检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药学杂志 2015年第19期50卷 1726-1730页

作者：陶磊丁有学刘兰李永红范文红饶春明王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的应用串联质谱技术对几种重组蛋白药物的翻译后修饰进行分析。方法首先将这几种蛋白分别进行蛋白酶切形成多肽片段,然后液相色谱-质谱联用测定其液质肽图,最后应用串联质谱技术分析几种蛋白的翻译后修饰信息。结果分别对这些蛋白中... 详细信息

目的应用串联质谱技术对几种重组蛋白药物的翻译后修饰进行分析。方法首先将这几种蛋白分别进行蛋白酶切形成多肽片段,然后液相色谱-质谱联用测定其液质肽图,最后应用串联质谱技术分析几种蛋白的翻译后修饰信息。结果分别对这些蛋白中存在的二硫键、相对分子质量相似肽段、O-糖基化位点以及N-糖基类型等翻译后修饰进行了分析确证。结论串联质谱技术可在一定程度上弥补蛋白酶切的不足,为重组蛋白药物翻译后修饰的分析提供更加充分的证据。

关键词：串联质谱重组蛋白翻译后修饰糖基化二硫键

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抗白介素-1β单克隆抗体生物学活性检测方法的建立

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中国新药杂志 2015年第17期24卷 1959-1962页

作者：刘春雨徐刚领于传飞张峰王文波李萌陈伟王兰高凯中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:建立抗白介素-1β单克隆抗体（抗IL-1β单抗）的生物学活性检测方法。方法:利用HEK293-NF-κb-luc细胞系,通过荧光素酶检测系统（Steady-GloLuciferase Assay System）进行抗IL-1β单抗的生物学活性检测,以抗IL-1β单抗参比品通... 详细信息

目的:建立抗白介素-1β单克隆抗体（抗IL-1β单抗）的生物学活性检测方法。方法:利用HEK293-NF-κb-luc细胞系,通过荧光素酶检测系统（Steady-GloLuciferase Assay System）进行抗IL-1β单抗的生物学活性检测,以抗IL-1β单抗参比品通过平行线分析的方法计算供试品相对效价,并对该方法进行精密性和准确性验证。结果:抗IL-1β单抗供试品及参比品该方法中均存在量效关系,在半对数坐标纸上呈平行的直线分布。5批抗IL-1β单抗成品经3次测定,相对效价平均值在（84.57±3.46）%;%之间,变异系数均小于10%。2批回收率样品经3次测定,回收率分别为（113.00±15.32）%和（108.53±23.51）%。结论:已成功建立抗IL-1β单抗生物学活性检测方法,该方法重复性好,准确性高,可作为抗IL-1β单抗生物学活性的常规检测方法。

关键词：抗IL-1β单克隆抗体生物学活性荧光素酶检测系统

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PCSK9单抗生物学活性测定方法的建立

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中国新药杂志 2015年第15期24卷 1715-1719页

作者：刘春雨朱磊张峰于传飞王文波李萌陈伟王兰高凯中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:建立前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）单抗的生物学活性检测方法。方法:利用系列稀释的PCSK9单抗以剂量依赖性方式阻断PCSK9与低密度脂蛋白受体（LDLR）结合,增加低密度脂蛋白（LDL）在Hep G2细胞内摄取率,通过BODIPY类荧光染料... 详细信息

目的:建立前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）单抗的生物学活性检测方法。方法:利用系列稀释的PCSK9单抗以剂量依赖性方式阻断PCSK9与低密度脂蛋白受体（LDLR）结合,增加低密度脂蛋白（LDL）在Hep G2细胞内摄取率,通过BODIPY类荧光染料标记低密度脂蛋白（BODIPY-LDL）检测胞内荧光强度来反映PCSK9单抗的生物学活性,并用PCSK9单抗参比品计算供试品相对百分效价。结果:PCSK9、PCSK9单抗参比品及供试品在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式:Y=（A-D）/[1+（X/C）B]+D。利用该法对4批PCSK9单抗供试品进行检测,每批供试品重复试验3次,PCSK9单抗的相对百分效价的平均值在94.25%;10.77%之间,变异系数均小于15%。结论:该方法灵敏度高、重复性好、结果准确,可作为PCSK9单抗生物学活性测定的常规检测方法。

关键词：单克隆抗体前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9) 低密度脂蛋白(LDL) 低密度脂蛋白受体(LDLR) 生物学活性荧光染色

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国内外破伤风相关疫苗的质量参数比较

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中国药学杂志 2015年第8期50卷 714-717页

作者：董国霞田霖谭亚军侯启明马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的了解基础免疫阶段在我国市场上主要使用的国内外破伤风相关疫苗的关键质量参数及其水平。方法以国内外各厂家分别生产的10批次产品为依据,对其质量数据进行统计、分析和比较。结果国产产品和进口产品各有其优势所在,同时也均有需进... 详细信息

目的了解基础免疫阶段在我国市场上主要使用的国内外破伤风相关疫苗的关键质量参数及其水平。方法以国内外各厂家分别生产的10批次产品为依据,对其质量数据进行统计、分析和比较。结果国产产品和进口产品各有其优势所在,同时也均有需进一步提升的空间。结论期望更多国内外疫苗厂家能针对自身产品特点,进一步提高产品质量,在未来制造出更安全、有效且使用便捷的新型疫苗。

关键词：破伤风相关疫苗质量参数比较

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生产用细胞基质中猪细小病毒污染检测方法的建立及应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第4期35卷 127-132页

作者：吴雪伶樊金萍冯建平赵翔孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心、卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、最低检出... 详细信息

目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、最低检出限等参数进行验证，并分析待测样品对试验的干扰。将PPV毒种感染ST细胞，制备病毒。以ST细胞为敏感细胞，建立PPV ST细胞感染性试验，并将ST细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合，建立ST细胞感染-PCR法，分析感染-PCR方法的灵敏度。利用所建立的方法进行生产用细胞样本的初步应用研究。结果 PPV荧光定量PCR法的特异性较好，与其他种属的细小病毒、猴SV40病毒及其他猪源病毒无明显的交叉反应，在109～104拷贝／μl范围内线性较好，R2达到0．98以上，灵敏度为1×10^4拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度均＜5％，试验内病毒定量拷贝数的精密度为5％～15％，试验间为30％～40％，最低感染性病毒滴度检测限为1CCID50／ml。待测细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。 ST细胞感染-PCR法的灵敏度为0．01CCID50／ml。利用荧光定量PCR法对22份细胞样品进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了PPV荧光定量PCR检测法及ST细胞感染-PCR法，能够用于细胞中PPV的检测，有助于进一步提高生产用或治疗用细胞的安全性。

关键词：猪细小病毒荧光定量PCR ST细胞感染性试验感染-PCR

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联合酶联免疫的微量病毒中和法检测大流行流感疫苗血清中和抗体的可行性研究

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药物分析杂志 2015年第2期35卷 284-288页

作者：赵慧李娟刘书珍邵铭江征徐康维李长贵中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立联合酶联免疫的微量病毒中和法（ELISA-MVN法）,用于大流行流感疫苗流感病毒中和抗体效价的检测,并进行方法学验证。方法：采用4种羊抗流感病毒血清参考品,与人感染禽流感H5N1病毒疫苗株（A/Vietnam/1194/2004-NIBRG-14）病毒... 详细信息

目的：建立联合酶联免疫的微量病毒中和法（ELISA-MVN法）,用于大流行流感疫苗流感病毒中和抗体效价的检测,并进行方法学验证。方法：采用4种羊抗流感病毒血清参考品,与人感染禽流感H5N1病毒疫苗株（A/Vietnam/1194/2004-NIBRG-14）病毒液,分别于37℃孵育18 h后,固定细胞,ELISA检测细胞内流感病毒核蛋白表达,确定其中和抗体效价,考察该方法的特异性;通过对高中低不同抗体滴度的血清样本的多次平行检测来评价该方法的重复性;通过ELISAMVN法和血凝抑制试验（HI试验）分别检测大流行流感疫苗接种者血清样本,比较2种方法的灵敏性和相关性。结果：ELISA-MVN结果显示羊抗H5N1的血清中和抗体检测滴度为5 120,其他3种血清的中和抗体滴度小于10,该方法特异性良好;采用ELISA-MVN法对3种不同滴度的血清进行重复检测,组内重复性试验的6次平行试验结果的RSD为3.5%。组间重复性5次结果,RSD为4.8%～8.6%。2种方法测定疫苗接种者血清样本抗体效价的结果具有显著相关性（P〈0.001）,相关系数r=0.932。ELISA-MVN法检测结果的几何平均滴度高于HI试验检测结果,该方法较HI试验在检测大流行流感疫苗血清样本灵敏度高。结论：ELISA-MVN可满足大流行流感疫苗血清学检测的要求,并可用于评价大流行流感疫苗的免疫效果。

关键词：大流行流感中和抗体效价检测酶联免疫微量病毒中和法血凝抑制试验流感疫苗评价方法学验证

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重组白介素22-Fc融合蛋白质控方法与质量标准研究

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药物分析杂志 2015年第4期35卷 591-594页

作者：陶磊韩春梅陈伟杨靖清丁有学毕华饶春明王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:研究建立重组人白介素22-Fc融合蛋白的质控方法。方法:通过刺激COLO 205细胞产生白介素10并测定其含量的方法测定该融合蛋白生物学活性;采用SDS-PAGE及高效液相色谱法测定其纯度;采用实时荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;其余项... 详细信息

目的:研究建立重组人白介素22-Fc融合蛋白的质控方法。方法:通过刺激COLO 205细胞产生白介素10并测定其含量的方法测定该融合蛋白生物学活性;采用SDS-PAGE及高效液相色谱法测定其纯度;采用实时荧光定量PCR方法测定外源DNA残留量;其余项目按中国药典三部(2010年版)要求进行。结果:该制品3批原液及成品的平均生物学活性分别为参考品的100.6%与103.1%;定量PCR测得3批原液的外源DNA残留量均小于100 pg·剂量-1;其他各项指标均符合中国药典三部(2010年版)要求。结论:研究建立的质控方法和质量标准可用于重组人白介素22-Fc融合蛋白的常规质量控制。

关键词：白介素22 融合蛋白质量控制生物学活性质量标准

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昆虫细胞分类技术的应用与发展

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国际生物制品学杂志 2016年第2期39卷 82-86页

作者：孙立影张占东李媛媛孟淑芳北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室 101111 中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心“卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室” 北京100050

昆虫细胞杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一，已经被广泛应用于生物制药领域，作为该表达系统的支撑基础，昆虫细胞开始成为继哺乳动物细胞之后的另一种新型细胞基质，在疫苗及生物技术产品领域得到开发应用。然而，昆虫细胞与哺乳... 详细信息

昆虫细胞杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一，已经被广泛应用于生物制药领域，作为该表达系统的支撑基础，昆虫细胞开始成为继哺乳动物细胞之后的另一种新型细胞基质，在疫苗及生物技术产品领域得到开发应用。然而，昆虫细胞与哺乳动物细胞在细胞特性等方面存在显著差异，建立适合昆虫细胞特性的质量控制方法已经成为生物制药领域必须要解决的问题。此文仅就昆虫细胞鉴定方法研究进展做一综述，为开发及建立昆虫细胞个性化鉴别方法提供参考。

关键词：昆虫细胞基质分类法

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淋病奈瑟球菌国家参考品菌株的分子生物学特征分析

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军事医学 2015年第7期39卷 569-570,F0003页

作者：王春娥刘茹凤石继春李康陈琼陈翠萍叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对中国医学细菌保藏管理中心收集保藏的淋病奈瑟球菌(NG)国家参考品菌株进行分子生物学特征分析。方法对13株NG国家参考品菌株进行16S rRNA和隐蔽性质粒cppB基因扩增和分析,并采用多位点序列分型(MLST)、NG多抗原序列分型(NG-MAST)... 详细信息

目的对中国医学细菌保藏管理中心收集保藏的淋病奈瑟球菌(NG)国家参考品菌株进行分子生物学特征分析。方法对13株NG国家参考品菌株进行16S rRNA和隐蔽性质粒cppB基因扩增和分析,并采用多位点序列分型(MLST)、NG多抗原序列分型(NG-MAST)技术对菌株进行分子分型。结果 13株菌种均扩增出预期大小的16S rRNA基因片段,与NG模式菌株参考序列(X07714.1)的相似性均>99%;13株菌种均扩增出预期大小的cppB基因;MLST结果显示,13株菌种共分为10个ST型,其中含7个新的ST型;NG-MAST结果显示,13株菌种含9个por等位基因和9个tbpB等位基因,配对后是10个不同的ST型,其中含6个新的ST型。结论该研究完善了NG国家参考品菌株的分子生物学方面的质控指标,为今后NG参考品候选菌株的选择提供了新的技术手段。

关键词：奈瑟球菌,淋病多位点序列分型(MLST) 多抗原序列分型(NG-MAST)

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人用疫苗佐剂作用机制的研究进展

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中国生物制品学杂志 2015年第8期28卷 866-870页

作者：方鑫梁争论中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

与传统疫苗相比,新一代疫苗特别是亚单位、合成疫苗,其免疫原性有所下降。使用佐剂增强这些疫苗的免疫原性,是加强疫苗保护性免疫效力的必要策略。佐剂的研究是现代亚单位疫苗发展的重要环节。迄今为止,除了铝佐剂,已有多个新型人用疫... 详细信息

与传统疫苗相比,新一代疫苗特别是亚单位、合成疫苗,其免疫原性有所下降。使用佐剂增强这些疫苗的免疫原性,是加强疫苗保护性免疫效力的必要策略。佐剂的研究是现代亚单位疫苗发展的重要环节。迄今为止,除了铝佐剂,已有多个新型人用疫苗佐剂(MF59、AS04)批准进入临床应用。本文对人用疫苗佐剂的研究进展进行综述,重点对佐剂的作用机制进行阐述,并对疫苗佐剂的发展趋势进行展望。

关键词：佐剂疫苗机制

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