检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2020年第1期33卷 19-25页

作者：屈旭成何鹏邱少辉方鑫童海青葛君李建强姜崴胡忠玉中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130012 安徽龙科马生物制药有限责任公司安徽合肥230088 南京远大赛威信生物医药有限公司江苏南京210042

目的评价相同序列不同硫代修饰CpG ODN佐剂联合重组乙型肝炎疫苗表面抗原(rHBsAg)在BALB/c小鼠中的免疫原性,及在HEK-BlueTM hTLR9细胞上的活性。方法将4种(全硫代修饰的QCX1、部分硫代修饰的HS1和HS2及非硫代修饰的NS)CpG ODN及其阳性... 详细信息

目的评价相同序列不同硫代修饰CpG ODN佐剂联合重组乙型肝炎疫苗表面抗原(rHBsAg)在BALB/c小鼠中的免疫原性,及在HEK-BlueTM hTLR9细胞上的活性。方法将4种(全硫代修饰的QCX1、部分硫代修饰的HS1和HS2及非硫代修饰的NS)CpG ODN及其阳性对照(全硫代修饰的CpG7909)按照相同配比分别与rHBsAg混合,使CpG ODN和rHBsAg终浓度均为20μg/mL,同时设等剂量抗原对照组(rHBsAg)及空白对照组(生理盐水)。分别肌肉免疫BALB/c小鼠,每只100μL,于免疫后1、2、4周摘眼球采血后处死小鼠,分离血清,应用化学发光微粒子免疫分析技术检测乙型肝炎病毒表面抗体(antibody to hepatitis B virus surface antigen,Anti-HBs)水平;取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNCs),应用ELISPOT技术检测抗原特异性IFNγ、IL-2的分泌水平。体外应用HEK-BlueTM hTLR9细胞,检测4种CpG ODN及阳性对照CpG7909在该细胞上的活性,以及血清中放置不同时间后在该细胞上的活性。结果免疫后1、2、4周,各组小鼠血清Anti-HBs水平逐渐升高,其中免后2、4周,QCX1组小鼠血清抗体水平高于抗原对照、HS1、HS2、NS组;QCX1组小鼠MNCs在rHBsAg刺激下,分泌IFNγ和IL-2的能力显著高于HS1、HS2、NS和抗原对照组(P均<0.01);QCX1和HS2组刺激HEK-BlueTM hTLR9细胞活性的半数有效浓度(EC50)分别为5.94和6.52μg/mL,明显低于HS1(46.54μg/mL)和NS组(49.10μg/mL);随着不同硫代修饰CpG ODN在血清中放置时间的延长,仅全硫代修饰QCX1和CpG7909组细胞培养物A655基本不变,其他组均出现不同程度降低。结论全硫代修饰组QCX1佐剂增强小鼠细胞和体液免疫的能力与CpG7909相当,且在HEK-BlueTM hTLR9细胞上呈现较好的活性,在血清中也具有较好的稳定性。

关键词： CpG ODN 佐剂硫代修饰乙型肝炎疫苗活性

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以Delta样蛋白3为靶点的抗体偶联药物质量研究

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中国药学杂志 2019年第24期54卷 2018-2027页

作者：李萌孙亮朱磊于传飞王文波武刚张荣建崔永霏王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050 中国人民解放军火箭军特色医学中心北京100088

目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物抗Delta样蛋白3 (DLL3)单抗-MPVP-PBD的质控方法。方法本实验利用转基因细胞法,以转染了DLL3的HEK 293T细胞系为靶细胞测定抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性;利用ELISA法测定结合活性;利... 详细信息

目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物抗Delta样蛋白3 (DLL3)单抗-MPVP-PBD的质控方法。方法本实验利用转基因细胞法,以转染了DLL3的HEK 293T细胞系为靶细胞测定抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性;利用ELISA法测定结合活性;利用CE-SDS和SEC-UPLC测定大小异质性;利用i CIEF分析电荷异质性;分别利用HIC-HPLC和LC-MS对药物抗体偶联比(drug-to-antibody ratio,DAR)进行测定;利用RP-HPLC测定游离小分子药物含量。结果抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性EC50平均值为(4. 02±0. 22) ng·m L^-1,RSD为5. 47%;结合活性EC50平均值为(12. 67±1. 09) ng·m L^-1,RSD为8. 60%;非还原CE-SDS完整Ig G峰面积百分比为(25. 58±0. 15)%、HHL为(36. 56±0. 24)%、轻链为(14. 61±0. 13)%等,RSD均小于2%;还原CE-SDS重链和轻链峰面积之和为(96. 97±0. 31)%,RSD为0. 32%;SEC-UPLC主峰面积为(98. 68±0. 05)%,多聚体(1. 32±0. 05)%,RSD均小于5%;i CIEF主峰面积为(68. 19±0. 68)%,主峰等电点(8. 28±0. 01),RSD均小于2%;LC-MS测定DAR为2. 08(完整相对分子质量水平)和1. 73(轻重链水平);HIC-HPLC测定DAR为(1. 86±0. 03),0-药物为(19. 49±0. 28)%,1-药物为(11. 21±0. 20)%,2-药物为(48. 64±0. 68)%,3-药物为(5. 21±0. 40)%,4-药物为(15. 44±1. 19)%,RSD均小于10%;LC-MS测定了偶联位点占有率;RP-HPLC测定游离小分子药物为(23. 20±0. 82)%,RSD为3. 53%。结论本实验初步建立了抗体偶联药物抗DLL3单抗-MPVP-PBD的质控方法,该质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可作为其常规检测方法,为我国相关抗体偶联药物的质量检测提供了参考依据。

关键词：抗体偶联药物质量控制生物学活性药物抗体偶联比游离小分子药物

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定量PCR-Taqman探针法检测NS0宿主细胞残留DNA的方法学验证

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中国药学杂志 2019年第24期54卷 2001-2009页

作者：武刚付志浩杨志行崔永霏张荣建宗伟英王兰中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050 中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康创新中心浙江湖州313000

目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行... 详细信息

目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1内,线性良好(r2> 0. 99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL^-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L^-1;精密度良好(RSD≤30%);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。

关键词： NS0 DNA标准品 NS0宿主细胞DNA残留检测 PCR-Taqman探针法方法验证

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2021—2022年双价人乳头瘤病毒疫苗(大肠埃希菌)体外效力趋势分析

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微生物学免疫学进展 2025年第3期 68-72页

作者：路琼张杰唐茂玲黄维金聂建辉中国食品药品检定研究院艾滋病性病病毒疫苗室药品监管科学全国重点实验室国家卫生健康委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京云菱生物技术有限公司研发部

目的对中国2021—2022年双价人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)疫苗(大肠埃希菌)批签发质量控制中的体外效力进行趋势分析，为同类疫苗评价提供参考。方法根据国内企业2021年和2022年双价HPV疫苗的体外效力数据建立警戒限与行... 详细信息

目的对中国2021—2022年双价人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)疫苗(大肠埃希菌)批签发质量控制中的体外效力进行趋势分析，为同类疫苗评价提供参考。方法根据国内企业2021年和2022年双价HPV疫苗的体外效力数据建立警戒限与行动限，绘制趋势分析图并进行趋势分析。同时，将中国食品药品检定研究院(简称中检院)批签发检测结果与企业结果进行Bland-Altman一致性分析。结果 2021年和2022年体外效力趋势分析显示，企业检测结果显示HPV16和HPV18体外效力的平均值分别为1.0和1.4,没有超趋势(out of trend, OOT)情况，连续2年趋势保持稳定。企业和中检院检测的2个型别体外效力的年度平均值差异不大(≤0.1),各自检测数据的CV均≤10%,同时对中检院与企业检测结果进行Bland-Altman一致性检验分析，结果显示两者一致性良好。结论 2021年和2022年双价HPV疫苗批签发体外效力趋势分析反映该制品生产工艺稳定，批间一致性较好，企业检验方法较可靠，为上市疫苗的质量控制提供保证。

关键词：人乳头瘤病毒疫苗体外效力趋势分析异常趋势批签发一致性检验质量控制

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埃博拉病毒包膜糖蛋白变异及抗原表位研究进展

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病毒学报 2019年第5期35卷 801-812页

作者：刘硕张黎王玉琳黄维金王佑春北京生物制品研究所国药中生生物技术研究院有限公司北京101111 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法与标准化重点实验室北京102629

埃博拉病毒在人类和非人灵长类中引起严重出血热疾病,死亡率高。包膜糖蛋白为埃博拉病毒唯一与病毒吸附宿主细胞、融合和进入等功能相关的蛋白。包膜糖蛋白突变会影响病毒感染力、细胞嗜性和与抗血清的中和敏感性。本文系统分析了埃博... 详细信息

埃博拉病毒在人类和非人灵长类中引起严重出血热疾病,死亡率高。包膜糖蛋白为埃博拉病毒唯一与病毒吸附宿主细胞、融合和进入等功能相关的蛋白。包膜糖蛋白突变会影响病毒感染力、细胞嗜性和与抗血清的中和敏感性。本文系统分析了埃博拉病毒包膜糖蛋白的氨基酸突变,结合抗体结合位点和T细胞表位分析其对于埃博拉病毒感染和疫苗保护效果的影响。

关键词：出血热埃博拉病毒抗原表位基因突变

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康柏西普质量标准优化和提高

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药物分析杂志 2019年第1期39卷 1-12页

作者：张峰于传飞王文波武刚贺庆刘爱兵宋晓婕柯潇王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629 成都康弘药业集团股份有限公司成都610000

目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西... 详细信息

目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西普生物学活性的荧光素酶报告基因分析(reporter gene assay,RGA)方法、唾液酸含量的反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定方法和糖谱的离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEX-HPLC)测定方法,并对非还原十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)纯度测定方法的凝胶浓度和上样量进行优化,按照2015年版《中华人民共和国药典》通则0903,采用光阻法测定不溶性微粒。结果:生物学活性测定中,RGA法在准确度、精密度和中间精密度等方面均优于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖抑制法,且能够更好地反映康柏西普生物学活性的变化;非还原SDS-PAGE纯度检测中,4%～15%梯度胶较10%固定浓度凝胶对主带和杂带的分离度高,3μg上样量时,能够更准确地测定康柏西普纯度;间苯二酚法测定唾液酸含量中,N-糖的非唾液酸单糖亦可与间苯二酚反应,产物在580 nm处有光吸收,从而影响检测结果,本研究建立的RP-HPLC法通过4,5-亚甲二氧基-1,2-邻苯二胺盐酸盐(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)标记排除该影响,检测结果更准确;建立的IEX-HPLC糖谱测定方法可以有效控制影响康柏西普关键质量属性的N-糖基化类型;康柏西普成品的不溶性微粒检测结果能够满足USP<789>要求。结论:所建立/优化的质控方法和提高的质量标准可在更高水平上对康柏西普质量进行控制。

关键词：康柏西普唾液酸糖谱不溶性微粒报告基因分析十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨电泳

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人乳头瘤病毒18型L1抗原的肽图特征峰分析

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药物分析杂志 2019年第10期39卷 1836-1843页

作者：柳军凯贺鹏飞赖燕华刘欢宁婷婷聂建辉黄维金王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050 上海中科新生命生物科技有限公司上海200233

目的:比较分析不同氨基酸序列人乳头瘤病毒(HPV)18型L1抗原的肽图,收集差异特征峰肽段,利用质谱方法对其进行鉴别。方法:将HPV18型L1抗原用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过RP-HPLC法分离肽段,得到HPV18型L1抗原肽图;用Megalign软件比... 详细信息

目的:比较分析不同氨基酸序列人乳头瘤病毒(HPV)18型L1抗原的肽图,收集差异特征峰肽段,利用质谱方法对其进行鉴别。方法:将HPV18型L1抗原用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过RP-HPLC法分离肽段,得到HPV18型L1抗原肽图;用Megalign软件比较不同来源的L1抗原的氨基酸序列差异,分析不同HPV18型L1抗原的肽图特征峰,收集差异特征峰;HPLC色谱条件:采用C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.1%三氟乙酸-水为流动相A,0.1%三氟乙酸-乙腈为流动相B,梯度洗脱(0~10 min,100%A;10~80 min,100%A→30%A;80~91 min,30%A→100%A),流速1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长214 nm,进样量100μL。再运用UPLC-MS/MS技术,采用电喷雾离子源(ESI),正离子全扫描检测模式,喷雾电压2 kV,毛细管温度300℃,对差异特征峰进行鉴别。结果:5个公司生产的L1抗原平行6次重复检测,各共有峰保留时间的RSD最大值范围为0.24%~0.49%,表明肽图分析方法重复性良好。对5个公司的3批次抗原进行检测,主要峰保留时间的最大RSD范围为0.20%~0.74%,表明批间一致性良好。比较发现5个不同公司生产的HPV疫苗18型L1抗原的液相肽图有6个差异特征峰(1~6号),分别对其进行质谱鉴定,结合氨基酸序列的比对分析,发现5个特征峰由氨基酸差异引起:487~496位氨基酸的缺失将导致1号特征峰的缺失;88位氨基酸N和T的相互转变导致2、3号特征峰相互转变;494位氨基酸S和A的相互转变导致1、4号特征峰相互转变;5号特征峰为4号特征峰胰蛋白酶酶切不完全出现的;6号峰为非特异峰。表明不同公司生产的HPV18型L1抗原具有各自的特征峰。结论:本研究建立的HPLC-MS/MS肽图特征峰分析方法,可应用于不同企业生产的18型的HPV L1抗原的鉴别和质量控制,进一步表明了肽图在疫苗原液质量控制中的重要意义。

关键词：人乳头瘤病毒(HPV) 肽图 L1抗原疫苗液相色谱-质谱联用特征峰鉴别

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基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用

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药物分析杂志 2019年第1期39卷 51-61页

作者：刘春雨王馨于传飞徐刚领王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629 福建省医疗器械与药品包装材料检验所福州350001

目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay system)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价。结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng·mL^(-1),1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h。该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数(fold of induction,FI)及半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的RSD均小于10%; 4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)%、(71.18±1.55)%、(133.17±9.91)%以及(166.55±15.73)%;对应的回收率分别为(92.53±4.01)%、(94.91±2.07)%、(106.54±7.93)%、(111.04±10.48),RSD均小于10%,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应评价。结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。

关键词：抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用生物学活性荧光素酶检测系统报告基因

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糖基化修饰对重组CTLA4-Ig稳定性影响的研究

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药物分析杂志 2019年第1期39卷 70-77页

作者：朱磊单改仙王兰火箭军总医院特勤医学科北京100088 解放军第306医院放疗科北京100101 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629

目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)融合蛋白稳定性的影响。方法:应用多种糖苷酶N-糖苷酶F(PNGase F)、内切糖苷酶F2(EndoF2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)对样品进行处理... 详细信息

目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)融合蛋白稳定性的影响。方法:应用多种糖苷酶N-糖苷酶F(PNGase F)、内切糖苷酶F2(EndoF2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)对样品进行处理。通过分子排阻色谱(SEC)测定不同酶切时间处理后样品纯度变化;应用差示扫描荧光(DSF)测定样品整体热力学参数的变化;应用差示扫描量热(DSC)测定样品各结构域热力学参数变化;在45℃条件下加热,分别于0、1、3、5、7、9、11和12周取样,通过SEC测定样品纯度的变化。结果:在N-糖苷酶F、内切糖苷酶F2和唾液酸酶分别处理过程中,CTLA4-Ig的聚体含量逐渐增加,而O-糖苷酶酶切过程中,聚体虽无明显变化,但碎片含量逐渐增加;经DSF测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后解链温度(T_m)均明显下降,而唾液酸酶和O-糖苷酶处理后T_m无明显变化;经DSC测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后T_m1下降,T_m2不变,T_m3上升,而唾液酸酶处理后T_m1和T_m3都略微有所上升,T_m2基本不变,O-糖苷酶处理后T_m值均变化;加速试验过程中,N-糖苷酶F和唾液酸酶处理样品的聚体上升,内切糖苷酶F2处理样品的的聚体不变;O-糖苷酶处理样品的的聚体不变,而碎片偏高。结论:通过多种分析手段研究发现,糖基化修饰与CTLA4-Ig的稳定性密切相关。

关键词：细胞毒性T 淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白融合蛋白单抗类药物糖基化修饰稳定性 N-糖基化 O-糖基化

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第2代WHO百日咳毒素国际标准品的协作标定

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中国新药杂志 2018年第16期27卷 1855-1860页

作者：卫辰晁哲吴燕王丽婵骆鹏马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:建立第2代WHO百日咳毒素国际标准品。方法:以第1代WHO百日咳毒素国际标准品为协作标定的标准品,对英国国家生物制品检定所提供的待标品和中国食品药品检定研究院内部参考品进行国际单位值测定和稳定性测定。测定方法为组胺致敏试验... 详细信息

目的:建立第2代WHO百日咳毒素国际标准品。方法:以第1代WHO百日咳毒素国际标准品为协作标定的标准品,对英国国家生物制品检定所提供的待标品和中国食品药品检定研究院内部参考品进行国际单位值测定和稳定性测定。测定方法为组胺致敏试验、CHO细胞簇集试验以及3项生化试验方法。结果:中国食品药品检定研究院完成了组胺致敏、CHO细胞簇集2项试验以及1项生化试验。结论:NIBSC经过对来自12个国家的14个实验室的结果进行统计学处理后,赋值第2代WHO百日咳毒素国际标准品组胺致敏活性为每支1 813 IU、CHO细胞簇集活性为每支680 IU,储存和运输稳定性符合要求。

关键词：国际标准品百日咳毒素组胺致敏 CHO细胞簇集

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