检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学装备 2017年第2期14卷 18-22页

作者：于婷曲守方黄杰中国食品药品检定研究院非传染病诊断试剂室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:制订生长激素(GH)定量标记免疫分析试剂盒行业标准,并采用该标准适用的化学发光标记、时间分辨荧光标记方法进行验证。方法:选择GH磁微粒化学发光法、电化学发光法、化学发光法和时间分辨荧光分析法试剂盒,按照拟定的行业标准规定... 详细信息

目的:制订生长激素(GH)定量标记免疫分析试剂盒行业标准,并采用该标准适用的化学发光标记、时间分辨荧光标记方法进行验证。方法:选择GH磁微粒化学发光法、电化学发光法、化学发光法和时间分辨荧光分析法试剂盒,按照拟定的行业标准规定,对空白限、线性、准确度、精密度、特异性和稳定性项目进行验证。结果:除部分试剂盒的准确度结果不能满足预期要求的±10%外,其余验证结果均能满足拟定行业标准中的要求。结论:根据验证情况,将准确度要求调整至±15%,其余项目要求不变,最终确定GH定量标记免疫分析试剂盒行业标准。该标准的制定,有助于统一GH定量标记免疫分析试剂盒的质量标准,为该类产品的研制、检验及上市后的监督管理提供依据。

关键词：生长激素试剂盒行业标准化学发光验证

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首批逆转录酶活性测定国家标准品的研制

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1067-1070页

作者：李永红王晨付志浩郭莹韩春梅饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的研制首批逆转录酶活性测定国家标准品。方法按《中国药典》2015年版三部相关要求,进行逆转录酶活性测定标准品的制备、检验,并使用热加速试验进行稳定性考察,以SYBR GreenⅠ实时定量聚合酶链式反应法分别在4个实验室进行协作标定... 详细信息

目的研制首批逆转录酶活性测定国家标准品。方法按《中国药典》2015年版三部相关要求,进行逆转录酶活性测定标准品的制备、检验,并使用热加速试验进行稳定性考察,以SYBR GreenⅠ实时定量聚合酶链式反应法分别在4个实验室进行协作标定。结果制备的逆转录酶活性测定标准品外观、无菌检查合格,水分含量为1.3%,分装精度为0.75%。在-20、4、25和37℃放置3个月和6个月的标准品与-70℃保存的标准品相比酶活性均没有下降。经4个实验室协作标定共22次,标准品酶活性的几何平均值为每支26 U,95%置信区间为每支22.95~30.45 U。结论该批逆转录酶活性测定标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,酶活性定为每支26 U。

关键词：逆转录酶国家标准品酶活性

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一种高效制备人乳酸脱氢酶LDH_5参考物质的方法及应用

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生物技术 2017年第2期27卷 174-179页

作者：刘赪阳王玉梅黄薇王萌张恩毅郭健肖飞北京大学第五临床医学院北京医院国家老年医学中心老年医学重点实验室北京100730 中国食品药品检定研究院体外诊断试剂室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京医院检验科北京100730

[目的]研究高效、廉价制备人乳酸脱氢酶LDH5参考物质的方法。[方法]选取人乳酸脱氢酶基因(LDHA)CDS序列进行分析及优化,合成优化后的基因,克隆至表达载体pRSF-Duet中构建重组乳酸脱氢酶LDH5表达载体。使用大肠杆菌*** BL21(DE3)菌株对... 详细信息

[目的]研究高效、廉价制备人乳酸脱氢酶LDH5参考物质的方法。[方法]选取人乳酸脱氢酶基因(LDHA)CDS序列进行分析及优化,合成优化后的基因,克隆至表达载体pRSF-Duet中构建重组乳酸脱氢酶LDH5表达载体。使用大肠杆菌*** BL21(DE3)菌株对目的基因进行表达,异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导,镍离子亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定酶纯度,BCA法分析酶浓度,全自动生化仪分析酶活性、稳定性。[结果]经优化后的LDHA基因的大肠杆菌密码子适应指数为1;纯化蛋白达到电泳纯,比活性达19.01 U/mg,在4℃及25℃可稳定保存8 d。[结论]重组乳酸脱氢酶的表达效率为100 mg/L,酶活性、稳定性、纯度达到临床生化检测的参考物质的条件,可以作为血清乳酸脱氢酶检测的标准物质。

关键词：乳酸脱氢酶基因重组密码子参考物质

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重组人白介素-15理化对照品的分析鉴定

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1076-1079页

作者：郭莹陶磊韩春梅杨靖清秦玺饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的为了对产品质量进行有效的控制,根据《中国药典》要求,对重组人白介素^(-1)5理化对照品进行分析鉴定。方法参照2010年版《中国药典》三部,测定该样品的生物学活性、蛋白含量、纯度、等电点等指标;通过测定N-末端氨基酸序列、质谱相... 详细信息

目的为了对产品质量进行有效的控制,根据《中国药典》要求,对重组人白介素^(-1)5理化对照品进行分析鉴定。方法参照2010年版《中国药典》三部,测定该样品的生物学活性、蛋白含量、纯度、等电点等指标;通过测定N-末端氨基酸序列、质谱相对分子质量与液质肽图,确证其一级结构。结果该样品的比活性为1.03×107IU·mg^(-1);蛋白含量为(0.879±0.065)mg·m L^(-1);非还原SDS-PAGE纯度为100.0%;分子排阻色谱纯度为100.0%;等电点测定结果为5.2;以上结果均符合质量标准要求。实测质谱相对分子质量(12 900.80)与理论值(12 900.71)一致;氨基酸序列与理论一致,氨基酸覆盖率100%;二硫键连接方式为Cys36-Cys86、Cys43-Cys89,与文献报道相符。结论该理化对照品质量合格、氨基酸序列正确,可用于白介素^(-1)5的常规质量控制。

关键词：白介素-15 理化对照品氨基酸序列二硫键

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一株气管炎疫苗生产菌株的鉴定更名

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第6期36卷 448-452页

作者：石继春杜慧竟梁丽李康徐潇邢玉华陈翠萍叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：对中国医学细菌保藏管理中心库藏气管炎疫苗生产菌株重新鉴定并更名。方法同时培养库藏待检菌株CMCC（B）29108和对照用模式株DSM30007T,比较二者的形态、生理生化、脂肪酸成分等特性,对16S rRNA和rpoB基因进行系统进化分析以及DN... 详细信息

目的：对中国医学细菌保藏管理中心库藏气管炎疫苗生产菌株重新鉴定并更名。方法同时培养库藏待检菌株CMCC（B）29108和对照用模式株DSM30007T,比较二者的形态、生理生化、脂肪酸成分等特性,对16S rRNA和rpoB基因进行系统进化分析以及DNA-DNA同源性测定。结果16S rRNA基因序列比对结果显示CMCC（B）29108与不动杆菌属（Acinetobacter）相近,与模式株鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）DSM30007T 相似性最高,形态学特性、生理生化特性以及脂肪酸成分构成均与DSM30007T 十分相似,仅存在个别差异。基于Acinetobacter属所有成员的16S rRNA和rpoB基因的系统进化分析均显示CMCC（B）29108与DSM30007T 稳定聚类成一个独立分支,且二者的DNA-DNA同源性为100%。结论基于表型、系统进化学以及化学成分的鉴定研究结果,CMCC （B）29108为鲍曼不动杆菌种内区别于模式株的一株菌,可用于气管炎疫苗生产,建议更名为鲍曼不动杆菌（ Acinetobacter baumannii）。

关键词：气管炎疫苗菌种鉴定鲍曼不动杆菌卡它布朗汉姆氏菌

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我国已上市重组人促红细胞生成素的一级结构比较

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1071-1075页

作者：陶磊李响周勇秦玺饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对我国已上市的重组人促红细胞生成素的一级结构进行比对分析。方法针对9家制药企业生产的重组人促红细胞生成素理化对照品,测定质谱相对分子质量、液质肽图、寡糖图谱及唾液酸含量,并对测定结果进行比对分析。结果各样品去除N-... 详细信息

目的对我国已上市的重组人促红细胞生成素的一级结构进行比对分析。方法针对9家制药企业生产的重组人促红细胞生成素理化对照品,测定质谱相对分子质量、液质肽图、寡糖图谱及唾液酸含量,并对测定结果进行比对分析。结果各样品去除N-糖基后实测相对分子质量均与理论值一致,误差均小于1;液质肽图测定中氨基酸覆盖率均为100%,序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser126,N-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致;唾液酸含量测定结果介于（物质的量的比11.5~15.7）促红细胞生成素之间。结论 9家EPO制品的一级结构基本一致,差异主要表现在糖基修饰水平。

关键词：一级结构重组人促红细胞生成素糖基化二硫键

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磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶的质量研究

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中国新药杂志 2016年第16期25卷 1855-1860页

作者：付志浩韩春梅李永红王兰陶磊李响毕华饶春明王军志中国食品药品检定研究院重组药物室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

目的:磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶（phosphatidyl choline Cu/Zn superoxide dismutase,简称PC-SOD）是由重组人铜锌超氧化物歧化酶（rh Cu/Zn-SOD,简称SOD）经磷脂化修饰而成,对该创新药物的质量研究,需要针对SOD原液、PC-SOD原液... 详细信息

目的:磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶（phosphatidyl choline Cu/Zn superoxide dismutase,简称PC-SOD）是由重组人铜锌超氧化物歧化酶（rh Cu/Zn-SOD,简称SOD）经磷脂化修饰而成,对该创新药物的质量研究,需要针对SOD原液、PC-SOD原液和PC-SOD成品的关键质量属性建立质控方法,从而为其质量标准的建立和申报临床研究奠定基础。方法:采用凯氏定氮法测定制品的蛋白含量;采用经典的氮蓝四唑（NBT）还原法测定其生物学活性;采用原子吸收光谱法检测其铜、锌含量;应用磷脂检测试剂盒,采用碱水解显色法检测PC-SOD的胆碱含量;采用SDS-PAGE法和RP-HPLC两种方法测定SOD原液的纯度,采用RPHPLC和SEC-HPLC两种方法测定PC-SOD原液的纯度;采用Pico-Green荧光法测定外源性DNA残留量。结果:SOD原液、PC-SOD原液和PC-SOD成品的蛋白含量分别为96.46 mg·m L;,50.53 mg·m L;和每剂40.07 mg;SOD原液、PC-SOD原液和PC-SOD成品的生物学活性分别为5.11×10;U·m L;,1.4×10;U·m L;和每剂1.04×105U,比活性分别为5 298,2 771和2 595 U·mg;;SOD原液的铜含量为0.37%,锌含量为0.39%,PC-SOD原液的铜含量为0.35%,锌含量为0.36%;SOD原液的SDS-PAGE测定纯度为>99%,RP-HPLC法测定纯度为99.22%,PC-SOD原液的RP-HPLC法测定纯度为98.75%,SEC-HPLC法测定纯度为99.71%;外源性DNA残留量为每剂6.498 ng;其他各项指标均应符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和2010版《中国药典》（三部）的要求。结论:初步建立了PC-SOD的质控方法,并已用于该制品的质量控制,同时为其他类型磷脂化修饰生物技术药物的质量控制提供参考。

关键词：超氧化物歧化酶磷脂化超氧化物歧化酶质量控制蛋白含量生物学活性铜锌含量纯度

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一种单抗制品理论消光系数与实验确证结果的比较

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中国药学杂志 2016年第17期51卷 1508-1512页

作者：王兰武刚于传飞朱磊高凯中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的本实验通过3种实验方法对1种单抗的消光系数进行实验确证并与理论消光系数进行比较研究。方法根据氨基酸一级序列，计算出单抗在280nm处的理论摩尔消光系数，通过质谱确定单抗相对分子质量，计算出理论消光系数；分别用3种方法测定... 详细信息

目的本实验通过3种实验方法对1种单抗的消光系数进行实验确证并与理论消光系数进行比较研究。方法根据氨基酸一级序列，计算出单抗在280nm处的理论摩尔消光系数，通过质谱确定单抗相对分子质量，计算出理论消光系数；分别用3种方法测定单抗的蛋白质浓度，根据朗伯－比尔定律C=A／EL计算实验消光系数。方法一为利用尿素变性蛋白测定其非折叠状态（变性状态）的实验消光系数，计算得出折叠状态（天然状态）的消光系数；方法二通过酸水解蛋白，结合AccQ Fluor试剂盒利用HPLC对蛋白进行准确定量，计算该抗体的实验消光系数；方法三通过酸水解蛋白，利用氨基酸序列分析仪对蛋白进行准确定量，计算蛋白的实验消光系数。结果理论消光系数E280为1．453mL·mg^-1·cm^-1；3种实验方法确定的单抗消光系数分别为（1．442±0．009）、（1．529±0．032）、（1．458±0．019）mL·mg^-1·cm^-1，均值为（1．477±0．044）mL·mg^-1·cm^-1，RSD=2．979％（n=9）。研究结果显示，该单抗的理论消光系数与实验消光系数的差异较小（0．069％～7．708％）。结论本实验运用3种方法确证单抗的实验消光系数，所建立的消光系数测定和验证方法可用于抗体药物蛋白含量的测定。

关键词：单克隆抗体蛋白质含量:消光系数

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曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对不同乳腺癌细胞系的生物学效应研究

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1096-1100页

作者：王兰于传飞杨雅岚武刚郭莎刘春雨张峰王文波李萌陈伟高凯中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的研究曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物(T-DM1)对BT-474和HCC1954两种乳腺癌细胞系的不同生物学效应。方法运用流式细胞术检测两种细胞系中人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测曲妥珠和曲妥珠单抗... 详细信息

目的研究曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物(T-DM1)对BT-474和HCC1954两种乳腺癌细胞系的不同生物学效应。方法运用流式细胞术检测两种细胞系中人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力;运用细胞增殖抑制/杀伤法,检测曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物对两种细胞系的剂量反应曲线。结果人表皮生长因子受体2在两种细胞系中表达水平均较高;曲妥珠和曲妥珠单抗美坦新衍生物与人表皮生长因子受体2抗原的结合能力相似;曲妥珠对BT474具有增殖抑制作用,但是对HCC1954无作用,曲妥珠单抗美坦新衍生物则对BT474和HCC1953均具有杀伤作用。结论在细胞学模型中,曲妥珠单抗美坦新衍生物可以对人表皮生长因子受体2高表达但是曲妥珠耐药的细胞系具有生物学效应。

关键词：曲妥珠曲妥珠单抗美坦新衍生物 BT474 HCC1954 耐药

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抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的异质性分析

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中国药学杂志 2016年第13期51卷 1091-1095页

作者：李萌朱磊武刚崔永霏于传飞刘春雨张峰王文波陈伟高凯王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法。方法本实验应用了分子排阻色谱(SEC-HPLC)、毛细管电泳(CE-SDS)以及实时成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)等分析方... 详细信息

目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)抗CD30-vc-MMAE异质性分析的质控方法。方法本实验应用了分子排阻色谱(SEC-HPLC)、毛细管电泳(CE-SDS)以及实时成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)等分析方法,对抗体偶联药物抗CD30-vc-MMAE的大小异质性和电荷异质性进行了分析。结果SEC-HPLC分析的纯度为(95.69±0.01)%;还原CE-SDS分析的纯度为(98.38±0.25)%,非还原CE-SDS可分离开6个主要峰,纯度之和为(97.82±0.44)%;和裸抗药物类似,iCIEF可有效的将酸区,碱区和主峰抗体进行较好地分离,主峰区的峰面积百分比为(43.52±2.03)%。结论初步建立了一种基于半胱氨酸偶联方式的ADC药物抗CD30-vcMMAE异质性分析的质控方法 ,为此类生物制品的质量控制提供参考。

关键词：抗体偶联药物分子排阻色谱毛细管凝胶电泳成像毛细管等点聚焦电泳 CD30-vc-MMAE

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