶活性 GM-CSF的表达量基因治疗质量控制

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以CGRP为靶点的单抗药物的电荷变异体表征研究

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山西医科大学学报 2024年第4期55卷 500-508页

作者：陈全姚杜加亮刘万卉王兰烟台大学药学院药物分析教研室烟台264005 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室药品监管科学全国重点实验室北京102629

目的对抗降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)单抗及其电荷变异体进行充分表征分析。方法以抗CGRP单抗为研究对象,利用离子交换色谱对抗CGRP单抗电荷变异体进行分离收集,再利用液质联用技术(LC-MS/MS)从分子量、轻... 详细信息

目的对抗降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)单抗及其电荷变异体进行充分表征分析。方法以抗CGRP单抗为研究对象,利用离子交换色谱对抗CGRP单抗电荷变异体进行分离收集,再利用液质联用技术(LC-MS/MS)从分子量、轻重链亚基以及翻译后修饰等方面对抗CGRP单抗和收集到的组分进行表征。结果利用离子交换色谱(IEC)仪器收集到抗CGRP单抗的电荷变异体分为主峰、酸性峰组(A1-A3)和碱性峰组(B1-B4)。质谱鉴定的抗CGRP单抗的相对分子质量为147103(主要糖型A2G1F,A2G0F);糖肽水平上的分析发现,含有N糖基化修饰的肽段序列为“TKPREEQFNSTYR”,糖基化位点为N296。酸碱变异体组分的N糖型修饰中A2G0F(>30%)和A2G1F(>35%)占比最大,并且酸性变异体中均存在唾液酸修饰;在所有组分中均检测到脱酰胺存在,酸性变异体脱酰胺比例较高;重链第109位,抗体骨架区FR区域上的色氨酸残基发生氧化的比例最高,并且酸性变异体发生氧化的比例总体高于碱性变异体;酸性变异体组分发生焦谷氨酸环化的比例远高于碱性变异体组分;抗CGRP单抗的赖氨酸(K)糖化位点比较丰富,轻链K188位点和重链K149、K245位点的糖化比例相对较高。结论通过表征分析发现,抗CGRP单抗酸性变异体的唾液酸修饰、氧化和焦谷氨酸环化发生比例高于碱性变异体,并且成功鉴定了各修饰发生的位点以及相对丰度。这些信息有助于评估是否需要进一步的药物强制降解研究和制定合理的的药物质量控制方法。

关键词：偏头痛降钙素基因相关肽电荷变异体质谱表征翻译后修饰

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抗白介素-13单克隆抗体生物学活性测定方法的建立

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中国药事 2021年第2期35卷 177-183页

作者：刘春雨于传飞崔永霏武刚王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629

目的:建立抗白介素-13单克隆抗体(抗IL-13单抗)的生物学活性检测方法。方法:利用L-BEAS-2B细胞系,通过荧光素酶检测系统进行抗IL-13单抗的生物学活性检测,通过抗IL-13单抗参比品与样品对比以平行线分析的方法计算样品相对百分效价,并对... 详细信息

目的:建立抗白介素-13单克隆抗体(抗IL-13单抗)的生物学活性检测方法。方法:利用L-BEAS-2B细胞系,通过荧光素酶检测系统进行抗IL-13单抗的生物学活性检测,通过抗IL-13单抗参比品与样品对比以平行线分析的方法计算样品相对百分效价,并对该方法的精密性和准确性进行验证。结果:抗IL-13单抗在该方法中存在量效关系,在半对数坐标纸上呈平行的直线分布。6批抗IL-13单抗样品经3次测定,相对百分效价平均值在(91.10±1.10)%~(105.27±7.17)%之间,RSD均小于12%;1批样品经9次测定平均相对百分效价为(110.77±7.01)%,板间和日间RSD均小于7%;2批回收率样品经3次测定,回收率分别为(96.17±8.50)%和(91.53±15.46)%。结论:研究建立的抗IL-13单抗生物学活性检测方法准确性高,精密度及重复性好,可作为抗IL-13单抗生物学活性的常规检测方法。

关键词：抗IL-13单抗单克隆抗体生物学活性

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SEC-HPLC法测定溶瘤腺病毒注射液的纯度

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 48-51页

作者：李永红韩春梅毕华陶磊李响饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立检测溶瘤腺病毒注射液纯度的分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC法)。方法:采用XBridge BEH SEC分析柱和Waters 2695/2489高效液相色谱系统,以含150 mol·L^-1氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)为流动相进行等度洗脱,流速0.5 m... 详细信息

目的:建立检测溶瘤腺病毒注射液纯度的分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC法)。方法:采用XBridge BEH SEC分析柱和Waters 2695/2489高效液相色谱系统,以含150 mol·L^-1氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)为流动相进行等度洗脱,流速0.5 mL·min^-1,检测波长260 nm,采用峰面积归一法检测溶瘤腺病毒注射液纯度,并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测下限和定量下限等指标进行考察。结果:空白溶剂无干扰峰出现;未经纯化和热处理的溶瘤腺病毒溶液中溶瘤腺病毒峰与其他杂质峰分离度均大于2.0;溶瘤腺病毒的进样量在2×108^2×10^10病毒颗粒(VP)范围内,浓度与吸收峰的线性关系良好(R^2=0.9985);6次进样测得的峰面积的RSD为0.78%;中间精密度试验的RSD为4.7%;检测下限为2.3×10^6 VP,定量下限为6.7×10^6 VP。3批溶瘤腺病毒注射液的纯度分析结果分别为99.84%、99.80%、99.64%。结论:SEC-HPLC法可用于检测溶瘤腺病毒注射液的纯度。

关键词：溶瘤腺病毒基因治疗产品质量控制纯度分子排阻高效液相色谱法

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聚乙二醇化重组人促红素不同位点修饰率的测定

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药物分析杂志 2020年第9期40卷 1697-1701页

作者：陶磊史新昌李响韩春梅周勇饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:测定聚乙二醇化重组人促红素(PEG-EPO)中不同修饰位点的修饰率。方法:将重组促红素(EPO)及PEG-EPO样品分别用Lys-C蛋白酶进行酶切,在含0.1%三氟乙酸的流动相体系下液质联用测定液质肽图;通过质谱鉴定各肽段,在215 nm波长采集的肽... 详细信息

目的:测定聚乙二醇化重组人促红素(PEG-EPO)中不同修饰位点的修饰率。方法:将重组促红素(EPO)及PEG-EPO样品分别用Lys-C蛋白酶进行酶切,在含0.1%三氟乙酸的流动相体系下液质联用测定液质肽图;通过质谱鉴定各肽段,在215 nm波长采集的肽图中积分计算各肽段的峰面积百分比;根据EPO及PEG-EPO肽图中对应肽段峰面积百分比的变化,利用软件计算各位点的修饰率。结果:所建立的方法成功计算出PEG-EPO中9个位点的修饰率。该方法还用于3家企业的产品比较,结果显示:3家企业的产品在PEG修饰方面的总体趋势一致,但在个别位点存在修饰率的差异,比如N-末端和Lys45。结论:该方法可用于PEG-EPO制品的常规质量控制,以及不同企业产品的比对研究。

关键词：聚乙二醇重组人促红素修饰率液质肽图 Lys-C蛋白酶质量控制液质联用比对研究

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重组9型腺相关病毒基因组滴度测定方法的改进和初步验证

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 58-61页

作者：郑红梅李永红胡金盼史新昌于雷饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:对重组9型腺相关病毒(rAAV-9)基因组滴度测定方法进行优化和初步验证,提高测定结果的精密度。方法:通过比较SDS和EDTA及不同浓度SDS的裂解效果,对病毒裂解方法进行优化;通过比较质粒和病毒分别做对照品时的测定结果,选择合适的对照... 详细信息

目的:对重组9型腺相关病毒(rAAV-9)基因组滴度测定方法进行优化和初步验证,提高测定结果的精密度。方法:通过比较SDS和EDTA及不同浓度SDS的裂解效果,对病毒裂解方法进行优化;通过比较质粒和病毒分别做对照品时的测定结果,选择合适的对照品;通过比较平行线法和传统单点法的分析结果,选择合适的统计方法。结果:SDS裂解效果显著高于EDTA,终浓度为0.1%的SDS裂解效果最佳;以病毒为对照品,采用平行线法进行统计分析的结果变异度最小(RSD为13.7%),优于质粒做对照品的检测结果(RSD为35.9%)及单点法的分析结果(RSD为23.1%)。结论:本方法优于传统的重组腺相关病毒基因组滴度测定方法,可应用于以rAAV-9为载体的基因治疗药物的质量控制。

关键词：重组9型腺相关病毒基因治疗载体实时荧光定量PCR技术基因组滴度平行线法同质对照品精密度

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单抗N糖分析系统适用性对照品的建立

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中国药学杂志 2020年第4期55卷 317-321页

作者：王文波武刚于传飞张峰王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京102629

目的建立单抗N糖分析方法的系统适用性对照品,并设定相应的系统适用性要求。方法利用液质联用(LC-MS)仪对N糖系统适用性对照品进行N糖型的表征鉴别,并对对照品进行稳定性评价。结合方法特点和验证数据,对系统适用性要求进行设定。结果... 详细信息

目的建立单抗N糖分析方法的系统适用性对照品,并设定相应的系统适用性要求。方法利用液质联用(LC-MS)仪对N糖系统适用性对照品进行N糖型的表征鉴别,并对对照品进行稳定性评价。结合方法特点和验证数据,对系统适用性要求进行设定。结果建立的系统适用性对照品具有良好的稳定性,其糖型涵盖了单抗主要的N糖型种类。针对3种药典拟收录的单抗N糖分析方法,设定了以下系统适用性要求,包括:图谱与典型图谱相似、G1F(1,6)和G1F(1,3)的分离度应满足具体要求、G0F%应在规定的范围内、G0F保留时间的RSD应≤4%。结论建立了单抗N糖系统适用性对照品,可配合3种2020年版《中国药典》拟收录的N糖分析方法使用。

关键词：单克隆抗体 N糖基化修饰《中国药典》系统适用性

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