检索结果-内蒙古大学图书馆

2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：曹守春董关木唐建蓉李加刘景华石磊泰李长贵王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:制备Vero细胞DNA参考品,使宿主DNA残留量检测中的斑点杂交试验操作进一步标准化。方法 :提取Vero细胞基因组DNA,并采用Hind III酶切,克隆、测序进行鉴定。之后由10家实验室协作标定DNA浓度,稀配至40ng/mL,以牛血清白蛋白作为冻干... 详细信息

目的:制备Vero细胞DNA参考品,使宿主DNA残留量检测中的斑点杂交试验操作进一步标准化。方法 :提取Vero细胞基因组DNA,并采用Hind III酶切,克隆、测序进行鉴定。之后由10家实验室协作标定DNA浓度,稀配至40ng/mL,以牛血清白蛋白作为冻干赋形剂,安瓶分装,装量为0.5mL,充氮气后熔封。制备完成后由10家实验室进行灵敏度,线性和稳定性验证。结果 :制备了一批Vero细胞DNA,Hind III酶切,琼脂电泳可见典型172bp梯度条带,获得重组质粒pET30a-172,测序后与Genbank序列比对同源性为99.4%。Vero细胞DNA参考品原液协作标定浓度为64.0±1.9μg/mL,OD.260/OD.280=1.9,Vero细胞DNA参考品灵敏性为1～5pg/dot,最高可达1pg/dot,浓度与斑点显色成比例,具有良好线性,37℃放置2周,4周后与-20℃常规保存下的同步试验,灵敏度一致,结果显示稳定性良好。结论 :成功建立适用于斑点杂交用的Vero细胞DNA定量参考品,该参考品的建立对疫苗宿主DNA残留检测的斑点杂交方法的标准化具有重要的理论是实际应用价值。

关键词： Vero细胞基因组DNA 定量参考品斑点杂交标准化

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液质联用分析rhTNK-tPA的一级结构

液质联用分析rhTNK-tPA的一级结构

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：陶磊饶春明丁有学郭莹王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:液质联用分析重组人组织纤溶酶原激活物变构体(TNK-tPA)的一级结构。方法 :应用液质联用的方法测定该样品的分子量,并对该样品进行还原、烷基化、酶解等处理后测定其液质肽图,通过液质肽图的解析对该样品的氨基酸序列及翻译后修饰... 详细信息

目的:液质联用分析重组人组织纤溶酶原激活物变构体(TNK-tPA)的一级结构。方法 :应用液质联用的方法测定该样品的分子量,并对该样品进行还原、烷基化、酶解等处理后测定其液质肽图,通过液质肽图的解析对该样品的氨基酸序列及翻译后修饰进行分析和鉴定。结果 :测定了质谱分子量,与理论值的误差小于0.01%;对其全部氨基酸序列进行了确证,包括N-端序列、C-端序列及氨基酸突变区的序列;该蛋白第61位的苏氨酸部分发生O-糖基化修饰,糖基为岩藻糖;其N103、N184、N448存在N-糖基化修饰,其中N184为部分糖基化修饰,糖基类型均为复杂型N-糖。另外,该蛋白第207位的蛋氨酸部分发生氧化。结论 :应用液质联用仪结合不同的样品处理方式,可快速、准确的对复杂糖蛋白的结构进行鉴定,所用方法可为同类制品的结构确证及质量控制提供参考。

关键词：液质联用 TNK-tPA 一级结构

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HIV假病毒体系在病毒特性研究和检测中的应用

HIV假病毒体系在病毒特性研究和检测中的应用

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：王佑春卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室、细胞室、中国食品药品检定研究院

HIV假病毒体系最近几年得到了很大的发展,其中以TZM-bl细胞为靶细胞的假病毒单周期感染实验应用最广泛。该方法包括病毒生产和病毒感染检测两个部分,假病毒生产是通过两质粒共转染真核表达细胞(如293T、293 FT、293TT等)实现的,其中一... 详细信息

HIV假病毒体系最近几年得到了很大的发展,其中以TZM-bl细胞为靶细胞的假病毒单周期感染实验应用最广泛。该方法包括病毒生产和病毒感染检测两个部分,假病毒生产是通过两质粒共转染真核表达细胞(如293T、293 FT、293TT等)实现的,其中一个质粒表达全长的env基因,另一个质粒表达除env以外的HIV-1其它所有基因(backbone plasmid,骨架质粒),只有骨架质粒被转录成病毒基因组RNA并包装入假病毒中,因此产生的假病毒只具有单轮感染的能力,而不具有产生子代病毒的复制能力。TZM-bl(JC53BL-13)

关键词：假病毒 HIV 耐药性检测病毒特性

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百日咳鲍特菌基因组多态性分析

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国际检验医学杂志 2012年第22期33卷 2691-2694页

作者：徐颖华卫辰王丽婵骆鹏侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支... 详细信息

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支气管黏附因子(tcfA)和百日咳毒素基因上游启动子区域(ptxP)3种等位基因序列分析结果显示,共发现3种等位基因组合型:Prn1/ptxP1/tcfA2、Prn2/ptxP3/tcfA2和Prn3/ptxP1/tcfA2,所占比例分别为71.43%、19.05%和9.52%。MLVA法将21株分离菌株分成了12个不同的MLVA型,MLVA-136型和MLVA-152型为主要流行MLVA型,所占比例分别为28.57%和19.05%,并发现1种新MLVA型菌株。统计学分析表明MLVA法较等位基因分型法具有更高的分辨率。结论国内部分地区百日咳杆菌流行菌株与欧洲其他国家不同,掌握百日咳杆菌分子流行病学的第一手资料,对有效预防和控制百日咳的流行以及制定新的百日咳疫苗免疫策略具有指导意义。

关键词：博德特菌百日咳基因组多态观察遗传

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低抗原含量百日咳疫苗效力评价研究

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国际检验医学杂志 2012年第21期33卷 2561-2562,2564页

作者：徐颖华骆鹏王丽婵卫辰侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所... 详细信息

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所获得低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验效力结果数据均较低(<1.1IU/mL),中检院计算出的效价均在国外实验室分析得出效价的95%可信区间内。结论 MICA方法可应用于低抗原含量百日咳疫苗效力检测分析,该研究为进一步确定中国低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验检定标准奠定了基础。

关键词：百日咳菌苗效力改良小鼠脑腔攻击试验

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基于HIV中和单抗4E10表位的免疫原设计和效果评价的初步研究

基于HIV中和单抗4E10表位的免疫原设计和效果评价的初步研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：聂建辉王文波宋爱京王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室细胞室

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白... 详细信息

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白CKS-4EP;将合成的4E10表位多肽通过Sulfo-SMCC连接至P64K载体蛋白构建结合型免疫原PKEP。用SDS-PAGE电泳的方法检测各种免疫原的分子量和纯度。用假病毒中和试验评价豚鼠体内中和抗体水平。结果蛋白电泳显示所有免疫原的分子量大小正确,纯度在95%以上。GST-3EP能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体,3次免疫后5只豚鼠4只阳转,阳转的豚鼠中2只中和抗体水平IC50>200,另外两只抗体水平在100左右。对各组血清50倍稀释后中和抑制率进行统计分析,3EP组与佐剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的融合蛋白GST-3EP 3次免疫后能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体。

关键词：人类免疫缺陷病毒中和抗体融合蛋白偶联蛋白 4E10

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百日咳疫苗毒性试验方法研究进展

百日咳疫苗毒性试验方法研究进展

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：卫辰徐颖华骆鹏王丽婵侯启明中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

百日咳是一种急性呼吸道传染病,传染性较强。而人类是百日咳鲍特氏杆菌的唯一宿主,人群普遍一干,尤其以婴幼儿多见,是严重威胁人类健康的传染病之一。尽管现在世界上绝大数国家实施百日咳疫苗的免疫接种,使百日咳感染率和病死率大大下... 详细信息

百日咳是一种急性呼吸道传染病,传染性较强。而人类是百日咳鲍特氏杆菌的唯一宿主,人群普遍一干,尤其以婴幼儿多见,是严重威胁人类健康的传染病之一。尽管现在世界上绝大数国家实施百日咳疫苗的免疫接种,使百日咳感染率和病死率大大下降。但是值得注意的是,已接种疫苗的青少年和成人患百日咳的人数逐渐增多,血清学检测证实有持续性咳嗽的门诊成年人约12～26%感染过百

关键词：百日咳疫苗百日咳杆菌 APV 毒性试验

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HPLC法定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的初步研究

HPLC法定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的初步研究

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：王敏力杨鹏云王箐舟赵卉侯继锋中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

目的:建立定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的HPLC分析方法。方法 :采用WatersAlliance系统、Waters2414示差折光检测器、安捷伦Zorbax Carbohydrate Analysis色谱柱,以ACN:H2O=70:30作为流动相,流速1.4ml/min,柱温30℃测定人纤维蛋白原... 详细信息

目的:建立定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的HPLC分析方法。方法 :采用WatersAlliance系统、Waters2414示差折光检测器、安捷伦Zorbax Carbohydrate Analysis色谱柱,以ACN:H2O=70:30作为流动相,流速1.4ml/min,柱温30℃测定人纤维蛋白原中的蔗糖。同时测定13批含有蔗糖的重组人凝血因子Ⅷ并与药典方法IEC-HPLC进行方法学比较。结果 HPLC法测定蔗糖对照品的保留时间RSD(n=6)为0.17%,峰面积RSD(n=6)为0.09%。蔗糖在低(5mg mL-1)、中(10mg mL-1)、高(15mg mL-1)三个浓度的回收率分别为96.2%,98.8%,100.3%,平均回收率为98.4%。蔗糖在2mg mL-1～20mg mL-1(r=1.0000)范围内与峰面积呈良好的线性关系。HPLC法测定13批重组人凝血因子Ⅷ的蔗糖含量结果与药典IEC-HPLC法测定结果对比显示2种方法相关系数r为1.000,无显著差异(P>0.05)。结论 :HPLC法的准确性和精密度良好,能够规避药典IEC-HPLC法的缺点,可以解决干热病毒灭活条件下人纤维蛋白原中蔗糖无法检测的问题。HPLC法与药典方法具有一致性。

关键词：蔗糖血液制品人纤维蛋白原离子交换高效液相色谱法干热病毒灭活

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碱性成纤维细胞生长因子与肿瘤生长关系概述

碱性成纤维细胞生长因子与肿瘤生长关系概述

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：王丽婵侯启明张庶民中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是成纤维细胞生长因子(FGF)家族的成员之一,是第一个被分离的血管形成促进因子[1]。人bFGF的基因位于染色体4q26-27。由于bFGF mRNA翻译起始点和剪接点的不同,单拷贝的bFGFz基因能够编码产生18～34kD多种... 详细信息

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是成纤维细胞生长因子(FGF)家族的成员之一,是第一个被分离的血管形成促进因子[1]。人bFGF的基因位于染色体4q26-27。由于bFGF mRNA翻译起始点和剪接点的不同,单拷贝的bFGFz基因能够编码产生18～34kD多种形式的bFGF。目前研究较多的是18kD的亚型,也是bFGF活性的主要形式,由146个氨基酸组成,等电点为9.6[2]。bFGF在体

关键词：成纤维细胞生长因子肿瘤生长

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血液制品中人细小病毒污染及其灭活进展

血液制品中人细小病毒污染及其灭活进展

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：侯继锋中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

人细小病毒感染率高,献浆员中阳性捐献者的病毒载量很高,导致病毒对原料血浆污染率高,血液制品生产工艺中现有的病毒灭活方法不能将细小病毒有效的灭活,因此存在潜在传播病毒的风险。对血液制品中病毒,尤其是无包膜病毒的有效去除/灭活... 详细信息

人细小病毒感染率高,献浆员中阳性捐献者的病毒载量很高,导致病毒对原料血浆污染率高,血液制品生产工艺中现有的病毒灭活方法不能将细小病毒有效的灭活,因此存在潜在传播病毒的风险。对血液制品中病毒,尤其是无包膜病毒的有效去除/灭活迫在眉睫。用紫外线对病毒灭活处理由来已久,一种新的短波紫外灭活方法对无包膜病毒灭活效果好,血液制品蛋白回收率高,具有好的研究应用前景。

关键词：人细小病毒B19 感染率血液制品病毒灭活紫外灭活

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