检索结果-内蒙古大学图书馆

定量~1H-NMR法测定6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量

中国新药杂志 2020年第21期29卷 2481-2485页

作者：许美凤陈琼李茂光王春娥叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:建立一种测定6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量的定量核磁共振氢谱(~1H-NMR)法。方法:以二甲基砜为内标物采用Bruker Avance-600型核磁共振波谱仪,设置检测条件,建立定量~1H-NMR法用于供试品溶液的测定。结果:获得... 详细信息

目的:建立一种测定6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量的定量核磁共振氢谱(~1H-NMR)法。方法:以二甲基砜为内标物采用Bruker Avance-600型核磁共振波谱仪,设置检测条件,建立定量~1H-NMR法用于供试品溶液的测定。结果:获得各型多糖的~1H-NMR谱图,确定用于定量的特征峰。通过比较各型多糖特征峰的峰面积与内标物特征峰的峰面积,计算得到6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量依次为92.57%,88.56%,84.95%,82.92%,83.98%和85.80%,计算各组数据的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)值依次为0.29%,0.47%,0.48%,0.13%,0.38%和0.22%。结论:本研究建立的测定肺炎链球菌荚膜多糖含量的定量~1H-NMR法,从样品制备到采样参数设置以及数据处理,操作简单,可行性高,重复性好,更能够满足检定工作的需求,可作为肺炎球菌荚膜多糖质量控制的一种合理、有效的技术手段。

关键词：肺炎链球菌多糖含量定量核磁共振氢谱法核磁共振波谱法二甲基砜

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细菌外膜囊泡作为疫苗候选成分研究进展

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中国新药杂志 2020年第24期29卷 2789-2793页

作者：王珊珊李亚南徐颖华叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的免疫原性强,在体外不复制增殖,且可将其他候选抗原包载,使其表达在OMVs表面,提高抗原递呈效率的特性。本文就近些年细菌OMVs制备与修饰、诱导免疫应答以及疫苗应用的研究进展进行综述,以... 详细信息

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的免疫原性强,在体外不复制增殖,且可将其他候选抗原包载,使其表达在OMVs表面,提高抗原递呈效率的特性。本文就近些年细菌OMVs制备与修饰、诱导免疫应答以及疫苗应用的研究进展进行综述,以期为进一步了解细菌OMVs的特性及其未来应用前景提供参考。

关键词：细菌外膜囊泡免疫反应疫苗质量控制

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2种型号微流成像分析仪测定微粒标准品及单抗样品的结果对比

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药物分析杂志 2021年第4期41卷 655-665页

作者：郭莎武刚崔永霏赵国凤刘忞博王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629 杨森研发中心药物发现、产品开发及临床供应部生物制品分析方法开发上海201210

目的:采用5种不同粒径的聚苯乙烯微粒标准品以及6种单克隆抗体(单抗)样品作为模型体系,对比2种微流成像仪(MFI 5100仪和MFI 5200仪)在粒径测量、计数结果和图像质量上的差异。方法:采用配备自动进样器的MFI 5100仪和MFI 5200仪对5、10... 详细信息

目的:采用5种不同粒径的聚苯乙烯微粒标准品以及6种单克隆抗体(单抗)样品作为模型体系,对比2种微流成像仪(MFI 5100仪和MFI 5200仪)在粒径测量、计数结果和图像质量上的差异。方法:采用配备自动进样器的MFI 5100仪和MFI 5200仪对5、10、15、25和50μm 5种聚苯乙烯微粒标准品进行分析,将所得数据与光阻法分析结果以及标示值进行比较;采用配备自动进样器的MFI 5100仪和MFI 5200仪对6种单抗样品进行分析,将所得数据与光阻法分析结果进行比较。结果:对于聚苯乙烯微粒标准品,MFI 5100仪和MFI 5200仪均具有较好的粒径测量和计数分析精密度,其粒径分析结果与标示值吻合,而计数分析结果则较标示值及光阻法测定值偏低。MFI 5200仪的图像更为清晰,但MFI 5200仪对微粒标准品的计数值略低于MFI 5100仪,这可能是2种仪器的结构参数或软件参数差异导致的。单抗样品的计数结果更为复杂,MFI 5100仪和MFI 5200仪2种仪器在不同粒径区间检测不同产品的计数结果不尽相同。光阻法对单抗的计数结果较微流成像法偏低。结论:MFI系列微流成像仪对特定粒子具有较好的测量重复性和粒径测定精度,但仪器之间存在计数差异,实际应用时如作为《中华人民共和国药典》不溶性微粒检查法的补充,应考虑仪器之间的差异并基于样品特性及测试目的对仪器方法设定合理的标准并对数据进行恰当解读。

关键词：微流成像法光阻法聚苯乙烯微粒标准品单克隆抗体稳定性研究微粒粒径测定计数

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液质联用分析重组人尿激酶原的糖基修饰异质性

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药学学报 2020年第11期55卷 2713-2718页

作者：陶磊于雷丁有学毕华饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

应用超高效液相色谱-质谱联用技术,对重组人尿激酶原的糖基修饰异质性进行了分析鉴定。首先通过测定切除N-糖基前、后完整蛋白的相对分子质量,确定异质性的来源;然后在肽段水平鉴定糖基化位点并确定不同O-糖肽的比例;最后通过绘制N-糖图... 详细信息

应用超高效液相色谱-质谱联用技术,对重组人尿激酶原的糖基修饰异质性进行了分析鉴定。首先通过测定切除N-糖基前、后完整蛋白的相对分子质量,确定异质性的来源;然后在肽段水平鉴定糖基化位点并确定不同O-糖肽的比例;最后通过绘制N-糖图谱,对N-糖基进行定性定量分析。结果显示,该蛋白的异质性主要由糖基化修饰造成。T18全部发生岩藻糖化;6.4%的S138/139发生O-糖基化,糖型主要有2种,比例分别为6.0%和0.4%;N302全部发生N-糖基化,糖型有十多种,以A2F和A3F最多,二者约占总比例的80%。本文对该制品糖基修饰异质性的分析可为其质量标准的提高提供数据参考。

关键词：液质联用重组蛋白尿激酶原糖基化异质性

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抗HER2单抗注射液(皮下注射)的质量控制

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山西医科大学学报 2023年第5期54卷 643-651页

作者：杜加亮于传飞王文波武刚崔永霏郭璐韵梅玉婷俞小娟李萌王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的研究并建立针对抗HER2单抗注射液(皮下注射)的关键质量属性质控方法。方法分别采用胰蛋白酶或Lys-C酶切结合反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)的肽图分析法进行抗HER2单抗的... 详细信息

目的研究并建立针对抗HER2单抗注射液(皮下注射)的关键质量属性质控方法。方法分别采用胰蛋白酶或Lys-C酶切结合反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)的肽图分析法进行抗HER2单抗的特异性鉴别。采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate, CE-SDS)和分子排阻色谱(size-exclusion chromatography, SEC)法进行纯度控制。采用阳离子交换色谱(ion-exchange chromatography, IEC)法进行电荷异质性分析。采用亲水相互作用液相色谱(hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC)法进行寡糖图谱分析。采用酶活力测定法分析透明质酸酶含量。采用BT474细胞增殖抑制法测定生物学活性。采用紫外分光光度法测定蛋白含量。结果两种肽图检测法均获得特征图谱,对抗HER2单抗发挥很好的特异性鉴别作用。还原CE-SDS的重链和轻链峰面积之和百分比为(98.63±0.14)%,非还原CE-SDS主峰面积百分比为(98.20±0.11)%,前峰面积百分比总和为(1.47±0.04)%。SEC测得的单体峰面积百分比为(99.82±0.05)%。IEC测定的主要活性成分(峰3*+峰3)以及产品相关杂质(峰4)的峰面积百分比分别为(75.01±0.04)%和(6.72±0.03)%。寡糖图谱分析aFuc、G2和Man5的面积百分比分别为(9.20±0.01)%,(6.33±0.02)%和(1.92±0.01)%。透明质酸酶含量为(2 021.02±238.41)U/ml。供试品相对于参比品的生物学活性为(95.87±6.10)%,蛋白含量为(115.60±0.45)mg/ml。结论针对抗HER2单抗注射液(皮下注射)关键质量属性的质控方法的建立可以有效确保该类产品的安全性和有效性。

关键词：人表皮生长因子受体2 单克隆抗体乳腺癌皮下注射透明质酸酶肽图分析

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阿达木单抗还原肽指纹图谱鉴别方法的建立与验证

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山西医科大学学报 2024年第2期55卷 214-227页

作者：武刚刘冰陈全姚倪永波郭璐韵梅玉婷于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 重庆市食品药品检验检测研究院生物制品室烟台大学药学院

目的建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法。方法阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarit... 详细信息

目的建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法。方法阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarity determining region, CDR)特征肽段。建立能够有效鉴别阿达木单抗肽指纹图谱的液相色谱分析方法,并进行方法学验证和应用评价。结果阿达木单抗经胰蛋白酶(Trypsin)和胞内蛋白酶(Lys-C)酶解后,CDR肽段均由高分辨质谱完成确证。贝伐珠单抗和利妥昔单抗用于评估方法专属性,结果表明该方法专属性强。选择Fc段保守氨基酸序列作为参比峰,以CDR特征肽段的相对保留时间(RRT)和相对峰面积(RPA)考察方法的变异程度。Trypsin酶解的样品连续5次进样各特征肽段RRT的RSD在0.008%~1.097%之间,RPA的RSD在1.212%~7.951%之间;中间精密度考察各特征肽段RRT的RSD在0.010%~0.985%之间,RPA的RSD在2.306%~10.939%之间;酶切比例为1∶35~1∶45,酶切时间为3.5~4.5 h时,RRT和RPA的RSD均符合方法耐用性要求。Lys-C酶解的样品方法学验证结果也表明其精密度、耐用性均表现良好。不同色谱柱对肽段的选择性、保留强弱、分离效果以及峰强度等具有一定差异。结论建立的基于Trypsin/Lys-C酶切、鉴定CDR特征肽段的高效液相肽指纹图谱鉴别方法可用于阿达木单抗的质量控制及批检验放行,同时可为企业建立单抗肽指纹图谱鉴别方法提供参考。

关键词：阿达木单抗肽指纹图谱互补决定区高效液相色谱法液质联用方法学验证

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反相高效液相色谱法测定抗体药物中组氨酸的含量

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山西医科大学学报 2023年第2期54卷 236-243页

作者：杜加亮武刚梅玉婷于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、... 详细信息

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性、工作范围和耐用性进行验证。结果该方法专属性良好,在组氨酸的保留时间范围内,无基质缓冲液组分和分析溶剂的干扰,且供试品和对照品的组氨酸保留时间偏差为0.45%,符合可接受标准(≤5%)。5个水平的加标溶液(70%,85%,100%,115%和130%)的回收率在93.0%~102.4%之间,且3次独立测定各水平浓度的变异系数均小于5%,符合准确度、线性和检测范围的验证要求(回收率在95%~105%之间,变异系数≤5%)。组氨酸浓度在2.170~4.033 mg/ml(相当于每次进样10.85~20.15μg)范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(R 2=0.995),且y轴截距的95%置信区间包含原点。同一份供试品溶液的6次独立测定浓度的变异系数为1.2%,符合重复性的可接受标准(≤5%);两名实验人员分别在3个工作日对同一份供试品溶液的18次独立测定的浓度的变异系数为3.1%,符合中间精密度的可接受标准(≤10%)。衍生后的待测品和对照品溶液分别在(5±3)℃密封瓶条件下在自动进样器中暂存24 h和26 h后的回收率分别为100.3%和100.2%,符合耐用性的可接受标准(95%~105%)。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测抗体药物中组氨酸含量的方法,该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高,可对其组氨酸进行质量控制。

关键词：单克隆抗体辅料组氨酸反相高效液相色谱质量控制

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基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2024年第1期37卷 79-85页

作者：郭莎贾哲龙彩凤黄璟贺鹏飞高洁于传飞徐刚领刘万卉王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 烟台大学药学院山东烟台264005

目的建立基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法,并进行验证。方法以U937-NF-κB-Luc细胞系为效应细胞,通过荧光素酶发光原理建立阿达木单抗生物学活性检测方法,并优化方法的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac... 详细信息

目的建立基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性快速检测方法,并进行验证。方法以U937-NF-κB-Luc细胞系为效应细胞,通过荧光素酶发光原理建立阿达木单抗生物学活性检测方法,并优化方法的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度(以160 ng/mL为初始浓度,进行2倍系列稀释,共10个稀释度)、抗体起始浓度(起始终浓度设为2000 ng/mL,进行2倍系列稀释,共20个稀释度)、抗体稀释倍数(1.5、2、3、4倍)、细胞接种量(8×10^(3)、2×10^(4)、4×10^(4)、6×10^(4)个/孔)、孵育时间(0.5、1、2、3 h),验证方法的专属性、准确性、精密性及线性范围。采用优化的方法及基于L929细胞的TNF-α中和活性法分别检测5批阿达木单抗的相对效价。结果阿达木单抗国际标准品的剂量-效应曲线呈典型的S型,且所得数据符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,R~2>0.99。确定最适TNF-α浓度为5 ng/mL,抗体起始浓度为800 ng/mL,抗体稀释倍数为2倍,细胞接种量为2×10^(4)个/孔,诱导时间为2 h。阿达木单抗等3种TNF-α靶点的治疗性单抗均可获得较好的剂量-效应曲线,其他非TNF-α靶点的治疗性单抗未呈现该曲线;效价理论值对数与其实测值对数的直线回归方程的斜率为1.037,相对偏倚均在±12%范围内;各效价样品的相对效价测定值的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均<20%;理论效价在64%~156%范围内,与检测值呈良好的线性关系,拟合直线回归方程为y=1.0374 x-0.0237,R~2=0.9984。两种方法检测5批阿达木单抗的相对效价检测结果差异无统计学意义(t=1.198,P=0.2651)。结论建立的基于U937-NF-κB-Luc细胞系的阿达木单抗生物学活性检测方法具有良好的专属性、准确性及精密性,且耗时短(仅需3 h),可作为阿达木单抗生物学活性的快速评价方法。

关键词：阿达木单抗 U937-NF-κB-Luc细胞肿瘤坏死因子-α 生物学活性

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NSO细胞DNA首批国家标准品的建立

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中国药学杂志 2020年第5期55卷 389-395页

作者：武刚付志浩崔永霏张荣建王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的建立小鼠骨髓瘤NSO细胞DNA含量测定国家标准品。方法使用QIAGEN基因组DNA纯化试剂以及Genomictip 500/G制备了NSO细胞DNA作为标准物质原料。通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳进行纯度和含量测定,每支100μL分装于螺口冻存管。组... 详细信息

目的建立小鼠骨髓瘤NSO细胞DNA含量测定国家标准品。方法使用QIAGEN基因组DNA纯化试剂以及Genomictip 500/G制备了NSO细胞DNA作为标准物质原料。通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳进行纯度和含量测定,每支100μL分装于螺口冻存管。组织5个独立实验室应用紫外分光光度法对我国第一批NSO DNA国家标准品进行协作标定,并评价DNA标准物质的稳定性与适用性。结果所制备的NSO细胞DNA标准品经检测,A260/A280均在1.7~1.9之间,电泳图谱条带单一,纯度符合要求。该DNA标准品经5家实验室协作标定共90次,几何平均含量为87.5μg·mL^-1,平均含量的95%可信区间为86.6~88.5μg·mL^-1。短期稳定性实验表明,该标准品在4℃条件下放置4个月,DNA标准品浓度测定值及/1260/无显著性差异;-20、-70℃贮存1年的长期稳定性结果显示,标准品DNA浓度测定值及A260/A280无显著性差异,电泳条带单一,因此该标准物质应在-20℃条件以下长期保存。在标准品适用性研究中,利用该标准品进行定量PCR法测定,在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1之间线性良好,标准曲线r^2值>0.999。结论该批NSO DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于定量PCR法检测NS0细胞DNA残留量,DNA标准品含量赋值为87.5μg·mL^-1,批号为330002-201701。

关键词： NS0细胞DNA 国家标准品 DNA残留量实时定量聚合酶链式反应法

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人胚胎干细胞诱导分化的肝样细胞质量评价研究

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中国新药杂志 2021年第4期30卷 320-332页

作者：纳涛孙懿吴婷婷欧阳琦卢光琇林戈袁宝珠中国食品药品检定研究院细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室人类干细胞国家工程研究中心湖南光琇高新生命科技有限公司

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞... 详细信息

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞。为满足临床应用研究的需要,hESC-HLCs需具备明确的基本生物学属性、微生物学安全性、生物学安全性及生物学有效性的总体质量要求,其中每一类质量要求是由多个关键质量属性所组成。hESC-HLCs的整个制备过程是从人胚胎干细胞(hESCs)向hESC-HLCs的全分化过程,可基本分为4个阶段,各阶段在细胞形态、标志基因/蛋白的表达、生物学功能等方面均有明显的特征。本文就h ESC-HLCs总体质量要求及各质量属性进行讨论,目的是在我国建立临床研究用hESC-HLCs质量评价方法和评价策略。

关键词：胚胎干细胞肝样细胞质量属性质量评价阶段性诱导分化

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