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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：柯兵兵徐颖华侯启明中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

百日咳特氏菌粘附素蛋白PRN是百日咳杆菌膜表面一个非常重要的蛋白,研究人员对该蛋白的理化性质、空间结构、免疫原性、遗传特征进行了大量的实验研究,并取得很多重要的突破,本文就百日咳杆菌PRN蛋白的最新研究做一综述。

关键词：百日咳杆菌百日咳粘附素

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百日咳毒素的毒性检测方法

百日咳毒素的毒性检测方法

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2013中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：谭亚军侯启明中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

百口咳毒素(Pertussis toxin,PT)是鲍特氏菌属百口咳杆菌产生的一种主要毒力因子，具有多种生物学活性.PT与白喉、霍乱等细菌毒素结构相似，为A-B型毒素，由一具有酶活性的A-原体与B-寡聚体组成。PT因毒性太强，需采用化学脱毒，进行脱... 详细信息

百口咳毒素(Pertussis toxin,PT)是鲍特氏菌属百口咳杆菌产生的一种主要毒力因子，具有多种生物学活性.PT与白喉、霍乱等细菌毒素结构相似，为A-B型毒素，由一具有酶活性的A-原体与B-寡聚体组成。PT因毒性太强，需采用化学脱毒，进行脱毒处理制成类毒素，既严格保证失去毒性，又保留免疫原性，方可作为疫苗使用。PT的残留毒性被认为是全细胞百口咳疫苗接种不良反应的一个主要原因，目前根据PT的生物学活性建立了很多特异性检测方法，用于检测PT毒性，包括体内法和体外法两类。

关键词：百日咳毒素毒性检测生物结构化学脱毒

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百日咳鲍特氏菌粘附素蛋白PRN的研究进展

百日咳鲍特氏菌粘附素蛋白PRN的研究进展

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2013中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：柯兵兵徐颖华侯启明中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京 100050

百日咳特氏菌粘附素蛋白PRN是百日咳杆菌膜表面一个非常重要的蛋白,研究人员对该蛋白的理化性质、空间结构、免疫原性、遗传特征进行了大量的实验研究,并取得很多重要的突破,就百日咳杆菌PRN蛋白的最新研究做一综述.

关键词：百日咳疫苗粘附素蛋白免疫原性致病机制

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各国吸附破伤风疫苗的效价检测方法

各国吸附破伤风疫苗的效价检测方法

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2013中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：董国霞马霄田霖谭亚军侯启明中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京 100050

疫苗的效价是保证疫苗有效预防疾病的重要检测指标,目前不同国家对吸附破伤风疫苗的效价检测采用的方法不尽相同.英国等欧洲国家现采用的方法是豚鼠或小鼠体内攻毒法、豚鼠ELISA法或ToBI(toxin-or toxoid-binding inhibition)法;美国采... 详细信息

疫苗的效价是保证疫苗有效预防疾病的重要检测指标,目前不同国家对吸附破伤风疫苗的效价检测采用的方法不尽相同.英国等欧洲国家现采用的方法是豚鼠或小鼠体内攻毒法、豚鼠ELISA法或ToBI(toxin-or toxoid-binding inhibition)法;美国采用的是体内中和实验法;日本采用的是豚鼠或小鼠体内攻毒法、体内中和实验法;印度采用的方法与英国相同;WHO推荐的方法是豚鼠或小鼠体内攻毒法、豚鼠ELISA法或ToBI法、小鼠ToBI法、体内中和实验法;我国采用的是豚鼠或小鼠体内攻毒法.上述方法中,攻毒法和体内中和实验法是世界范围内较早采用的方法,我国最早采用的方法是体内中和实验法,后在WHO的推荐下从2000年版药典开始采用豚鼠或小鼠攻毒法至今.吸附破伤风疫苗效价检测的国际发展趋势是以体外检测代替体内检测。自2004年起欧洲等药典相继采用的豚鼠ELISA法和ToBI法已以部分体外检测代替了体内检测。目前我国急需开展相关方面的研究以提升我国吸附破伤风疫苗体外效价检测水平。

关键词：破伤风疫苗效价检测优化方法

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百日咳黏附素的原核表达及其单克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1344-1348页

作者：徐颖华张华捷谭亚军吴丽洁王丽婵侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化*** M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳... 详细信息

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化*** M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳、阴离子交换层析纯化后,采用Western blot和ELISA法鉴定重组Prn蛋白的反应原性。以纯化的重组Prn蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制备的单抗进行鉴定。结果重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组Prn蛋白相对分子质量约为69 000,主要以包涵体形式表达;纯化的重组Prn蛋白的纯度达95%以上,产量可达25 mg/L,能与不同来源的抗Prn-Ab血清特异性结合。获得2株分泌抗Prn单抗的杂交瘤细胞株,分泌的单抗均为IgG1类,轻链类型均为κ,效价均达1∶105以上,并能特异性识别Prn蛋白,而与百日咳杆菌其他抗原蛋白无交叉反应。结论原核表达、纯化了重组Prn蛋白,并制备了2株效价高、特异性强的单抗,为无细胞百日咳疫苗的质量控制及百日咳杆菌致病机制的研究提供了材料。

关键词：百日咳黏附素原核细胞基因表达单克隆抗体

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百日咳鲍特菌基因组多态性分析

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国际检验医学杂志 2012年第22期33卷 2691-2694页

作者：徐颖华卫辰王丽婵骆鹏侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支... 详细信息

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支气管黏附因子(tcfA)和百日咳毒素基因上游启动子区域(ptxP)3种等位基因序列分析结果显示,共发现3种等位基因组合型:Prn1/ptxP1/tcfA2、Prn2/ptxP3/tcfA2和Prn3/ptxP1/tcfA2,所占比例分别为71.43%、19.05%和9.52%。MLVA法将21株分离菌株分成了12个不同的MLVA型,MLVA-136型和MLVA-152型为主要流行MLVA型,所占比例分别为28.57%和19.05%,并发现1种新MLVA型菌株。统计学分析表明MLVA法较等位基因分型法具有更高的分辨率。结论国内部分地区百日咳杆菌流行菌株与欧洲其他国家不同,掌握百日咳杆菌分子流行病学的第一手资料,对有效预防和控制百日咳的流行以及制定新的百日咳疫苗免疫策略具有指导意义。

关键词：博德特菌百日咳基因组多态观察遗传

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低抗原含量百日咳疫苗效力评价研究

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国际检验医学杂志 2012年第21期33卷 2561-2562,2564页

作者：徐颖华骆鹏王丽婵卫辰侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所... 详细信息

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所获得低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验效力结果数据均较低(<1.1IU/mL),中检院计算出的效价均在国外实验室分析得出效价的95%可信区间内。结论 MICA方法可应用于低抗原含量百日咳疫苗效力检测分析,该研究为进一步确定中国低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验检定标准奠定了基础。

关键词：百日咳菌苗效力改良小鼠脑腔攻击试验

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我国动物源性免疫血清制品的质量控制和展望

我国动物源性免疫血清制品的质量控制和展望

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：张华捷侯启明中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

动物源性免疫血清是用特异性抗原(如毒素、类毒素、菌体或病毒等)对动物进行超免,将血浆经胃酶消化和提纯制成的被动免疫制剂,用于某些特定疾病或中毒的治疗和预防。其种类包括抗毒素和抗血清,两者间无明确界限,一般而言,前者多以细菌... 详细信息

动物源性免疫血清是用特异性抗原(如毒素、类毒素、菌体或病毒等)对动物进行超免,将血浆经胃酶消化和提纯制成的被动免疫制剂,用于某些特定疾病或中毒的治疗和预防。其种类包括抗毒素和抗血清,两者间无明确界限,一般而言,前者多以细菌毒素或类毒素作为免疫原,如破伤风抗毒素,后者则多以其它