检索结果-内蒙古大学图书馆

基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用

药物分析杂志 2019年第1期39卷 51-61页

作者：刘春雨王馨于传飞徐刚领王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629 福建省医疗器械与药品包装材料检验所福州350001

目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay system)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价。结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng·mL^(-1),1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h。该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数(fold of induction,FI)及半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的RSD均小于10%; 4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)%、(71.18±1.55)%、(133.17±9.91)%以及(166.55±15.73)%;对应的回收率分别为(92.53±4.01)%、(94.91±2.07)%、(106.54±7.93)%、(111.04±10.48),RSD均小于10%,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应评价。结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。

关键词：抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用生物学活性荧光素酶检测系统报告基因

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流感减毒活疫苗诱导的粘膜反应IgA抗体检测方法的可行性分析

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药物分析杂志 2019年第11期39卷 2041-2046页

作者：赵慧周慧明赵雪袁若森李娟姜春来李长贵中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 长春百克生物科技股份公司研发部长春130012

目的:对建立的检测流感病毒特异性IgA抗体检测方法进行验证,并且用于评价流感减毒活疫苗(LAIV)粘膜免疫反应。方法:使用来自英国生物制品所(NIBSC)的流感抗原国际参考品作为包被抗原,检测鼻咽拭子阳性样品,确定流感病毒型别特异性的IgA... 详细信息

目的:对建立的检测流感病毒特异性IgA抗体检测方法进行验证,并且用于评价流感减毒活疫苗(LAIV)粘膜免疫反应。方法:使用来自英国生物制品所(NIBSC)的流感抗原国际参考品作为包被抗原,检测鼻咽拭子阳性样品,确定流感病毒型别特异性的IgA抗体滴度,考察该方法的特异性;通过对高低不同抗体滴度的阳性样本多次平行检测来评价该方法的重复性;在此基础上,对526份鼻咽拭子样本进行IgA抗体滴度检测。结果:只针对包被抗原阳性的样品检测到高滴度的IgA抗体,其他型别的抗体未检测到,方法特异性显著。鼻咽拭子IgA抗体检测方法的组间重复性、组内重复性、方法重复性良好。检测接种LAIV疫苗免疫前后的鼻咽拭子样本,疫苗组H1N1、H3N2以及B型IgA抗体几何平均滴度(GMT)接种前后的比值分别为1.15、1.45和1.18,均高于安慰剂组;疫苗接种组IgA抗体滴度高于免疫前2倍的比率,也高于安慰剂对照组(P<0.05)。鼻咽拭子IgA抗体检测结果与血清样本HI抗体结果缺乏相关性(P<0.001)。结论:建立的流感病毒特异性IgA抗体的检测方法能够满足LAIV粘膜免疫评价的需要。

关键词：流感减毒活疫苗(LAIV) IgA 黏膜免疫间接酶联免疫吸附试验

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第2代WHO百日咳毒素国际标准品的协作标定

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中国新药杂志 2018年第16期27卷 1855-1860页

作者：卫辰晁哲吴燕王丽婵骆鹏马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:建立第2代WHO百日咳毒素国际标准品。方法:以第1代WHO百日咳毒素国际标准品为协作标定的标准品,对英国国家生物制品检定所提供的待标品和中国食品药品检定研究院内部参考品进行国际单位值测定和稳定性测定。测定方法为组胺致敏试验... 详细信息

目的:建立第2代WHO百日咳毒素国际标准品。方法:以第1代WHO百日咳毒素国际标准品为协作标定的标准品,对英国国家生物制品检定所提供的待标品和中国食品药品检定研究院内部参考品进行国际单位值测定和稳定性测定。测定方法为组胺致敏试验、CHO细胞簇集试验以及3项生化试验方法。结果:中国食品药品检定研究院完成了组胺致敏、CHO细胞簇集2项试验以及1项生化试验。结论:NIBSC经过对来自12个国家的14个实验室的结果进行统计学处理后,赋值第2代WHO百日咳毒素国际标准品组胺致敏活性为每支1 813 IU、CHO细胞簇集活性为每支680 IU,储存和运输稳定性符合要求。

关键词：国际标准品百日咳毒素组胺致敏 CHO细胞簇集

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b型流感嗜血杆菌荚膜多糖定量~1H-NMR法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2019年第9期32卷 1010-1014,1019页

作者：许美凤毛琦琦赵丹陈苏京李亚南李茂光叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的建立测定b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖绝对含量的定量1H核磁共振法(nuclear magnetic resonance,NMR,即1H-NMR法),并进行验证。方法精密称取Hib荚膜多糖粉末,重水溶解,配制一定浓度的供试品多糖溶液... 详细信息

目的建立测定b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖绝对含量的定量1H核磁共振法(nuclear magnetic resonance,NMR,即1H-NMR法),并进行验证。方法精密称取Hib荚膜多糖粉末,重水溶解,配制一定浓度的供试品多糖溶液;采用Bruker Avance-600型超导核磁共振波谱仪,设置NMR实验参数条件,以重水为溶剂,二甲基砜为内标物建立定量1H-NMR法进行多糖含量测定;对该方法进行专属性、准确度、线性、精密度及耐用性验证;应用建立的定量1H-NMR法及化学法测定5批Hib荚膜多糖含量。结果经1H-NMR谱、13C-NMR谱、1H-1H COSY谱及1H-13C HSQC谱归属显示,Hib荚膜多糖的定量峰(δH5. 06)及内标物二甲基砜的定量峰(δH3. 14)分离良好,互不干扰,且不受样品内其他谱峰的干扰,方法专属性良好;供试品溶液加入100、150及200μL国际标准品,加标回收率在101%~102%;Hib多糖质量浓度在1~20 mg/mL范围,线性方程为y=0. 234 3 x-0. 002 6(R2=1. 000 0);供试品溶液6次重复性及中间精密度测定的定量峰积分面积比值的RSD分别为0. 78%及0. 60%,精密度良好;5 mg/mL的供试品溶液在不同脉冲角度及不同延迟时间定量峰积分面积比的RSD分别为0. 07%及0. 13%,耐用性良好。5批荚膜多糖经定量1H-NMR法及化学法检测,核糖含量均在《中国药典》三部(2015版)规定合格范围内(320~410 mg/g)。结论成功建立了测定Hib荚膜多糖含量的定量1H-NMR法,该方法具有良好的专属性、准确度、线性、精密度及耐用性,为Hib疫苗的质量控制研究奠定了基础。

关键词： b型流感嗜血杆菌荚膜多糖定量~1H-NMR法二甲基砜

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液相色谱-串联质谱法测定百日咳和百白破疫苗中百日咳杆菌气管细胞毒素

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色谱 2019年第2期37卷 155-161页

作者：龙珍卫辰郭志谋马霄李月琪姚劲挺冀峰李长坤黄涛宏岛津企业管理(中国)有限公司北京100020 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 中国科学院分离分析化学重点实验室中国科学院大连化学物理研究所辽宁大连116023

百日咳杆菌气管细胞毒素(TCT)是一种引起百日咳及百日咳相关疫苗不良反应的毒性糖肽。尽管各国药典均规定了百日咳疫苗产品中TCT的含量限度,但均没有推荐TCT的含量测定方法。该研究发展了一种液相色谱-串联质谱法用于TCT的含量测定。实... 详细信息

百日咳杆菌气管细胞毒素(TCT)是一种引起百日咳及百日咳相关疫苗不良反应的毒性糖肽。尽管各国药典均规定了百日咳疫苗产品中TCT的含量限度,但均没有推荐TCT的含量测定方法。该研究发展了一种液相色谱-串联质谱法用于TCT的含量测定。实验优化了包括色谱柱类型和流动相组成在内的TCT色谱条件。虽然TCT在反相色谱模式和亲水作用色谱(HILIC)模式下均具有较好的保留,但HILIC模式与蛋白质沉淀的前处理方法兼容性更好,因此采用HILIC模式分离TCT。优化所得的方法具有较宽的线性范围(5.76～369 ng/L),良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于3.9%),各种基质中均有较好的回收率(96.4%～102.5%),且定量限是药典要求的TCT最高限量的1/1 279。将本方法用于共纯化百日咳疫苗、组分百日咳疫苗、共纯化无细胞百白破疫苗和组分无细胞百白破疫苗中TCT的检测,所有产品均未检出TCT,表明被检样品具有较好的工艺条件可避免TCT在产品中的残留。

关键词：液相色谱质谱百日咳杆菌气管细胞毒素百白破疫苗百日咳疫苗

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人类乳头瘤病毒特异性抗体单一稀释度ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

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中国生物制品学杂志 2019年第9期32卷 1015-1019页

作者：赵慧潘晖榕李娟林之杰林碧珍李长贵中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 厦门万泰沧海生物技术有限公司福建厦门361022

目的建立人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)特异性抗体单一稀释度ELISA检测法,并进行方法验证及初步应用。方法以HPV16及HPV18 L1病毒样颗粒蛋白作为包被抗原,血清样品采用单一稀释度稀释(未免疫血清及免疫后血清分别进行100... 详细信息

目的建立人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)特异性抗体单一稀释度ELISA检测法,并进行方法验证及初步应用。方法以HPV16及HPV18 L1病毒样颗粒蛋白作为包被抗原,血清样品采用单一稀释度稀释(未免疫血清及免疫后血清分别进行100及500倍稀释),建立HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,并验证方法的特异性、准确性、线性范围、检测限度及精密性。采用建立的方法检测自然感染HPV及接种疫苗后的血清样本(各28份),并与假病毒中和试验(pseudovirus-based neutralization assay,PBNA)检测结果进行比较。结果 100份阴性血清样本HPV16及HPV18 IgG抗体均为阴性;HPV16及HPV18抗体滴度的平均回收率分别为74%和73%;HPV16及HPV18抗体的定量检测范围分别为0. 049~0. 370 IU/mL及0. 030~0. 231 IU/mL;该方法重复性CV在2. 9%~6. 6%之间,日间精密性CV在7. 7%~11. 9%之间。接种疫苗后的血清样本检测值显著高于自然感染样本(P <0. 05),接种疫苗后的血清样本检测值与PBNA法检测结果具有显著相关性(HPV16和HPV18抗体检测结果的r值分别为0. 727和0. 800)。结论成功建立了HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,且具有较好的特异性、准确性、精密性,可用于HPV疫苗免疫效果评价及疫苗上市后抗体水平的监测。

关键词：人乳头瘤病毒特异性抗体酶联免疫吸附试验

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无细胞百日咳疫苗小鼠中和抗体法的建立及效力评价验证

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第7期38卷 535-541页

作者：卫辰晁哲吴燕王丽婵骆鹏马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的建立一种元细胞百日咳疫苗的功能性抗体检测方法，为无细胞百日咳疫苗原液及成品的生产一致性评价和效力评价提供一种便捷有效的解决方案。方法优化并使用CHO细胞簇集试验方法检测鼠免疫血清的百日咳毒素中和抗体滴度。结果确定疫... 详细信息

目的建立一种元细胞百日咳疫苗的功能性抗体检测方法，为无细胞百日咳疫苗原液及成品的生产一致性评价和效力评价提供一种便捷有效的解决方案。方法优化并使用CHO细胞簇集试验方法检测鼠免疫血清的百日咳毒素中和抗体滴度。结果确定疫苗样品以1／5人用剂量腹腔免疫20～24g、5周龄的雌性NIH小鼠10只，4周后采血分离血清，倍比稀释血清用0．1IU／ml的百日咳毒素国家参考品中和2h，加入到预先培养的CHO细胞孔中孵育48h后判定簇集结果，最终不簇集孔的血清稀释倍数的几何均值即为样品中和抗体滴度。不同工艺无细胞百日咳疫苗的中和抗体滴度有显著性差异；不同工艺无细胞百日咳疫苗改良脑腔攻击试验结果通过与不通过的产品中和抗体有明显区分度。结论百日咳毒素中和抗体法大幅减少动物使用量，CHO细胞簇集试验具备一定的重复性和精密性，可以满足不同工艺无细胞百日咳疫苗成品及原液的生产一致性和效力的监测和初步评价。

关键词：百日咳毒素无细胞百日咳疫苗中和抗体 CHO细胞效力试验

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重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物理化对照品的质量分析

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中国新药杂志 2018年第14期27卷 1607-1611页

作者：丁有学陶磊韩春梅李响杨靖清史新昌饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:对重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物（recombinant human tissue-type plasminogen activator derivative,r PA）的理化对照品进行质量分析。方法:采用纤维蛋白溶圈法测定其生物学活性;紫外分光光度法测定蛋白含量;根据其生物学活... 详细信息

目的:对重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物（recombinant human tissue-type plasminogen activator derivative,r PA）的理化对照品进行质量分析。方法:采用纤维蛋白溶圈法测定其生物学活性;紫外分光光度法测定蛋白含量;根据其生物学活性和蛋白含量计算比活性;毛细管电泳法测定等电点;液质联用测定质谱相对分子质量、对氨基酸序列进行验证以及分析其二硫键的连接方式;Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列。结果:比活性为5.2×105IU·mg-1;主区带等电点为7.1;质谱相对分子质量为39 571.50 Da,与理论相对分子质量相差0.40 Da,相对误差为10.1 ppm;测定的氨基酸序列与理论序列一致,氨基酸覆盖率为99%;分子内二硫键的连接方式为:Cys29-Cys71,Cys269-Cys285,Cys135-Cys151,Cys143-Cys212。结论:对r PA理化对照品进行了较为全面的质量分析研究,该对照品符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中华人民共和国药典》2015版三部相关要求,可用于产品的常规质量控制。

关键词：重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物(rPA) 理化对照品液质联用质量评价

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益生性肠球菌安全性评价研究进展与监管

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中国药事 2019年第5期33卷 555-560页

作者：鲁旭张影曾明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

肠球菌目前作为益生菌的研究热点,被应用于多种微生态制剂,在胃肠道疾病等多种疾病的治疗和预防过程中发挥着重要作用。但肠球菌在某些条件下可能成为致病菌,在临床报告的数据中,有一部分院内感染就是由肠球菌引起。鉴于肠球菌的益生性... 详细信息

肠球菌目前作为益生菌的研究热点,被应用于多种微生态制剂,在胃肠道疾病等多种疾病的治疗和预防过程中发挥着重要作用。但肠球菌在某些条件下可能成为致病菌,在临床报告的数据中,有一部分院内感染就是由肠球菌引起。鉴于肠球菌的益生性和潜在的致病风险,迫切需要对肠球菌的安全性进行评价。目前国内外的研究主要从耐药性和毒力因子方面评价肠球菌的安全性,也有部分研究通过动物试验考察肠球菌的安全性,结果均表明,尚未发现益生性肠球菌的安全问题。

关键词：肠球菌安全性毒力因子耐药性体内评价

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糖基化修饰对重组CTLA4-Ig稳定性影响的研究

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药物分析杂志 2019年第1期39卷 70-77页

作者：朱磊单改仙王兰火箭军总医院特勤医学科北京100088 解放军第306医院放疗科北京100101 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京102629

目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)融合蛋白稳定性的影响。方法:应用多种糖苷酶N-糖苷酶F(PNGase F)、内切糖苷酶F2(EndoF2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)对样品进行处理... 详细信息

目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)融合蛋白稳定性的影响。方法:应用多种糖苷酶N-糖苷酶F(PNGase F)、内切糖苷酶F2(EndoF2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)对样品进行处理。通过分子排阻色谱(SEC)测定不同酶切时间处理后样品纯度变化;应用差示扫描荧光(DSF)测定样品整体热力学参数的变化;应用差示扫描量热(DSC)测定样品各结构域热力学参数变化;在45℃条件下加热,分别于0、1、3、5、7、9、11和12周取样,通过SEC测定样品纯度的变化。结果:在N-糖苷酶F、内切糖苷酶F2和唾液酸酶分别处理过程中,CTLA4-Ig的聚体含量逐渐增加,而O-糖苷酶酶切过程中,聚体虽无明显变化,但碎片含量逐渐增加;经DSF测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后解链温度(T_m)均明显下降,而唾液酸酶和O-糖苷酶处理后T_m无明显变化;经DSC测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后T_m1下降,T_m2不变,T_m3上升,而唾液酸酶处理后T_m1和T_m3都略微有所上升,T_m2基本不变,O-糖苷酶处理后T_m值均变化;加速试验过程中,N-糖苷酶F和唾液酸酶处理样品的聚体上升,内切糖苷酶F2处理样品的的聚体不变;O-糖苷酶处理样品的的聚体不变,而碎片偏高。结论:通过多种分析手段研究发现,糖基化修饰与CTLA4-Ig的稳定性密切相关。

关键词：细胞毒性T 淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白融合蛋白单抗类药物糖基化修饰稳定性 N-糖基化 O-糖基化

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