检索结果-内蒙古大学图书馆

利用欧洲药典方法评价国产重组人粒细胞集落刺激因子原液中的制品相关蛋白含量

药物分析杂志 2018年第11期38卷 1870-1874页

作者：韩春梅刘兰史新昌陶磊饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:分析评价国产重组人粒细胞集落刺激因子原液中的制品相关蛋白含量,为《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)标准提高提供依据。方法:对比国际主流药典,选择其中最为通用的制品相关蛋白含量分析方法;用该方法对征集的国产重组... 详细信息

目的:分析评价国产重组人粒细胞集落刺激因子原液中的制品相关蛋白含量,为《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)标准提高提供依据。方法:对比国际主流药典,选择其中最为通用的制品相关蛋白含量分析方法;用该方法对征集的国产重组人粒细胞集落刺激因子原液进行分析检测及结果判定。结果:欧洲药典(EP)所列方法最为通用,用该方法对12家生产企业的33批原液进行了检测;结果显示,5家企业的13批原液符合EP标准,其余厂家及批次不符合EP标准。结论:我国已有相当数量的重组人粒细胞集落刺激因子产品符合EP的制品相关蛋白含量标准,可以考虑将该方法纳入新版《中国药典》,以促进该制品质量的提高并与国际接轨。

关键词：粒细胞集落刺激因子制品相关蛋白原液欧洲药典质量标准

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基于毛细管区带电泳的IgG2型单抗电荷异质性分析方法的建立

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中国药学杂志 2018年第8期53卷 627-631页

作者：王文波于传飞张峰武刚高凯王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的建立IgG2型单抗毛细管区带电泳(CZE)电荷异质性分析方法。方法通过对三乙基四胺(TETA)和6-氨基己酸(EACA)浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度等参数进行优化,建立能够有效分离和定量IgG2单抗电荷异构体的CZE分析方法,并对该方... 详细信息

目的建立IgG2型单抗毛细管区带电泳(CZE)电荷异质性分析方法。方法通过对三乙基四胺(TETA)和6-氨基己酸(EACA)浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度等参数进行优化,建立能够有效分离和定量IgG2单抗电荷异构体的CZE分析方法,并对该方法进行方法学验证和应用评价。结果 TETA和EACA浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度的变化,会影响IgG2单抗的电荷异构体分离效果,通过一系列参数的优化,最终确定了方法参数(400 mmol·L^(-1)EACA/0.05%TETA,pH 6.2,分离电压30 kV,分离温度35℃)。建立的CZE分析方法可以有效地对IgG2单抗电荷异构体进行分离,并具有良好的精密度,峰面积的RSD值小于3.0%。该方法同样适用于IgG1和IgG4型单抗的电荷异质性分析,同时,根据电泳图谱和迁移时间,能够对不同亚型和靶点的单抗进行有效的区分鉴别。结论建立的IgG2型单抗毛细管区带电泳方法,可有效分离电荷异构体,并具有良好的精密度,可作为平台方法应用于IgG2型单抗的电荷异质性分析和鉴别。

关键词： IgG2单抗电荷异质性毛细管区带电泳方法优化质量控制

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超高效液相色谱串联Qda质谱法检测单抗N糖的研究

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中国药学杂志 2018年第3期53卷 223-227页

作者：王文波于传飞张峰徐刚领高凯王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的利用超高效液相色谱串联Qda质谱法对单抗的N糖谱进行定性和定量分析。方法对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用Rapi Fluor-MS染料进行标记,通过Qda质谱对N糖进行糖型鉴别、荧光检测器进行定量检测。结果超高效液相色... 详细信息

目的利用超高效液相色谱串联Qda质谱法对单抗的N糖谱进行定性和定量分析。方法对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用Rapi Fluor-MS染料进行标记,通过Qda质谱对N糖进行糖型鉴别、荧光检测器进行定量检测。结果超高效液相色谱串联Qda质谱法能够准确的对单抗N糖进行定性定量检测,单个糖型的实测m/z值在理论值±0.5内。利用该方法对原研抗CD20人鼠嵌合单抗和生物类似药候选药物的N糖进行分析表明,3个候选药物的N糖谱与原研抗体基本一致,但在部分糖型种类和比例上存在一定的差异,总的岩藻糖修饰糖型比例基本一致。对CHO细胞、NS0细胞和SP2/0细胞表达的单抗N糖进行比对分析显示,3种细胞表达单抗的主要糖型为G0F-N、G0F、Man5、G1Fa、G1Fb和G2F,占总糖型比例的80%以上。相比于NS0细胞和SP2/0细胞,CHO细胞表达抗体糖型种类相对较为简单,共11种糖型。而NS0细胞和SP2/0细胞表达单抗糖型种类和结构较复杂,分别检测到22和26种糖型,其中含有多种复杂的唾液酸和半乳糖修饰糖型,虽然这些糖型所占比例较低,但可能与单抗的体内半衰期和免疫原性相关。结论超高效液相色谱串联Qda质谱法作为快速准确的N糖分析方法,可应用于单抗N糖的质控研究中。

关键词：单克隆抗体 N糖基化修饰 Qda质谱生物类似药抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用

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三氟乙酸及甲酸体系下重组人促红素液质肽图的比较

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中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 9-13页

作者：陶磊韩春梅李响秦玺周勇饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的探讨流动相中添加三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)或甲酸(formic acid,FA)时,重组人促红素(erythropoietin,EPO)液质肽图中各肽段的保留时间、峰面积及离子化效率的差异。方法将重组人EPO样品进行酶切,分别在含0.1%TFA及0.1%FA... 详细信息

目的探讨流动相中添加三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)或甲酸(formic acid,FA)时,重组人促红素(erythropoietin,EPO)液质肽图中各肽段的保留时间、峰面积及离子化效率的差异。方法将重组人EPO样品进行酶切,分别在含0.1%TFA及0.1%FA的流动相体系下测定液质肽图。通过分析质谱数据对各色谱峰进行定性,记录并计算各肽段的保留时间、峰面积及质谱信号强度。结果两种添加剂体系下,各肽段的保留时间存在差异,大部分肽段的保留时间变化在1 min左右,个别肽段超过2 min;TFA体系下各肽段的峰面积相对较小,约为FA体系下的84%;FA体系下各肽段离子化效率较高,信号强度一般为TFA体系的6倍,个别肽段高达10倍以上。结论两种体系下重组人EPO的液质肽图存在较大差异,应根据实验目的选择合适的流动相添加物。

关键词：三氟乙酸甲酸重组人促红素液质肽图

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钩端螺旋体疫苗菌种分子遗传质量控制方法的建立

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中国生物制品学杂志 2018年第8期31卷 865-868页

作者：徐颖华李喆张影杜宗利辛晓芳叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立钩端螺旋体(简称钩体)疫苗菌种分子遗传质量的控制方法。方法采用PCR扩增7株钩体的7种管家基因序列,进行多序列位点分析(multilocus sequence typing,MLST),并系统评价不同传代次数菌种的分子遗传稳定性。同时组织协作标定,验证... 详细信息

目的建立钩端螺旋体(简称钩体)疫苗菌种分子遗传质量的控制方法。方法采用PCR扩增7株钩体的7种管家基因序列,进行多序列位点分析(multilocus sequence typing,MLST),并系统评价不同传代次数菌种的分子遗传稳定性。同时组织协作标定,验证MLST方法用于疫苗菌种分子遗传质控的适用性。结果 7种钩体疫苗株呈现7种不同序列基因型。疫苗菌种在动物增毒前、后及在体外连续传代20代,细菌MSLT序列基因型未发生改变,证明钩体疫苗菌种具有良好的分子遗传稳定性。协作标定研究结果也表明,该方法具有良好的重复性,且结果易于标准化。结论建立了评价钩体疫苗菌种的分子遗传质控方法,疫苗菌株MLST序列基因型可作为一项候选的质量控制标准,完善了当前疫苗质控监管体系。

关键词：钩端螺旋体疫苗菌种质量控制分子遗传稳定性

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中国15群钩端螺旋体代表菌株分群血清参考品的研制

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中国生物制品学杂志 2018年第9期31卷 974-976页

作者：徐颖华李喆张影杜宗利辛晓芳叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的研制中国15群钩端螺旋体代表菌株的分群血清参考品。方法制备1批冻干钩端螺旋体15群候选分群参考血清,与国内15株代表菌株进行显微镜凝集试验,同时组织协作标定,并对冻干候选制剂进行稳定性分析。结果冻干的血清候选参考品外观色泽... 详细信息

目的研制中国15群钩端螺旋体代表菌株的分群血清参考品。方法制备1批冻干钩端螺旋体15群候选分群参考血清,与国内15株代表菌株进行显微镜凝集试验,同时组织协作标定,并对冻干候选制剂进行稳定性分析。结果冻干的血清候选参考品外观色泽均匀、形态饱满,水分含量均<3%。每个协作实验室检测结果的室内和室间变异系数(CV)均低于15%。各血清候选参考品于-20℃保存24个月的抗体滴度与协作标定及于-20℃保存12个月的结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论研制的中国15群钩端螺旋体代表菌株分群血清参考品具有良好的稳定性,可用于钩体菌株血清分群和菌体疫苗鉴别试验。

关键词：钩端螺旋体血清参考品显微镜凝集试验稳定性

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聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子平均修饰度高效液相色谱蒸发光散射检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2018年第7期31卷 758-762页

作者：李永红史新昌李响韩春梅饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子(PEGylated recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,PEG-rh G-CSF)平均修饰度的高效液相色谱蒸发光散射(high performance liquid chromatography coupled with evaporative light scattering detection,HPLC-ELSD)检测方法,并进行验证。方法采用Jupiter 5u C4 300A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以含0.1%三氟乙酸(TFA)的水溶液为A流动相,含0.1%TFA的乙腈为B流动相,流速1 mL/min,在35℃柱温条件下经分段线性洗脱的方式分离样品,蒸发光散射检测器漂移管温度90℃,载气流速2.0 L/min,用外标法和双对数校正曲线定量溶液中的游离PEG含量。采用蛋白酶K消化去除PEG-rhG-CSF的蛋白部分后,经相同方法测定溶液中的总PEG含量,并计算结合PEG的含量和PEG的平均修饰度。对方法的专属性、线性、精密性、准确性进行验证,并确定检测限(LOD)和定量限(LOQ)。结果本实验建立的HPLC-ELSD法可将PEG与PEG-rh G-CSF及其他辅料成分有效分离;PEG在50~400μg/mL范围内,上样量对数值与相应峰面积对数值之间呈良好的线性关系,拟合回归方程为:Y=1.969 X+0.652,r^2=0.999;精密性试验RSD为1.9%;LOD和LOQ分别为66和109μg/mL;PEG的平均回收率为98.1%。结论本实验建立的方法具有良好的专属性、精密度及准确性,可用于测定PEG-rh G-CSF的平均修饰度。

关键词：聚乙二醇重组人粒细胞刺激因子平均修饰度高效液相色谱法蒸发光散射检测

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广西壮族自治区儿童A群和C群流行性脑脊髓膜炎抗体水平调查

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中国生物制品学杂志 2018年第9期31卷 982-984,989页

作者：李亚南徐颖华赵丹毛琦琦陈苏京卢旭李茂光叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的了解儿童体内流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)自然抗体水平。方法采用血清体外杀菌试验(serum bactericidal antibody,SBA)检测广西壮族自治区3 822份未接种流脑疫苗0~6岁儿童血清样本的A群和C群流脑抗体滴度,计算抗体几何平均滴度(GMT... 详细信息

目的了解儿童体内流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)自然抗体水平。方法采用血清体外杀菌试验(serum bactericidal antibody,SBA)检测广西壮族自治区3 822份未接种流脑疫苗0~6岁儿童血清样本的A群和C群流脑抗体滴度,计算抗体几何平均滴度(GMT)和易感人群比例,并按不同组别(0~2月龄、3~5月龄、6~23月龄和2~6岁)进行统计分析。结果 6岁以下不同年龄组受试者的A群和C群流脑血清杀菌抗体GMT均小于1∶2;绝大多数受试者的A群和C群流脑血清杀菌抗体滴度低于1∶8,为流脑易感人群。不同年龄组之间A群流脑杀菌抗体滴度≥1∶8人群比例差异程度不同。而在2~6岁人群组中C群流脑杀菌抗体滴度≥1∶8的受试者比例显著高于其他年龄组(P<0.05)。结论 6岁以下儿童体内整体A群和C群流脑血清杀菌抗体水平低,为流脑易感人群,应接受流脑疫苗接种,并持续观察人群中流脑杀菌抗体动态变化。

关键词：流行性脑脊髓膜炎 A群 C群杀菌抗体儿童

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重组人促红素的异构体比例及体内比活性分析

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中国生物制品学杂志 2018年第8期31卷 841-845页

作者：李响史新昌范文红秦玺周勇饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的分析12家企业生产的重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的异构体比例及体内比活性。方法用全柱成像毛细管等电聚焦电泳检测12家企业的rhEPO原液的异构体,按《中国药典》三部(2015版)方法测定rhEPO原液的体内比活... 详细信息

目的分析12家企业生产的重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的异构体比例及体内比活性。方法用全柱成像毛细管等电聚焦电泳检测12家企业的rhEPO原液的异构体,按《中国药典》三部(2015版)方法测定rhEPO原液的体内比活性,同时采用多元回归及聚类分析等统计学方法分析各企业间rhEPO的相似性。结果按等电点区分并定义各异构体,在等电点3.6~5.1范围内,依次定义为异构体1~9。不同生产企业的rhEPO具有不同的异构体构成特征,主要异构体峰有5~8个,其中异构体4~7占比较高。各生产企业rhEPO原液的体内比活性相近,约为1.0×10~5 IU/mg。拟合获得九元多元回归线性方程S=0.00 P_1+3.18 P_2+1.71 P_3+1.21 P_4+0.98 P_5+0.93 P_6+1.16 P_7+0.66 P_8+0.00 P_9(S代表总体内比活性,S_i代表各类异构体体内比活性,P_i代表各类异构体的比例,体内比活性的单位为1.0×10~5 IU/mg),R^2=0.914 0。12个生产企业的rhEPO比较相近,其中厂家2和8最为相似。结论12个生产企业的rhEPO具有不同的异构体构成特征,体内比活性约为1.0×10~5 IU/mg,且各企业制品间比较相似。

关键词：重组人促红素异构体比活性多元回归

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UPLC测定人血白蛋白多聚体含量方法的实验室间比对与适用性论证

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中国药学杂志 2019年第20期54卷 1685-1691页

作者：王敏力侯书婷宋兰坤何永兵马力付龙邵泓韩治国侯继锋中国食品药品检定研究院 WHO生物制品标准化和评价合作中心卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京100050 北京大学生命科学院北京100871 沃特世科技上海有限公司上海201206 四川远大蜀阳药业有限责任公司成都610214 华兰生物工程股份有限公司河南新乡453003 沃特世|药典会联合实验室北京100050 上海市食品药品检验所上海201203

目的对UPLC测定人血白蛋白多聚体含量的方法进行实验室间比对和适用性论证。方法向6家实验室发放来自国内外生产企业的人血白蛋白样品20份、人血白蛋白国家参考品合计21份样品,采用UPLC测定多聚体含量并用HPLC方法平行测定,开展实验室... 详细信息

目的对UPLC测定人血白蛋白多聚体含量的方法进行实验室间比对和适用性论证。方法向6家实验室发放来自国内外生产企业的人血白蛋白样品20份、人血白蛋白国家参考品合计21份样品,采用UPLC测定多聚体含量并用HPLC方法平行测定,开展实验室间比对和UPLC方法的适用性论证。结果4家同时具备HPLC和UPLC条件的实验室平行比对显示,UPLC方法与现有药典HPLC方法实验室内结果比较无显著性差异(P>0.05)。6家实验室UPLC测定21份样品结果均值与4家实验室HPLC方法测定结果均值配对t检验(P>0.05),UPLC方法实验室间无显著性差异。6家协作实验室间UPLC法对21份样本平行测定结果标准差SD的均值仅为0.06,相对标准偏差RSD的均值仅为1.04%;而HPLC方法对21份样本平行测定标准差SD的均值为0.14,相对标准偏差RSD的均值为2.33%,提示UPLC方法测定结果的实验室间差异更小。结论UPLC测定人血白蛋白多聚体与现有HPLC方法实验室间比对结果一致性高,但UPLC方法更为快速高效,测定结果的实验室间差异性更小,显著优于现有HPLC方法。

关键词：超高效液相色谱法人血白蛋白多聚体含量分子排阻色谱血液制品实验室间比对

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