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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第11期42卷 875-879页

作者：刘晶晶李淼李玉华中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的探讨可能影响mRNA疫苗粒径和粒径分布的因素。方法在不同离子强度缓冲液、pH值、稀释剂类型、稀释度和检测仪器条件下,采用动态光散射法对3批mRNA疫苗的粒径和粒径分布进行检测。结果稀释剂的离子强度增大时,疫苗的粒径随之增大,粒... 详细信息

目的探讨可能影响mRNA疫苗粒径和粒径分布的因素。方法在不同离子强度缓冲液、pH值、稀释剂类型、稀释度和检测仪器条件下,采用动态光散射法对3批mRNA疫苗的粒径和粒径分布进行检测。结果稀释剂的离子强度增大时,疫苗的粒径随之增大,粒径分布不发生改变;稀释剂的pH值增加时,疫苗的粒径随之增大,当pH值达到弱碱性时,粒径分布出现明显变化;选择不同溶液作为稀释剂时,mRNA疫苗的粒径均不同,粒径分布无明显变化;疫苗稀释度≤100时,粒径和粒径分布均无明显改变;不同仪器参数下疫苗的粒径和粒径分布差异无统计学意义,但粒径分布略有不同。结论粒径和粒径分布受稀释剂、稀释度和检测仪器等因素影响,在生产与质控中应予以关注。

关键词：粒径粒径分布 mRNA疫苗动态光散射

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sIPV疫苗D抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2023年第10期36卷 1230-1234,1241页

作者：徐康维朱文慧宋彦丽英志芳王剑锋权娅茹李长贵中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北102629 北京市药品检验研究院病毒疫苗室北京102206

目的建立牛多抗对兔多抗夹心ELISA方法检测Sabin株脊灰病毒灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus Vaccine,sIPV)D抗原含量,并对建立的方法进行验证。方法分别采用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sIPV疫苗原液作为抗原制备兔多抗,并通过间接EL... 详细信息

目的建立牛多抗对兔多抗夹心ELISA方法检测Sabin株脊灰病毒灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus Vaccine,sIPV)D抗原含量,并对建立的方法进行验证。方法分别采用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sIPV疫苗原液作为抗原制备兔多抗,并通过间接ELISA法检测其效价及特异性。以牛多抗为包被抗体、兔多抗为显示抗体建立检测D抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并对方法的准确度、精密度及D抗原专属性进行验证。用建立的方法检测国内5家企业sIPV疫苗样品。结果制备获得型别特异性好、效价高的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型兔多抗,并成功建立了双抗体夹心ELISA方法。采用四参数拟合,3型别标准曲线均具有良好的线性关系,R^(2)均>0.99。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各试验加标回收率均为80%~120%,各浓度平均回收率分别为98.11%、97.41%、98.66%;重复性与中间精密度CV均<10%;能够对D/C抗原进行区分。建立的方法对5家企业生产的sIPV疫苗均能够进行D抗原定量检测。结论成功建立了检测sIPV疫苗D抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,该方法准确度、精密度良好,具有一定的D抗原特异性,能够对不同厂家生产的疫苗进行检测。

关键词： Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗 D抗原酶联免疫吸附试验抗体

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利用实验设计优化和建立抗CD38单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法

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药学学报 2022年第5期57卷 1459-1464页

作者：刘春雨于传飞李欣付志浩崔永霏郭璐韵王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室/国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 广州市药品检验所广州510160

利用实验设计(design of experiment,DoE)方法建立抗CD38单抗(monoclonal antibody,mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,Daudi细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^(TM)Lucifer‐ase Assay system)检测抗CD38单抗的ADCP生物学活性,并运用DoE方法进行实验参数优化。结果显示,抗CD38单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法经统计学实验设计对多个实验参数进行筛选和优化,确定抗体工作浓度为800~20.81 ng·mL^(-1),靶细胞和效应细胞的接种量分别为每孔7.5×10^(4)和2.5×10^(4)个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(59.97±4.74)%、(82.44±5.15)%、(110.69±11.71)%、(129.23±5.22)%和(162.15±3.66)%;回收率在103%~120%,RSD均小于11%,线性检测范围为50%~150%。本研究利用DoE设计成功筛选、优化和建立基于报告基因的抗CD38单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗CD38单抗ADCP生物学活性的评价方法。

关键词：抗CD38单抗抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性实验设计 Plackett-Burman设计优化验证

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纳米级差示扫描荧光法在阿达木单抗热分析中的应用

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药物分析杂志 2023年第1期43卷 153-161页

作者：郭莎贾哲贺鹏飞田向斌于传飞武刚崔永霏刘春雨王兰中国食品药品检定研究院北京102629 国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 烟台大学药学院烟台264005 甘肃省药品检验研究院兰州730070

目的:探讨纳米级差示扫描荧光法(nanoDSF法)检测阿达木单抗熔解温度(T_(m))的可行性及潜在应用。方法:采用nanoDSF技术对0.25、0.5、1、5、10、50 mg·mL^(-1)6个不同浓度下的阿达木单抗T_(m)进行检测,检测过程中参数设置:升温区间... 详细信息

目的:探讨纳米级差示扫描荧光法(nanoDSF法)检测阿达木单抗熔解温度(T_(m))的可行性及潜在应用。方法:采用nanoDSF技术对0.25、0.5、1、5、10、50 mg·mL^(-1)6个不同浓度下的阿达木单抗T_(m)进行检测,检测过程中参数设置:升温区间为25~95℃,升温速率为1℃·min^(-1),收集内源性荧光信号测得T_(m),重复检测5次。通过将阿达木单抗与制剂缓冲液的T_(m)检测结果进行比较,确认方法的特异性;通过6个不同浓度下阿达木单抗5次T_(m)检测结果的离散度评估,得到方法的精密度;通过将0.25、0.5、1 mg·mL^(-1)3个浓度下阿达木单抗的T_(m)检测结果与相应浓度下的差式扫描量热法(DSC法)检测结果进行比较,对nano DSF技术的检测准确性进行评价;进行上述方法学验证后,将该技术应用于阿达木单抗原研药与6种生物类似药T_(m)的相似性评价。此外,本研究还通过收集抗体分子在升温过程中的散射光信号,对6个不同浓度阿达木单抗的起始聚集温度(Tagg)进行检测。结果:nanoDSF技术能够检测单抗样品的T_(m),而相应制剂缓冲液则并无特征性曲线,说明该方法具有特异性;nanoDSF技术检测0.25、0.5、1、5、10、50 mg·mL^(-1)6个不同浓度的样品,每个样品各检测5次,T_(m)值检测结果间RSD均在1%以内,说明方法具有较好的精密度;与DSC法的结果相比,nanoDSF普遍低2~3℃,但2种方法测量的T_(m)具有较好的相关性,r在0.99以上;nano DSF技术测得0.25、0.5、1、5、10、50 mg·mL^(-1)6个不同浓度阿达木单抗的T_(m)图谱基本一致,T_(m)1和T_(m)3检测结果也没有明显差异,T_(m)2有随着浓度升高而降低的趋势。在阿达木单抗原研药和生物类似药的相似性研究中,nanoDSF法与DSC法的检测结果间也是相关的;此外,在检测T_(m)的同时检测起始聚集温度(Tagg),随着浓度升高,检测到的Tagg呈逐渐下降的趋势,这对T_(m)检测结果的解释起到一定的提示作用。结论:nano DSF技术具有较好的特异性、精密度、准确性和较广的浓度适用范围,适用于原研药与生物类似药热稳定性的相似性研究等。

关键词：纳米级差示扫描荧光法内源性荧光差示扫描量热法阿达木单抗原研药生物类似药熔解温度起始聚集温度

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3种mRNA疫苗dsRNA残留量检测方法的比较

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药物分析杂志 2022年第11期42卷 1941-1946页

作者：刘晶晶李玉华中国食品药品检定研究院、国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的:对mRNA疫苗dsRNA残留量的常用检测方法均相时间分辨荧光法(homogeneous time resolved fluorescence,HTRF法)、酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法)和斑点杂交法(Dot Blot法)进行比较研究,为mRNA疫苗质量控制提供技术支撑。方法:分别根据HTRF法、ELISA法和Dot Blot法特点,配制相应浓度标准品,通过建立标准曲线,计算样品dsRNA浓度,考察3种方法的适用性、准确度、精密度、定量限和曲线拟合关系。结果:HTRF法检测dsRNA残留量的回收率为110.7%,重复性的RSD为5.6%,中间精密度的RSD≤19.0%,在1.56~100.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9993);ELISA法检测dsRNA残留量的回收率为103.2%,重复性的RSD为19.5%,中间精密度的RSD≤11.7%,在7.81~500.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9998);Dot Blot法检测dsRNA残留量的回收率为101.5%,重复性的RSD为18.5%,中间精密度的RSD≤42.2%,在800.00~80000.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9992)。HTRF法和ELISA法的准确度和精密度良好,HTRF法可检测较低浓度的dsRNA残留量。结论:3种方法均可有效检测mRNA疫苗中的dsRNA残留量。

关键词： mRNA疫苗 dsRNA残留量检测均相时间分辨荧光法酶联免疫法斑点杂交法

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HIV疫苗临床试验研究进展

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中国艾滋病性病 2022年第2期28卷 220-227页

作者：聂玲玲黄维金中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法与标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

近年来虽然艾滋病防治取得了巨大进展,HIV疫苗依然是人类彻底战胜艾滋病的重要"武器"。HIV疫苗的研发历程坎坷,多种技术路线的疫苗进入临床试验阶段,但尚未获得成功。本文通过查阅US Clinical Trials数据库(***)和中国药物临... 详细信息

近年来虽然艾滋病防治取得了巨大进展,HIV疫苗依然是人类彻底战胜艾滋病的重要"武器"。HIV疫苗的研发历程坎坷,多种技术路线的疫苗进入临床试验阶段,但尚未获得成功。本文通过查阅US Clinical Trials数据库(***)和中国药物临床试验登记与信息公示平台数据库,根据疫苗的技术路线,包括传统疫苗、重组亚单位蛋白疫苗、重组病毒载体类疫苗、核酸疫苗,总结了近十年进入临床试验阶段的HIV疫苗,重点阐述了进入临床Ⅲ期的疫苗和最有潜力的疫苗。

关键词：艾滋病病毒疫苗临床试验

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以CD79b为靶点的抗体偶联药物的一级结构表征

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中国药学杂志 2022年

作者：李萌赵雪羽武刚王文波段茂芹于传飞王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室中国药科大学

目的：对基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物（antibody-drug conjugate，ADC）抗CD79b单抗-vc-MMAE进行一级结构表征。方法：本实验采用超高效液相色谱-串联质谱（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry， UPLC-MS）对抗CD79b单抗-vc-MMAE的完整分子量、轻重链亚基分子量以及药物抗体偶联比（drug-to-antibody ratio，DAR）进行测定；采用UPLC-MS/MS对抗CD79b单抗-vc-MMAE的序列覆盖度、偶联位点及位点占有率和糖基化位点进行分析，对抗CD79b单抗进行二硫键定位。结果：抗CD79b单抗-vc-MMAE的完整分子量包括：ADC药物的未加药形式的分子量为147.893 kDa、修饰2个小分子药物的分子量为150.527 kDa、修饰4个小分子药物的分子量为153.161 kDa以及修饰6个小分子药物的分子量为155.796 kDa；抗CD79b单抗-vc-MMAE的轻重链亚基分子量包括：轻链的分子量为23.726 kDa、轻链修饰1个小分子药物的分子量为25.043 kDa，重链的分子量为48.778 kDa、重链修饰1个小分子药物的分子量为50.095 kDa、重链修饰2个小分子药物的分子量为51.412 kDa、重链修饰3个小分子药物的分子量为52.728 kDa；抗CD79b单抗-vc-MMAE的DAR为3.60；抗CD79b单抗-vc-MMAE的序列覆盖度为100%；抗CD79b单抗-vc-MMAE的药物偶联位点及位点占有率：轻链C218和重链C220、C226和C229的位点占有率分别为80.46%、80.39%、21.85%以及16.98%。抗CD79b单抗-vc-MMAE的糖基化位点为重链N297；抗CD79b单抗的16对二硫键全部检出。结论：表征了抗CD79b单抗-vc-MMAE的一级结构，为该类ADC药物一级结构的研究提供参考依据。

关键词：抗体偶联药物药物抗体偶联比药物修饰位点一级结构

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人乳头瘤病毒疫苗交叉保护作用研究进展

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中国生物制品学杂志 2023年

作者：刘欢耿彦生黄维金张黎河北大学公共卫生学院河北省公共卫生安全重点实验室中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法与标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）是人类生殖道常见的性传播病毒之一，能够引起宫颈癌、生殖器疣等相关疾病的发生。预防性HPV疫苗除能有效预防疫苗型别HPV感染，还对非疫苗型别HPV感染具有交叉免疫保护作用。本文就不同型别HP... 详细信息

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）是人类生殖道常见的性传播病毒之一，能够引起宫颈癌、生殖器疣等相关疾病的发生。预防性HPV疫苗除能有效预防疫苗型别HPV感染，还对非疫苗型别HPV感染具有交叉免疫保护作用。本文就不同型别HPV的交叉保护机制、已上市HPV疫苗的交叉免疫保护作用以及新型预防性疫苗的研究进展作一综述，以期为新一代广谱预防性HPV疫苗的研发提供参考。

关键词：人乳头瘤病毒疫苗交叉保护免疫保护

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人胰岛素及其类似物UPLC-MS/MS全序列分析研究

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药物分析杂志 2022年第1期42卷 13-22页

作者：胡馨月丁晓丽陈莹张慧李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的:建立采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人胰岛素及其类似物全序列的方法。方法:该方法以人胰岛素为主要研究对象,首先对其进行还原烷基化前处理,后进行UPLC-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC peptide BEH C_(18)(100 mm&#... 详细信息

目的:建立采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人胰岛素及其类似物全序列的方法。方法:该方法以人胰岛素为主要研究对象,首先对其进行还原烷基化前处理,后进行UPLC-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC peptide BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm,300A)色谱柱,流动相A为0.1%甲酸/水溶液,流动相B为0.1%甲酸/乙腈溶液,梯度洗脱(0~10 min,3%B→60%B;10~10.5 min,60%B→95%B;10.5~14 min,95%B;14~14.5 min,95%B→3%B;14.5~20 min,3%B),流速0.3 mL·min^(-1),柱温50℃;采用电喷雾离子源正离子(ESI;)扫描,通过优化质谱参数,对人胰岛素及其类似物进行“top-town”全序列的测定分析,并对人胰岛素的序列测定方法进行了深入的研究,同时考察该方法对门冬胰岛素和赖脯胰岛素的适用性。结果:该方法能够较好地覆盖人胰岛素A和B链的全序列,通过b/y离子分析,5个高强度b/y离子的离子强度RSD在20%之内,A链与B链一级质量数准确,其精密度、准确度良好;该方法可区分与其他胰岛素类似物的序列的不同,专属性良好,且对门冬胰岛素和赖脯胰岛素具有良好的适用性。结论:该方法操作简便,准确性好,专属性强,为胰岛素及其类似物的全序列测定提供了数据支持。

关键词：糖尿病人胰岛素及其类似物超高效液相色谱-串联质谱全序列测定 N端序列测定

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以CD79b为靶点抗体偶联药物结合活性的评价研究

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药物分析杂志 2022年第10期42卷 1754-1762页

作者：李萌赵雪羽俞小娟杨雅岚龙彩凤于传飞王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 中国药科大学南京211198

目的:建立抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)法和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法评价其结合活性。方法:采用SPR法,使用Protein A芯片,测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与其靶点CD79b蛋白之间的动力学常数包括结合常数(K_(a))和解离常数(K_(d))、亲和力常数(K_(D))、半最大效应浓度(half maximal effective concentration,EC_(50))及相对效价;采用经典ELISA法测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC_(50)及相对效价。结果:经3次实验测定,抗CD79b单抗与CD79b的K_(a)为(2.61±0.14)×10^(6)L·mol^(-1)·s^(-1),K_(d)为(1.87±0.12)×10^(-2)s^(-1),K_(D)为(7.17±0.30)×10^(-9)mol·L^(-1),RSD均<10%;抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的K_(a)为(2.99±0.26)×10^(6)L·mol^(-1)·s^(-1),K_(d)为(1.46±0.04)×10^(-2)s^(-1),K_(D)为(4.88±0.31)×10^(-9)mol·L^(-1),RSD均<10%。经3次实验测定,SPR法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC_(50)为(78.68±6.35)ng·mL^(-1),相对效价为(84.62±6.63)%,RSD均<10%;测得抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC_(50)为(35.93±0.75)ng·mL^(-1),相对效价为(84.74±1.76)%,RSD均<5%。经3次实验测定,ELISA法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC_(50)为(22.66±0.41)ng·mL^(-1),相对效价为(95.70±1.74)%,RSD均<5%;测得抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC_(50)为(69.19±1.71)ng·mL^(-1),相对效价为(97.64±2.39)%,RSD均<5%,SPR和ELISA 2种方法结果基本一致。结论:建立了抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的SPR法,并对靶点结合的动力学、亲和力进行评价,与ELISA方法在EC_(50)及相对效价方面进行了对比,为该类抗体偶联药物的研发提供参考。

关键词：抗体偶联药物表面等离子共振酶联免疫吸附测定结合活性亲和力常数相对效价

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