检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2012年第8期25卷 1030-1034,1042页

作者：吴雪伶樊金萍冯建平宋丽京孟淑芳李德富中国食品药品检定研究院细胞室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 中国医学科学院肿瘤医院实验动物室北京100021

目的建立生物技术产品用重组细胞中鼠细小病毒(Murine minute virus,MMV)污染的检测方法,并进行验证及初步应用。方法以NB324K细胞为指示细胞,建立MMV感染性检测方法,并以不同CCID50的MMV分别感染NB324K细胞,验证方法的灵敏度;通过设计... 详细信息

目的建立生物技术产品用重组细胞中鼠细小病毒(Murine minute virus,MMV)污染的检测方法,并进行验证及初步应用。方法以NB324K细胞为指示细胞,建立MMV感染性检测方法,并以不同CCID50的MMV分别感染NB324K细胞,验证方法的灵敏度;通过设计针对编码非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)保守序列的引物和探针,建立用于重组细胞中MMV检测的实时荧光定量PCR,并对其线性、特异性、精密性、灵敏度、最低检测限及试验可行性和干扰性进行验证;将NB324K细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合,建立NB324K细胞感染-PCR法,并通过对大量样本的检测,分析荧光定量PCR法和NB324K细胞感染-PCR法的可行性。结果 NB324K细胞感染试验的灵敏度为0.2 CCID50;荧光定量PCR检测方法最佳线性范围为1×108～1×104拷贝/μl,R2达0.99以上,特异性良好,与其他种属的细小病毒均无交叉反应,试验内和试验间Ct值的变异系数(CV)均小于5%,试验内病毒定量拷贝数的CV在20%～30%之间,试验间病毒定量拷贝数的CV在20%～50%之间,灵敏度为5×103拷贝/μl,最低感染性病毒颗粒检测限为2 CCID50。该方法能够用于细胞样品中MMV的检测,部分样品基质对病毒的检测具有一定的干扰性。NB324K细胞感染-PCR法的灵敏度为0.02 CCID50,检测时间可缩短为96 h,与荧光定量PCR法分别对47份样品进行检测,结果均为阴性。结论成功建立了MMV荧光定量PCR检测方法和NB324K细胞感染-PCR法,可应用于重组细胞中MMV污染的检测,为进一步提高生产用重组细胞的安全性奠定了基础。

关键词：小鼠细小病毒荧光定量PCR 重组细胞感染

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以百白破疫苗为基础的联合疫苗研究进展和展望

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中华预防医学杂志 2012年第9期46卷 853-856页

作者：卫辰侯启明张庶民陈平纡马霄中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 兰州生物制品研究所有限责任公司

百日咳、白喉和破伤风联合疫苗（DTP）作为最早纳入WHO扩大免疫规划（EPI）的疫苗，已经在预防和控制这3种传染病方面发挥了重要作用。20世纪70年代，由于接种灭活全细胞百白破疫苗（DTwP）后出现了严重的不良反应，

关键词：百白破疫苗联合疫苗扩大免疫规划不良反应百日咳 WHO 破伤风全细胞

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利用活体成像技术对5型腺病毒在小鼠体内生物分布和表达的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第11期32卷 925-929页

作者：刘强黄维金聂建辉赵晨燕孟淑芳李保卫邵荣光王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的研究5型腺病毒（Ad5）不同途径感染小鼠后体内代谢和组织分布特点，为Ad5载体疫苗的应用和改造提供参考。方法构建携带萤火虫荧光素酶基因的Ad5-Fluc病毒并利用活体成像技术分析其感染BALB／c小鼠后的蛋白表达和组织分布特点，以及... 详细信息

目的研究5型腺病毒（Ad5）不同途径感染小鼠后体内代谢和组织分布特点，为Ad5载体疫苗的应用和改造提供参考。方法构建携带萤火虫荧光素酶基因的Ad5-Fluc病毒并利用活体成像技术分析其感染BALB／c小鼠后的蛋白表达和组织分布特点，以及与裸鼠的感染特点进行比较。结果Ad5-Fluc肌肉途径感染BALB／c小鼠后出现肝脾转移表达的特点，且肌肉途径表达周期最长（〉60d），表达水平最高（P〈0.01）。病毒感染裸鼠后分布特点与BALB／c小鼠一致但表达周期明显延长。另外，用Ad35的纤突蛋白替代Ad5的纤突蛋白后的5型腺病毒载体（Ad5F35）在保持相似表达效率的同时消除了肝嗜性的特点。结论肌肉途径可能为5型腺病毒载体疫苗理想的免疫方式，同时Ad5F35病毒是一种理想的替代性腺病毒疫苗载体。

关键词：腺病毒体内分布活体成像 BALB c小鼠裸鼠

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A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗免疫学效果观察

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1190-1194,1197页

作者：李亚南梁丽李艳萍叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 广西壮族自治区疾病预防控制中心临床研究中心南宁530023

目的观察A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌(Meningococcal group A&C/Haemophilus influenzae type b,ACHib)多糖结合疫苗的免疫原性。方法采用开放、完全随机、盲态观察的方法,将1 800名观察对象分为临床试验组和对照组,每组各900... 详细信息

目的观察A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌(Meningococcal group A&C/Haemophilus influenzae type b,ACHib)多糖结合疫苗的免疫原性。方法采用开放、完全随机、盲态观察的方法,将1 800名观察对象分为临床试验组和对照组,每组各900名,两组又按3个年龄段分为3～5、6～11和12～71月龄组。试验组仅经上臂三角肌肌内注射试验疫苗(ACHib多糖结合疫苗),对照组分别经左右上臂同时注射两种对照疫苗(A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗和Hib结合疫苗)。3～5月龄组免疫3针,每针间隔1个月;6～11月龄组免疫2针,每针间隔1个月;12～71月龄组免疫1针。分别于免疫前、全程免疫后30～35 d采集静脉血,分离血清,采用功能性抗体杀菌力法检测A、C群脑膜炎球菌血清杀菌抗体滴度,间接ELISA法检测Hib抗体水平,并计算抗体阳转率及抗体增长倍数。结果免疫后,3个年龄段的试验组与对照组血清A、C群脑膜炎球抗体和Hib抗体阳转率差异均无统计学意义(P>0.05)。3个年龄段试验组与对照组易感和非易感人群A、C群脑膜炎球菌抗体滴度差异均无统计学意义(P均>0.05),而试验组Hib抗体水平低于对照组,且差异有统计学意义(P<0.001)。结论 ACHib多糖结合疫苗具有良好的免疫原性,可作为上述3种病原菌的预防制剂推广使用。

关键词：脑膜炎球菌多糖疫苗 b型流感嗜血杆菌结合疫苗免疫原性

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甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白的原核表达、纯化及其免疫保护性

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中国生物制品学杂志 2012年第6期25卷 672-675页

作者：王斌李娜董晓宇梁昊宇陈翠萍陈薇曾明军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的原核表达、纯化甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白,并检测其免疫原性和免疫保护性。方法采用PCR从甲型副伤寒沙门菌(CMCC 50973)基因组DNA中扩增btuB基因,插入原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋... 详细信息

目的原核表达、纯化甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白,并检测其免疫原性和免疫保护性。方法采用PCR从甲型副伤寒沙门菌(CMCC 50973)基因组DNA中扩增btuB基因,插入原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经分子筛和亲和层析纯化后,免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中抗BtuB IgG抗体效价,并用最小绝对致死剂量活菌攻毒,计算小鼠的保护率。结果重组原核表达质粒pET-30a-btuB经双酶切和测序证实构建正确;重组蛋白的相对分子质量约为67 000,表达量约为菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度大于90%,可与鼠抗His-Tag单抗特异性结合;纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠可获得高效价的抗BtuB IgG抗体,且可获得60%的保护率。结论成功原核表达并纯化了甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白,重组蛋白免疫原性良好,并能够为小鼠提供一定的保护作用。

关键词：甲型副伤寒沙门菌细菌外膜蛋白质类 BtuB蛋白原核细胞基因表达免疫原性免疫保护性

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猴腺病毒(SAdV)PCR检测方法的建立及初步应用

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中国比较医学杂志 2012年第12期22卷 41-47页

作者：张荣建贺争鸣中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立SAdV特异的PCR检测方法并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法比对分析多株SAdV序列,设计SAdV特异引物,优化PCR实验条件,建立的PCR方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品,阳性产物测序并构建进化树。... 详细信息

目的建立SAdV特异的PCR检测方法并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法比对分析多株SAdV序列,设计SAdV特异引物,优化PCR实验条件,建立的PCR方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品,阳性产物测序并构建进化树。结果经特异性和敏感性鉴定,在设计的5对引物中确定一对最佳引物,可以区分SAdV和MAD,ICH,CELO且可以检测到的最小DNA量为47.9 pg/mL。PCR方法检测实验猴群,阳性率49.2%,测序及进化分析表明,SAdV感染型别呈广泛基因多样性。主要分布在G亚属和以SAdV-49为代表的分支。结论经测序验证,PCR检测方法具有很好准确性,初步应用表明我国实验猴群中SAdV高度流行,应加强实验猴群及相关生物制品中SAdV的监测,避免人类感染SAdV的潜在风险。

关键词：猴腺病毒 PCR 检测应用猴

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HIV-1膜蛋白抗原表位突变对感染性以及中和特性的影响

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中国病毒病杂志 2012年第5期2卷 341-346页

作者：王文波聂建辉宋爱京王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室细胞室北京100050

目的对1株人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF_07BC亚型的膜蛋白进行突变,以暴露保守的中和表位,从而增强其中和活性。方法通过PCR定点突变获得突变克隆。以假病毒系统评价病毒感染力和改造效果。结果获得了FE、FE-2G12、FE-S365A、FE-22L、... 详细信息

目的对1株人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF_07BC亚型的膜蛋白进行突变,以暴露保守的中和表位,从而增强其中和活性。方法通过PCR定点突变获得突变克隆。以假病毒系统评价病毒感染力和改造效果。结果获得了FE、FE-2G12、FE-S365A、FE-22L、FE-N197D、FE-N197Q和FE-N301Q突变体,与其改造前的病毒株S939比较,在感染能力方面:FE-S365A增强约45%,而FE-N301Q下降约90%,N197Q失去了感染能力,其他突变体无明显变化;在中和活性方面:FE对2F5敏感性提高11倍以上;FE-N197D对单克隆抗体(单抗)2F5敏感性增强了63倍,对单抗4E10增强了3倍,对单抗b12增强了17倍,而且对5份阳性血浆的中和敏感性增强了2倍以上;FE-N301Q对单抗2F5的敏感性增强了119倍,对单抗4E10和b12的敏感性有一定增强,而且对6份阳性血浆的中和敏感性增强了2倍以上。FE-S365A和FE-F22L对病毒中和活性基本无影响。结论对HIV-1膜蛋白关键位点的改造能够显著增强病毒的中和敏感性。对改造后膜抗原的免疫原性需要进一步评价。

关键词： HIV膜蛋白定点突变假病毒

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基于HIV中和单抗4E10表位的免疫原设计和效果评价的初步研究

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中国病毒病杂志 2012年第5期2卷 335-340页

作者：聂建辉王文波宋爱京王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室细胞室北京100050

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白... 详细信息

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白CKS-4EP;将合成的4E10表位多肽通过Sulfo-SMCC连接至P64K载体蛋白构建结合型免疫原PKEP。用SDS-PAGE电泳的方法检测各种免疫原的分子质量和纯度。用假病毒中和试验评价豚鼠体内中和抗体水平。结果蛋白电泳显示所有免疫原的分子量大小正确,纯度在95%以上。GST-3EP能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体,3次免疫后5只豚鼠4只阳转,阳转的豚鼠中2只中和抗体水平IC50>200,另外两只抗体水平在100左右。对各组血清50倍稀释后中和抑制率进行统计分析,3EP组与佐剂对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的融合蛋白GST-3EP 3次免疫后能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体。

关键词：人类免疫缺陷病毒中和抗体融合蛋白偶联蛋白 4E10

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百日咳杆菌分子分型方法研究进展

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国际检验医学杂志 2012年第21期33卷 2621-2623页

作者：徐颖华张华捷侯启明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病，人群普遍易感，其中尤以婴幼儿多见。百日咳疫苗是预防百日咳最有效也是最经济的手段，然而，尽管世界上大多数国家自上世纪五十年代起就开始实施百日咳疫苗的免疫接种，使百日咳感染... 详细信息

百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病，人群普遍易感，其中尤以婴幼儿多见。百日咳疫苗是预防百日咳最有效也是最经济的手段，然而，尽管世界上大多数国家自上世纪五十年代起就开始实施百日咳疫苗的免疫接种，使百日咳感染率和病死率大大下降，但据WHO统计报道，2008年全世界仍有高达i9．5万的儿童死于百日咳及其并发症，且90％的病例来自不发达国家和发展中国家。即便是发达欧美国家或百日咳疫苗接种率很高的国家，百日咳发病率也有上升的趋势，即所谓的“百日咳再现”[1]。

关键词：百日咳杆菌分子分型诊断流行病学

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G亚属猴腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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中国病毒病杂志 2012年第6期2卷 432-435页

作者：张荣建贺争鸣中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立G亚属猴腺病毒(simian adenovirus,SAdV)特异的荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法根据G亚属SAdV基因保守区,设计特异性引物和TaqMan探针。制备重组质粒pGEM-TEasy-SAdVpo... 详细信息

目的建立G亚属猴腺病毒(simian adenovirus,SAdV)特异的荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法根据G亚属SAdV基因保守区,设计特异性引物和TaqMan探针。制备重组质粒pGEM-TEasy-SAdVpol标准品,建立标准曲线。经灵敏度、特异性、准确性和重复性评价后,检测33份猴粪便样本和4批次脊髓灰质炎疫苗。结果建立的FQ-PCR检测方法特异检测G亚属,与A、F亚属无交叉反应,准确性及重复性较好。标准曲线相关系数0.999,线性范围6lg(60～6×106拷贝),最低检出限可达6拷贝/μl。33份猴粪便样本中15份为阳性(45.5%),4批脊髓灰质炎疫苗均为阴性。结论建立的FQ-PCR检测方法可定量检测G亚属SAdV拷贝数,初步应用表明我国实验猴群中G亚属SAdV流行率较高,应加强监测避免人类感染的潜在风险。

关键词：猴腺病毒荧光定量PCR 检测方法

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