检索结果-内蒙古大学图书馆

药物分析杂志 2019年第1期39卷 13-22页

作者：郭莎王开芹武刚李萌崔永霏俞小娟张荣建于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629

目的:研究建立抗程序性死亡受体配体1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)单抗的质量控制方法。方法:利用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽图对抗PD-L1单抗进行鉴别;利用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻高效液相色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEC-HPLC)对抗PD-L1单抗的纯度进行控制;利用细胞结合抑制法和转基因细胞法测定抗PD-L1单抗的活性;利用光阻法和液流成像分析法对不溶性微粒进行检测和分析。结果:抗PD-L1单抗的iCIEF检测结果具有特征性主峰,肽图检测具有相应特征峰,起到很好的鉴别作用。还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和的百分比为(98.37±0.21)%,非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(96.33±0.15)%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.43±0.02)%;IEC-HPLC酸性区峰面积百分比、主峰峰面积百分比、碱性区峰面积百分比分别为(13.63±0.40)%、(80.00±0.36)%、(6.37±0.15)%。细胞结合抑制法与转基因细胞法的活性检测均呈现剂量反应曲线,反映抗PD-L1单抗剂量依赖性地阻断程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)与PD-L1的结合及后续的生物学效应。光阻法检测≥10μm及≥25μm的不溶性微粒数分别为(1.33±0.58)粒·mL^(-1)和(0.00±0.00)粒·mL^(-1);液流成像分析法检测2～10μm、≥10μm及≥25μm的微粒数分别为(1 243.67±242)粒·mL^(-1)、(45.67±16.07)粒·mL^(-1)和(10.00±5.00)粒·mL^(-1),其中,蛋白聚体占87.45%,非蛋白聚体占12.55%。结论:研究建立了抗PD-L1单抗的多种质控方法,为国内抗PD-L1单抗的质量检测提供了参考依据。

关键词：抗程序性死亡受体配体1单抗转基因细胞法生物学活性鉴别纯度测定

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钩端螺旋体疫苗部分菌种分子特性及毒力分析

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中国生物制品学杂志 2019年第12期32卷 1305-1308页

作者：徐颖华杜宗利辛晓芳叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的分析钩端螺旋体(简称钩体)疫苗部分菌种的分子特性及毒力。方法应用多位点可变数量串联重复序列分析(multi locus variable number tandem repeat analysis,MLVA)方法,结合脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE... 详细信息

目的分析钩端螺旋体(简称钩体)疫苗部分菌种的分子特性及毒力。方法应用多位点可变数量串联重复序列分析(multi locus variable number tandem repeat analysis,MLVA)方法,结合脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术,分析我国4株钩体疫苗弱毒株的分子特性;通过豚鼠动物模型攻击实验分析4株弱毒株的毒力。结果 4株钩体疫苗弱毒株经MLVA分析呈现4种不同的型;PFGE分析显示,经NotⅠ酶切,染色体呈现8~13个长度不等的片段;所有经弱毒株攻击动物的主要脏器均出现典型的钩体感染病变。结论明晰了4株钩体疫苗弱毒株的分子特性及其对豚鼠的毒力,为完善该疫苗菌种的质量控制积累了资料。

关键词：钩端螺旋体疫苗菌毒种质量控制弱毒株

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英夫利西单抗质量控制中的趋势分析

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药物分析杂志 2019年第1期39卷 30-38页

作者：刘春雨于传飞武刚李萌付志浩俞小娟崔永霏王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629

目的:对英夫利西单抗的质量控制项目进行趋势分析。方法:利用WEHI164-13var细胞株作为靶细胞,通过细胞增殖抑制作用,使用CellTiter 96AQ_(ueous)检测试剂进行英夫利西单抗的生物学活性检测,以英夫利西单抗参比品计算供试品相对百分效价... 详细信息

目的:对英夫利西单抗的质量控制项目进行趋势分析。方法:利用WEHI164-13var细胞株作为靶细胞,通过细胞增殖抑制作用,使用CellTiter 96AQ_(ueous)检测试剂进行英夫利西单抗的生物学活性检测,以英夫利西单抗参比品计算供试品相对百分效价;采用分子排阻色谱方法,按面积归一化法计算单体峰面积百分比进行抗体纯度检测;采用紫外分光光度法进行蛋白质含量检测;采用电位法进行pH检测;对中国食品药品检定研究院(NIFDC)和企业质控实验室多批次英夫利西单抗的上述检测结果,分别建立警戒限(均值±2SD)和行动限(均值±3SD),绘制趋势分析图,对结果进行连续性趋势分析;并对生物学活性的检测结果进行周期性趋势分析。结果:英夫利西单抗供试品和参比品在生物学活性中均存在量效关系,符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,在半对数坐标纸上呈S型曲线分布。对2008—2017年某企业65批英夫利西单抗的生物学活性检测结果显示,生物学活性相对百分效价均值NIFDC与企业分别为(98.000±9.384)%和(103.046±4.421)%;蛋白质含量均值分别为(96.431±3.000)mg·瓶^(-1)和(99.692±1.185)mg·瓶^(-1);分子排阻色谱单体峰面积均值分别为(99.771±0.177)%和(99.543±0.179)%;pH均值分别为7.272±0.111和7.309±0.038。对上述结果进行连续性和周期性趋势分析,总体趋势较平稳。结论:通过对英夫利西单抗的部分关键质量属性(CQA)进行趋势分析,结果反映了该制品的变化情况,对评价英夫利西单抗的批间一致性和生产工艺稳定性提供了参考,也为其他单抗质控中的趋势分析提供重要指导。

关键词：英夫利西单抗质量控制生物学活性蛋白质含量分子排阻色谱 pH 趋势分析

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电化学发光免疫分析法在评价治疗性单抗与FcγRⅠ结合活性中的应用

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药物分析杂志 2019年第1期39卷 39-44页

作者：徐刚领郭莎张峰于传飞王文波王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629

目的:建立电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)测定贝伐珠单抗与免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ)结合活性的方法,并评价贝伐珠单抗生物类似药(similar biotherapeutic products,SBP)候选物和其原研药(reference biotherapeutic product,RBP)与FcγRⅠ结合活性的相似性。方法:先使用封闭液对链霉亲和素(streptavidin,SA)预包被的96孔MSD板进行封闭,再将生物素(biotin)标记的FcγRⅠ与之结合,之后加入不同稀释倍数的贝伐珠单抗,最后加入SULFO-TAG(Ru(bpy)_3^(2+))标记的羊抗人检测抗体上机读数。按照试验设计分别对FcγRⅠ浓度、单抗样品初始浓度、倍比稀释倍数、检测抗体浓度等试验参数进行优化,并对优化后方法的准确性和精密性进行初步验证,还将建立的方法用于评价贝伐珠单抗SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性。结果:采用优化后的方法检测,贝伐珠单抗与FcγRⅠ的结合呈现良好的剂量效应曲线,R^2>0.99。该方法具有较好的准确性和精密性,靶值为50%～150%样品的回收率在95.2%～103.7%之间;RSD均小于10%。贝伐珠单抗SBP候选药与FcγRⅠ的相对结合活性均在为RBP相对结合活性均值±3SD之间。结论:电化学发光免疫分析法能够用于评价抗体与FcγRⅠ的结合活性,并可应用于对SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性分析。该方法的灵敏度和准确性较好,为评价抗体与FcγRⅠ的结合提供了新的技术手段。

关键词：单克隆抗体贝伐珠单抗免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ) 电化学发光免疫分析(ECLI) 结合活性

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短期异常低温对重组乙型肝炎疫苗效力相关因素的影响

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中国生物制品学杂志 2020年第4期33卷 361-365页

作者：方鑫邱少辉童海青屈旭成曹崴饶洪冲朱征宇何鹏胡忠玉中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130012 深圳康泰生物制品股份有限公司广东深圳518057

目的模拟重组乙型肝炎(简称乙肝)疫苗在冷藏存储过程中发生的异常低温情况,探讨短期异常低温储存对乙肝疫苗效力相关因素的影响。方法选取3个不同表达系统(酿酒酵母、汉逊酵母、CHO细胞)来源的乙肝疫苗,分别于0、-7、-20℃储存1或7 d,... 详细信息

目的模拟重组乙型肝炎(简称乙肝)疫苗在冷藏存储过程中发生的异常低温情况,探讨短期异常低温储存对乙肝疫苗效力相关因素的影响。方法选取3个不同表达系统(酿酒酵母、汉逊酵母、CHO细胞)来源的乙肝疫苗,分别于0、-7、-20℃储存1或7 d,检测疫苗的吸附完全性、上清中铝离子含量、效价和体外相对效力,比较乙肝疫苗经短期异常低温储存后与2~8℃正常储存条件下的差异。结果经短期异常低温储存后,疫苗的吸附完全性、疫苗上清中铝离子含量未发生变化;3种乙肝疫苗的ED50在0.16~0.68μg之间波动;汉逊酵母乙肝疫苗体外相对效力的变化幅度不超过10%,酿酒酵母乙肝疫苗在-20℃冻存7 d后相对效力较2~8℃储存下降21.8%。结论短期异常低温储存后,乙肝疫苗仍能保持较好的吸附完全性,非胶体状态铝含量未发生变化,疫苗效价和体外相对效力在部分异常储存条件下出现下降,但仍符合质量标准要求。

关键词：乙型肝炎疫苗低温吸附完全性效价相对效力

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病毒灭活/去除工艺对抗CD20单克隆抗体生物学活性影响评价方法的建立

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中国生物制品学杂志 2019年第9期32卷 1030-1035页

作者：刘春雨张峰于传飞武刚崔永霏黄璟王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

目的建立病毒灭活/去除工艺对抗CD20单克隆抗体生物学活性影响的评价方法。方法以Raji细胞株作为靶细胞,通过补体依赖性细胞毒(complement dependent cytotoxicity,CDC)作用,用CCK-8试剂进行抗CD20单克隆抗体的生物学活性检测,并验证系... 详细信息

目的建立病毒灭活/去除工艺对抗CD20单克隆抗体生物学活性影响的评价方法。方法以Raji细胞株作为靶细胞,通过补体依赖性细胞毒(complement dependent cytotoxicity,CDC)作用,用CCK-8试剂进行抗CD20单克隆抗体的生物学活性检测,并验证系统适应性。以抗CD20单克隆抗体参比品计算低pH及纳米膜过滤(简称纳滤)2种病毒灭活/去除工艺前后样品的相对百分效价,并对检测结果进行统计学分析。结果抗CD20单克隆抗体CDC生物学活性存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D。该方法的曲线平行性较好,且有良好的稳定性和有效性。低pH病毒灭活工艺处理前后样品的相对效价分别为(97. 22±2. 49)%和(87. 84±5. 60)%,相对变化值的平均平方值为10. 57%;纳滤病毒去除工艺处理前后样品的相对效价分别为(87. 65±4. 31)%和(89. 43±7. 33)%,相对变化值的平均平方值为4. 17%。2种工艺3次检测间差异的单因素方差分析及处理前后配对t检验差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论以抗CD20单克隆抗体为目标抗体,建立了病毒灭活/去除工艺对生物学活性影响的评价方法,该方法具有良好的平行性、稳定性及有效性,为其他单克隆抗体类治疗药物的质量控制提供了实验依据。

关键词：抗CD20单克隆抗体补体依赖性细胞毒作用生物学活性病毒灭活/去除

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鼠疫疫苗研究的现状与展望

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微生物与感染 2020年第3期15卷 135-142页

作者：魏东赵爱华王国治徐苗中国食品药品检定研究院结核病和过敏原产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

鼠疫(plague)是由鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,***)(简称鼠疫菌)引起的一种烈性传染病,属甲类传染病,具有高度传染性和致病性。在过去的鼠疫大流行中有近2亿感染者死亡。疫苗接种是疾病预防控制的重要方法。现就鼠疫疫苗的研究进展作... 详细信息

鼠疫(plague)是由鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,***)(简称鼠疫菌)引起的一种烈性传染病,属甲类传染病,具有高度传染性和致病性。在过去的鼠疫大流行中有近2亿感染者死亡。疫苗接种是疾病预防控制的重要方法。现就鼠疫疫苗的研究进展作一综述,为新疫苗的研制提供参考。

关键词：鼠疫鼠疫耶尔森菌疫苗抗原

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两种毛细管电泳方法分析重组人促红素异构体含量的比较

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中国生物制品学杂志 2019年第9期32卷 1025-1029页

作者：李响史新昌于雷周勇饶春明卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室中国食品药品检定研究院重组药物室

目的全柱成像毛细管等电聚焦电泳(whole column imaging detection-capillary isoelectric focusing electrophoresis,WCID-CIEF)及毛细管区带电泳法(capillary zone electrophoresis,CZE)检测分析重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)异构体含量。方法 5批rhEPO原液同时经WCID-CIEF法(采用4 mol/L尿素,0. 35%甲基纤维素,4%两性电解质混合溶液作为样品缓冲液,聚焦电压为3 k V,预聚焦时间1 min,聚焦时间7 min,成像波长280 nm)及CZE法(采用0. 01 mol/L NaCl、tricine、NaAC和7 mol/L Urea及2. 5 mmol/L腐胺混合溶液作为电泳缓冲液,pH 5. 55,进样压力3. 45 kPa,进样时间10 s,分离电压15. 4 kV,分离时间80 min,检测波长214 nm)检测分析异构体含量。结果 WCID-CIEF及CZE法测定5批rhEPO原液均有5~8条异构体条带,异构体含量差异无统计学意义(P> 0. 05),具有明显的相关性(r为0. 999),各峰面积占比相差总和小于3%。结论虽然WCIDCIEF谱图及CZE谱图的含义略有不同,但两种毛细管电泳方法的分析结果基本相同,均可满足rhEPO异构体的质量控质需求。

关键词：重组人促红素异构体全柱成像毛细管等电聚焦毛细管区带电泳

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钩端螺旋体疫苗诱导抗体水平动态分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第11期39卷 864-868页

作者：张影徐颖华刘向芹张金龙陈质斌王国柱辛晓芳曾明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 中国医学细菌保藏管理中心北京102629

目的探讨钩端螺旋体(简称钩体)疫苗免疫豚鼠后所诱导的抗体水平及动态变化。方法筛选检测抗原,利用ELISA法分析来源于不同厂家的不同批次的钩体疫苗免疫豚鼠后所诱导抗体反应,进一步利用钩体菌攻击豚鼠动物模型,探讨研究钩体疫苗诱导的... 详细信息

目的探讨钩端螺旋体(简称钩体)疫苗免疫豚鼠后所诱导的抗体水平及动态变化。方法筛选检测抗原,利用ELISA法分析来源于不同厂家的不同批次的钩体疫苗免疫豚鼠后所诱导抗体反应,进一步利用钩体菌攻击豚鼠动物模型,探讨研究钩体疫苗诱导的抗体反应与其保护性的相关性。结果来源于钩体LigA蛋白和腐生型PatocⅠ抗原与钩体疫苗免疫豚鼠血清无明显抗原抗体反应。选用钩体疫苗所含的相应血清群菌种的菌体蛋白作为检测抗原,均呈现明显IgG和IgM抗体反应,其中抗原特异性IgG抗体在末次免疫后35 d达到峰值,而抗原特异性IgM抗体的最高峰为末次免疫后11 d。动物攻击试验结果表明,与3倍及9倍疫苗稀释免疫组比较,原倍钩体疫苗免疫动物血清呈现显著的IgG和IgM抗体反应,具有良好的保护性。结论获得了钩体疫苗诱导抗体动态变化规律,初步证实了钩体疫苗诱导血清抗体反应与其保护性具有一定相关性,这些研究为后续钩体疫苗效力替代方法研究奠定基础。

关键词：钩端螺旋体疫苗抗体保护性

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均相时间分辨荧光法测定抗PD-1/PD-L1单抗药物活性

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药物分析杂志 2019年第1期39卷 45-50页

作者：孙亮李萌于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京102629

目的:探索并建立一种均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)检测方法,用于快速、灵敏、稳定检测单克隆抗体的活性。方法:将检测试剂、待检样品加入96半孔板,室温振荡孵育3 h后在酶标仪上读取荧光信号值,用软... 详细信息

目的:探索并建立一种均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)检测方法,用于快速、灵敏、稳定检测单克隆抗体的活性。方法:将检测试剂、待检样品加入96半孔板,室温振荡孵育3 h后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值进行四参数曲线拟和,根据四参数方程计算单抗的相对活性;同时对该方法进行验证。结果:本文构建的检测方法呈典型的反S型剂量效应曲线,且反应缓冲液中添加0.4 mol·L^(-1)氟化钾可提高荧光响应值。对该方法进行验证,专属性强,只与抗PD-1/PD-L1单抗发生反应;2名不同分析人员重复检测6次,相对效价范围为85%～117%,总RSD为13%;准确性良好,不同浓度供试品溶液回收率均在80%～120%范围内;理论相对活性与实际测得相对活性线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0,符合方法验证要求。结论:通过对HTRF检测条件的摸索及验证,建立了一种新型测定单抗活性的方法,且该方法快速简便,可用于单抗的前期筛选或后期活性检测。

关键词：均相时间分辨荧光单克隆抗体药物活性程序性死亡因子程序性死亡因子受体氟化钾

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