检索结果-内蒙古大学图书馆

中国新药杂志 2023年第3期32卷 301-310页

作者：胡馨月丁晓丽孙悦秦希月张慧李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室吉林大学

目的:德谷胰岛素和地特胰岛素是以长链脂肪酸化学修饰为代表的第3代胰岛素类似物，有必要建立专属性强、灵敏度高的LC-MS/MS法测定化学修饰型胰岛素类似物的氨基酸序列。方法:氨基酸序列测定方法的色谱参数为ACQUITY UPLC peptide BEH ... 详细信息

目的:德谷胰岛素和地特胰岛素是以长链脂肪酸化学修饰为代表的第3代胰岛素类似物，有必要建立专属性强、灵敏度高的LC-MS/MS法测定化学修饰型胰岛素类似物的氨基酸序列。方法:氨基酸序列测定方法的色谱参数为ACQUITY UPLC peptide BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?）,流动相A为0.1%甲酸/水溶液，流动相B为0.1%甲酸/乙腈溶液，梯度洗脱，流速0.3 mL·min-1;质谱参数为MSE采集模式，碰撞能量为30～40 eV。结果:德谷胰岛素和地特胰岛素序列覆盖率良好，化学修饰位点的碎片离子y1&可检出，中高强度离子的离子强度RSD在15%之内，可有效区分与其他未修饰胰岛素的序列。结论:建立了重复性好、专属性强和耐用性好的脂肪侧链修饰型胰岛素类似物氨基酸序列LC-MS/MS方法，为该类产品序列结构的研究方法提供了借鉴意义。

关键词：脂肪侧链修饰型胰岛素类似物德谷胰岛素地特胰岛素 LC-MS/MS法氨基酸序列定位酶切

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利用高分辨质谱技术综合解析胰岛素类制品复杂二硫键结构

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药学学报 2024年第1期59卷 188-197页

作者：胡馨月丁晓丽孙悦张慧李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室北京102629

二硫键的正确配对维持了多肽和蛋白类药物的正确折叠方式和高级结构的形成,对产品的质量控制至关重要。为了确保二硫键正确配对,二硫键分析是多肽和蛋白质药物表征中必不可少的重要部分。质谱分析技术可用于二硫键分析,然而,胰岛素及其... 详细信息

二硫键的正确配对维持了多肽和蛋白类药物的正确折叠方式和高级结构的形成,对产品的质量控制至关重要。为了确保二硫键正确配对,二硫键分析是多肽和蛋白质药物表征中必不可少的重要部分。质谱分析技术可用于二硫键分析,然而,胰岛素及其类似物中存在两对没有酶切位点的二硫键,常规的碰撞诱导解离(CID)和高能诱导裂解(HCD)无法实现该复杂二硫键的准确定位。本研究通过3种方法综合定位该复杂二硫键,包括酶切加关键肽段源内碎裂(ISD)法、酶切加部分还原烷基化法、完整蛋白源内碎裂和电子转移解离(ETD)裂解法,并且考察了门冬胰岛素、赖脯胰岛素和甘精胰岛素的适用性,为胰岛素及其类似物二硫键连接方式的质量控制提供了新途径,也为含该类复杂二硫键多肽或蛋白类生物制品的二硫键定位提供借鉴。

关键词：胰岛素及其类似物二硫键定位部分还原烷基化源内碎裂电子转移裂解

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CE-SDS分析单克隆抗体大小异质性的方法优化及系统适用性对照品的研制

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中国药学杂志 2022年第24期57卷 2061-2066页

作者：李萌杨雅岚赵雪羽王文波武刚于传飞王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的优化2015年版《中国药典》已收录的十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)用于单抗分子大小变异体测定,及制备CE-SDS的系统适用性对照品。方法优化2015年版《中国药典》CE-SDS的关... 详细信息

目的优化2015年版《中国药典》已收录的十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)用于单抗分子大小变异体测定,及制备CE-SDS的系统适用性对照品。方法优化2015年版《中国药典》CE-SDS的关键参数,包括样品缓冲液的pH及紫外检测波长;制备了CE-SDS的系统适用性对照品,开展了多个实验室间协作研究,并利用分子排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、成像毛细管等电聚焦电泳(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)及CE-SDS评价其长期稳定性(18个月)。结果优化了该方法的关键参数:样品缓冲液pH值为6.5,检测波长为214或220 nm;制备了CE-SDS的系统适用性对照品;协作标定非还原CE-SDS的主峰纯度为92.19%~94.77%,还原CE-SDS的非糖基化重链(non-glycosylated heavy chain,NGHC)含量/总重链含量为0.93%~1.66%;18个月的长期稳定性良好。结论修订了2015年版《中国药典》三部3127:单抗分子大小变异体测定法(CE-SDS法),并为该法研制了系统适用性对照品,收录于2020年版《中国药典》三部3127,助力相关企业的研发和质控。

关键词：单克隆抗体大小异质性十二烷基硫酸钠-毛细管电泳系统适用性对照品

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首批重组胰蛋白酶国家标准品的研制

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 663-667页

作者：王绿音张慧吕萍李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室、国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的研制首批重组胰蛋白酶国家标准品,以规范并提高重组胰蛋白酶的质量。方法通过酶底物反应鉴别、HPLC鉴别、N-末端氨基酸序列测定、质谱分子量测定对重组胰蛋白酶进行定性及结构确证;HPLC法测定纯度;参照《中国药典》三部(2020版)通则... 详细信息

目的研制首批重组胰蛋白酶国家标准品,以规范并提高重组胰蛋白酶的质量。方法通过酶底物反应鉴别、HPLC鉴别、N-末端氨基酸序列测定、质谱分子量测定对重组胰蛋白酶进行定性及结构确证;HPLC法测定纯度;参照《中国药典》三部(2020版)通则3603中的相关方法,对待标品进行比活性测定,并对待标品进行均一性及稳定性考察。结果确证了重组胰蛋白酶的结构,并确定了首批重组胰蛋白酶标准品比活性为5169 U/mg,含β-胰蛋白酶80%、α-胰蛋白酶9%。12支待标品的α、β-胰蛋白酶纯度和保留时间的RSD均小于2.0%。于25℃,相对湿度(relative humidity,RH)80%条件下放置10 d,α、β-胰蛋白酶纯度无明显下降,于40℃,RH 80%条件下放置10 d,β-胰蛋白酶纯度略有下降,α-胰蛋白酶纯度略有升高;光照(4000 lx)条件下放置10 d,β-胰蛋白酶纯度略有下降。结论研制了结构准确且纯度较高的重组胰蛋白酶国家标准品,可用于重组胰蛋白酶纯度系统适用性试验。

关键词：重组胰蛋白酶国家标准品纯度系统适用性无动物源性原辅料

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时间分辨荧光免疫分析法测定人胰岛素生物学活性

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药物分析杂志 2022年第1期42卷 51-59页

作者：杨艳枫王绿音梁誉龄李湛军张慧李晶高向东梁成罡中国药科大学南京211198 中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的:利用时间分辨荧光免疫分析系统建立人胰岛素基于转基因细胞的生物学活性检测方法。方法:以CHO-INSRB1284转基因细胞2.5×10^(5)个·mL^(-1)作为靶细胞,以400 pmol·mL^(-1)作为初始浓度对人胰岛素进行3倍系列稀释,随... 详细信息

目的:利用时间分辨荧光免疫分析系统建立人胰岛素基于转基因细胞的生物学活性检测方法。方法:以CHO-INSRB1284转基因细胞2.5×10^(5)个·mL^(-1)作为靶细胞,以400 pmol·mL^(-1)作为初始浓度对人胰岛素进行3倍系列稀释,随后药物与靶细胞作用20 min,通过时间分辨荧光免疫分析系统,进行生物学活性检测,对该方法进行关键参数的优化,并依据2020年版《中华人民共和国药典》四部通则9401和ICH指导原则Q2(R1)、Q6B进行验证。结果:人胰岛素在本方法中存在良好的量效关系,符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D。本方法专属性强,5个效价水平(64%、80%、100%、125%及156%)的相对生物学活性(n=8)的几何平均值分别为(55.8±2.06)%、(82.1±5.52)%、(94.4±5.46)%、(121.4±5.94)%、(154.4±8.37)%,相对偏倚及其90%置信区间分别为-12.8%(-16.3%,-9.9%)、2.6%(-4.4%,9.5%)、-5.6%(-11.2%,-0.3%)、-2.9%(-7.7%,-1.8%)、-1.0%(-7.1%,3.9%),相对偏倚及置信区间的绝对值均不超过20%,表明该方法相对准确度良好。5个效价水平的几何变异系数(GCV)及其置信区间的上限均小于20%,结果证明此方法精密性较好。线性范围为64%~156%,斜率为1.031,R;大于0.98。结论:本研究利用时间分辨荧光免疫分析系统成功建立了人胰岛素基于转基因细胞的生物学活性检测方法,该方法可用于人胰岛素体外药效评价和质量控制。

关键词：生物学活性人胰岛素时间分辨荧光转基因细胞方法学验证受体磷酸化

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酶联免疫法测定甘精胰岛素中单链前体残留研究

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中国药物警戒 2024年第3期21卷 290-294页

作者：张孝明吕萍胡馨月丁晓丽李晶梁成罡中国食品药品检定研究院化学药品检定所国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的建立酶联免疫法检测甘精胰岛素中单链前体残留,为甘精胰岛素药物质量控制和安全性评价提供新方法。方法采用双抗夹心酶联免疫法,以甘精胰岛素原为标准品,建立单链前体残留检测方法,验证方法的重复性、准确度、范围和精密度,并应用... 详细信息

目的建立酶联免疫法检测甘精胰岛素中单链前体残留,为甘精胰岛素药物质量控制和安全性评价提供新方法。方法采用双抗夹心酶联免疫法,以甘精胰岛素原为标准品,建立单链前体残留检测方法,验证方法的重复性、准确度、范围和精密度,并应用该方法检测9批甘精胰岛素原料药。结果在0.156~10.00 ng·mL^(-1)浓度范围内,对甘精胰岛素原标准品进行四参数曲线拟合,曲线相关系数R~2大于0.99,方法准确度较高、重复性良好。重复检测3批甘精胰岛素原料药,平均加标回收率在104%~113%范围内,RSD%小于10%,方法精密度良好。9批样品中单链前体残留量均小于1 ng·mg^(-1)。结论建立的酶联免疫法可用于甘精胰岛素及其他重组人胰岛素类似物中单链前体残留量的质量控制和安全性评价。

关键词：酶联免疫法甘精胰岛素单链前体 C肽质量控制方法学验证安全性回收率

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关于预防性人用疫苗企业标准物质的思考

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中国生物制品学杂志 2023年第12期36卷 1409-1413,1418页

作者：王一平赵宗阁吴星梁争论毛群颖中国食品药品检定研究院北京102629 国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

疫苗标准物质为疫苗质量控制、剂量确定和有效性评价的标尺。疫苗企业标准物质是各企业在疫苗生产、质控和评价过程中直接使用的工作标准物质,其量值的准确和稳定对保证疫苗产品的批间一致性、安全性和有效性发挥关键作用。本文在调研... 详细信息

疫苗标准物质为疫苗质量控制、剂量确定和有效性评价的标尺。疫苗企业标准物质是各企业在疫苗生产、质控和评价过程中直接使用的工作标准物质,其量值的准确和稳定对保证疫苗产品的批间一致性、安全性和有效性发挥关键作用。本文在调研国内代表性疫苗企业标准物质管理现状的基础上,结合世界卫生组织(World Health Organization,WHO)和《中国药典》等相关指南和法规,提出我国预防性人用疫苗企业标准物质建立和应用时应考虑的要点,并建议制定疫苗企业标准物质指导原则,以规范该类标准物质的研制和应用。

关键词：疫苗标准品参考品工作标准物质

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冻存对复溶后人粒细胞刺激因子国家标准品生物学活性的影响

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1093-1096页

作者：朱留强史新昌刘兰裴德宁于雷秦玺周勇王军志中国食品药品检定研究院、国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的探讨冻存对复溶后人粒细胞刺激因子(human granulocyte colony-stimulating factor,hG-CSF)国家标准品生物学活性的影响,为hG-CSF国家标准品的使用提供参考。方法依据《中国药典》三部(2020版)通则3525测定标准品的生物学活性;将复... 详细信息

目的探讨冻存对复溶后人粒细胞刺激因子(human granulocyte colony-stimulating factor,hG-CSF)国家标准品生物学活性的影响,为hG-CSF国家标准品的使用提供参考。方法依据《中国药典》三部(2020版)通则3525测定标准品的生物学活性;将复溶后的hG-CSF国家标准品分装后置于-80、-40、-20℃保存,分别于第1、2、3、5和6个月取样检测生物学活性,用临用前复溶的标准品定量-80℃存放不同时间的标准品,以-80℃存放的样品为100%活性对照品定量其余样品的相对生物学活性。结果热加速稳定试验拟合Eyrlng方程为:ln{k(t)}=6.75-3772.20/T+ln(T),R2=0.969,预测hG-CSF国家标准品于-80℃贮存时,生物学活性衰减5%约需93.4个月;-80℃冻存的复溶标准品生物学活性值下降约24%。结论hG-CSF国家标准品复溶分装后于-80℃可稳定保存半年以上。但冻融会引起活性值下降超过20%,因此不建议复溶后分装储存使用。

关键词：复溶人粒细胞刺激因子国家标准品生物学活性

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超高效液相色谱-串联四极杆-轨道阱高分辨质谱法测定甘精胰岛素单链前体残留量

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中国药学杂志 2023年第7期58卷 611-618页

作者：胡馨月丁晓丽秦希月孙悦李懿李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室北京102629 吉林大学长春130015

目的胰岛素单链前体是胰岛素生产工艺中的相关杂质,关系到该类产品的安全性和有效性,有必要建立准确度好、灵敏度高的检测胰岛素单链前体残留量的液质方法。本研究以甘精胰岛素单链前体为例,为胰岛素及其类似物单链前体液质联用方法开... 详细信息

目的胰岛素单链前体是胰岛素生产工艺中的相关杂质,关系到该类产品的安全性和有效性,有必要建立准确度好、灵敏度高的检测胰岛素单链前体残留量的液质方法。本研究以甘精胰岛素单链前体为例,为胰岛素及其类似物单链前体液质联用方法开发提供参考与借鉴。方法色谱柱ACQUITY UPLC peptide CSH C18(2.1 mm×150 mm, 130?,1.7μm);流动相A为体积分数0.1%甲酸-水溶液,流动相B为0.1%甲酸-乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温60℃,检测波长214 nm。Orbitrap Exploris 480液质联用仪,ESI+电喷雾电离源,数据检测模式为平行反应监测(PRM),定量离子对1 155.6/1 151.5。结果甘精胰岛素单链前体在1~100 ng·mL^(-1)内峰面积与浓度有良好的线性关系(r=0.999 2),方法平均回收率为97%(n=9)。结论经方法学验证,本法能准确测定甘精胰岛素中单链前体胰岛素前体的残留量,方法精密度、重复性、准确度和耐用性良好。

关键词：胰岛素单链前体液质联用工艺相关杂质残留量高分辨质谱平行反应监测

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1株致病性黄疸出血群钩端螺旋体病流行菌株与其同血清群疫苗株的比较基因组学分析

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中国生物制品学杂志 2022年第12期35卷 1432-1436页

作者：李彬石刚杜宗利辛晓芳叶强徐颖华中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京1002629

目的对1株致病性黄疸出血群钩端螺旋体(简称钩体)病流行菌株与其同血清群疫苗株进行比较基因组学分析。方法应用高通量测序技术对黄疸出血群钩体流行株200502(简称流行株200502)进行全基因组序列测定,并与其同血清群疫苗株56601进行比... 详细信息

目的对1株致病性黄疸出血群钩端螺旋体(简称钩体)病流行菌株与其同血清群疫苗株进行比较基因组学分析。方法应用高通量测序技术对黄疸出血群钩体流行株200502(简称流行株200502)进行全基因组序列测定,并与其同血清群疫苗株56601进行比较基因组学分析;选取GenBank中已公布的包括疫苗株56601在内的9株不同基因种的代表性钩体菌株构建系统发育进化树。结果流行株200502全基因组序列全长为4543190 bp,含有编码基因3580个,其中具有直系同源簇(clusters of orthologous groups,COG)功能2192个。流行株200502与疫苗株56601基因组平均核苷酸一致性为99.2%,存在共有基因3245个,流行株200502含有特有基因242个。以疫苗株56601为参考,在流行株200502中共鉴定出2005个插入缺失(indel)和19799个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,其中编码区有8485个同义SNP位点、3484个非同义SNP位点,涉及菌株的细胞运动、信号转导机制、防御机制等相关基因。流行株200502与***、***和*** 3个基因种进化亲缘性较近。结论获得了我国当前黄疸出血群流行株200502基因组的基本特征,确定了其与血清型疫苗株56601的差异,为钩体疫苗的改进提供了实验依据。

关键词：黄疸出血群钩端螺旋体流行菌株疫苗菌株全基因组序列比较基因组学

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