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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：徐康维邵铭刘书珍李长贵王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的建立蛋白定量结合电泳后荧光染色的方法检测单价流感疫苗中血凝素含量。方法在前期研究的基础上,采用PAGE后荧光染色方法,测定HA在总蛋白中比例,并与考马斯亮蓝染色方法进行了对比。结果荧光染色法与考马斯亮蓝染色法计算得出HA条... 详细信息

目的建立蛋白定量结合电泳后荧光染色的方法检测单价流感疫苗中血凝素含量。方法在前期研究的基础上,采用PAGE后荧光染色方法,测定HA在总蛋白中比例,并与考马斯亮蓝染色方法进行了对比。结果荧光染色法与考马斯亮蓝染色法计算得出HA条带比例基本一致。结论本研究建立的荧光法与考马斯亮蓝染色法一致性良好,且灵敏度更高,能够用于单价流感疫苗成品的效力检测。

关键词：流感疫苗替代方法染色方法流感病毒考马斯亮蓝染色法总蛋白含量 SDS-PAGE

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生物制品中外源因子检测现状及进展

生物制品中外源因子检测现状及进展

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：曹守春董关木王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

＜正＞生物制品（Biological products）是指以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料,应用传统技术或现代生物技术制成,用于人类疾病的预防、治疗和诊断。人用生物制品包括:细菌类疫苗、病毒类疫苗、血液制品、重组生物制品、体...

＜正＞生物制品（Biological products）是指以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料,应用传统技术或现代生物技术制成,用于人类疾病的预防、治疗和诊断。人用生物制品包括:细菌类疫苗、病毒类疫苗、血液制品、重组生物制品、体内外诊断试剂以及其他生物活性制剂等。作为生物制品的生产原料（生产基质）的安全性与终产品的安全性密切相关,而外源因子污染是影响生产基质安全性的一个极其重要的因素,生物制品生产基质及终产品中外源因子污染情况的监控是生产企业及各国药品管理机构最

关键词：

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PC-SOD活性测定方法的建立

PC-SOD活性测定方法的建立

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：付志浩毕华王军志饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的建立磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶(PC-SOD)的活性测定方法,并对方法进行方法学验证。方法采用经典的NBT还原法,SOD可竞争结合负氧离子,抑制显色,通过与活性标准品比较抑制显色的程度,计算样品的活性。对方法的专属性、线性与范... 详细信息

目的建立磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶(PC-SOD)的活性测定方法,并对方法进行方法学验证。方法采用经典的NBT还原法,SOD可竞争结合负氧离子,抑制显色,通过与活性标准品比较抑制显色的程度,计算样品的活性。对方法的专属性、线性与范围、精密度进行验证。结果方法符合专属性要求;SOD线性范围0.23μg/ml～500μg/ml,PC-SOD线性范围0.46μg/ml～1000μg/ml,R2≥0.99;SOD原液活性测定结果为5315U/mg±427U/mg,PC-SOD原液测定结果为2774U/mg±323U/mg,PC-SOD成品测定结果为2627U/mg±232U/mg,RSD≤20%,符合一般生物制品活性检测精密度要求。结论建立并验证了PC-SOD活性测定方法,可用于PC-SOD的质量控制。

关键词： SOD

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沙眼衣原体疫苗的研发

沙眼衣原体疫苗的研发

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：么山山曾明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

沙眼衣原体是一种专性胞内寄生菌,为当前细菌性性传播疾病（STIs）的首要原因。据世界卫生组织估计,全世界每年生殖道衣原体感染的新发病例超过9千万。与筛查或抗生素治疗相比,疫苗接种更经济,并对全球控制沙眼衣原体感染有更大的影响,... 详细信息

沙眼衣原体是一种专性胞内寄生菌,为当前细菌性性传播疾病（STIs）的首要原因。据世界卫生组织估计,全世界每年生殖道衣原体感染的新发病例超过9千万。与筛查或抗生素治疗相比,疫苗接种更经济,并对全球控制沙眼衣原体感染有更大的影响,普遍认为疫苗接种是降低沙眼衣原体感染率的最好办法。尽管多年来已做出了许多努力,但目前仍没有可以有效保护沙眼衣原体生殖道感染的疫苗。本文对开发针对生殖道沙眼衣原体感染疫苗的研究进展进行综述。

关键词：沙眼衣原体感染疫苗

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Vero细胞DNA定量国家参考品的制备及适用性验证

Vero细胞DNA定量国家参考品的制备及适用性验证

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：曹守春董关木唐建蓉李加刘景华石磊泰李长贵王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:制备Vero细胞DNA参考品,使宿主DNA残留量检测中的斑点杂交试验操作进一步标准化。方法 :提取Vero细胞基因组DNA,并采用Hind III酶切,克隆、测序进行鉴定。之后由10家实验室协作标定DNA浓度,稀配至40ng/mL,以牛血清白蛋白作为冻干... 详细信息

目的:制备Vero细胞DNA参考品,使宿主DNA残留量检测中的斑点杂交试验操作进一步标准化。方法 :提取Vero细胞基因组DNA,并采用Hind III酶切,克隆、测序进行鉴定。之后由10家实验室协作标定DNA浓度,稀配至40ng/mL,以牛血清白蛋白作为冻干赋形剂,安瓶分装,装量为0.5mL,充氮气后熔封。制备完成后由10家实验室进行灵敏度,线性和稳定性验证。结果 :制备了一批Vero细胞DNA,Hind III酶切,琼脂电泳可见典型172bp梯度条带,获得重组质粒pET30a-172,测序后与Genbank序列比对同源性为99.4%。Vero细胞DNA参考品原液协作标定浓度为64.0±1.9μg/mL,OD.260/OD.280=1.9,Vero细胞DNA参考品灵敏性为1～5pg/dot,最高可达1pg/dot,浓度与斑点显色成比例,具有良好线性,37℃放置2周,4周后与-20℃常规保存下的同步试验,灵敏度一致,结果显示稳定性良好。结论 :成功建立适用于斑点杂交用的Vero细胞DNA定量参考品,该参考品的建立对疫苗宿主DNA残留检测的斑点杂交方法的标准化具有重要的理论是实际应用价值。

关键词： Vero细胞基因组DNA 定量参考品斑点杂交标准化

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液质联用分析rhTNK-tPA的一级结构

液质联用分析rhTNK-tPA的一级结构

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：陶磊饶春明丁有学郭莹王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:液质联用分析重组人组织纤溶酶原激活物变构体(TNK-tPA)的一级结构。方法 :应用液质联用的方法测定该样品的分子量,并对该样品进行还原、烷基化、酶解等处理后测定其液质肽图,通过液质肽图的解析对该样品的氨基酸序列及翻译后修饰... 详细信息

目的:液质联用分析重组人组织纤溶酶原激活物变构体(TNK-tPA)的一级结构。方法 :应用液质联用的方法测定该样品的分子量,并对该样品进行还原、烷基化、酶解等处理后测定其液质肽图,通过液质肽图的解析对该样品的氨基酸序列及翻译后修饰进行分析和鉴定。结果 :测定了质谱分子量,与理论值的误差小于0.01%;对其全部氨基酸序列进行了确证,包括N-端序列、C-端序列及氨基酸突变区的序列;该蛋白第61位的苏氨酸部分发生O-糖基化修饰,糖基为岩藻糖;其N103、N184、N448存在N-糖基化修饰,其中N184为部分糖基化修饰,糖基类型均为复杂型N-糖。另外,该蛋白第207位的蛋氨酸部分发生氧化。结论 :应用液质联用仪结合不同的样品处理方式,可快速、准确的对复杂糖蛋白的结构进行鉴定,所用方法可为同类制品的结构确证及质量控制提供参考。

关键词：液质联用 TNK-tPA 一级结构

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HIV假病毒体系在病毒特性研究和检测中的应用

HIV假病毒体系在病毒特性研究和检测中的应用

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：王佑春卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室、细胞室、中国食品药品检定研究院

HIV假病毒体系最近几年得到了很大的发展,其中以TZM-bl细胞为靶细胞的假病毒单周期感染实验应用最广泛。该方法包括病毒生产和病毒感染检测两个部分,假病毒生产是通过两质粒共转染真核表达细胞(如293T、293 FT、293TT等)实现的,其中一... 详细信息

HIV假病毒体系最近几年得到了很大的发展,其中以TZM-bl细胞为靶细胞的假病毒单周期感染实验应用最广泛。该方法包括病毒生产和病毒感染检测两个部分,假病毒生产是通过两质粒共转染真核表达细胞(如293T、293 FT、293TT等)实现的,其中一个质粒表达全长的env基因,另一个质粒表达除env以外的HIV-1其它所有基因(backbone plasmid,骨架质粒),只有骨架质粒被转录成病毒基因组RNA并包装入假病毒中,因此产生的假病毒只具有单轮感染的能力,而不具有产生子代病毒的复制能力。TZM-bl(JC53BL-13)

关键词：假病毒 HIV 耐药性检测病毒特性

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百日咳鲍特菌基因组多态性分析

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国际检验医学杂志 2012年第22期33卷 2691-2694页

作者：徐颖华卫辰王丽婵骆鹏侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支... 详细信息

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支气管黏附因子(tcfA)和百日咳毒素基因上游启动子区域(ptxP)3种等位基因序列分析结果显示,共发现3种等位基因组合型:Prn1/ptxP1/tcfA2、Prn2/ptxP3/tcfA2和Prn3/ptxP1/tcfA2,所占比例分别为71.43%、19.05%和9.52%。MLVA法将21株分离菌株分成了12个不同的MLVA型,MLVA-136型和MLVA-152型为主要流行MLVA型,所占比例分别为28.57%和19.05%,并发现1种新MLVA型菌株。统计学分析表明MLVA法较等位基因分型法具有更高的分辨率。结论国内部分地区百日咳杆菌流行菌株与欧洲其他国家不同,掌握百日咳杆菌分子流行病学的第一手资料,对有效预防和控制百日咳的流行以及制定新的百日咳疫苗免疫策略具有指导意义。

关键词：博德特菌百日咳基因组多态观察遗传

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低抗原含量百日咳疫苗效力评价研究

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国际检验医学杂志 2012年第21期33卷 2561-2562,2564页

作者：徐颖华骆鹏王丽婵卫辰侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所... 详细信息

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所获得低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验效力结果数据均较低(<1.1IU/mL),中检院计算出的效价均在国外实验室分析得出效价的95%可信区间内。结论 MICA方法可应用于低抗原含量百日咳疫苗效力检测分析,该研究为进一步确定中国低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验检定标准奠定了基础。

关键词：百日咳菌苗效力改良小鼠脑腔攻击试验

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基于HIV中和单抗4E10表位的免疫原设计和效果评价的初步研究

基于HIV中和单抗4E10表位的免疫原设计和效果评价的初步研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：聂建辉王文波宋爱京王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室细胞室

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白... 详细信息

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白CKS-4EP;将合成的4E10表位多肽通过Sulfo-SMCC连接至P64K载体蛋白构建结合型免疫原PKEP。用SDS-PAGE电泳的方法检测各种免疫原的分子量和纯度。用假病毒中和试验评价豚鼠体内中和抗体水平。结果蛋白电泳显示所有免疫原的分子量大小正确,纯度在95%以上。GST-3EP能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体,3次免疫后5只豚鼠4只阳转,阳转的豚鼠中2只中和抗体水平IC50>200,另外两只抗体水平在100左右。对各组血清50倍稀释后中和抑制率进行统计分析,3EP组与佐剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的融合蛋白GST-3EP 3次免疫后能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体。

关键词：人类免疫缺陷病毒中和抗体融合蛋白偶联蛋白 4E10

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