检索结果-内蒙古大学图书馆

中国新药杂志 2021年第19期30卷 1746-1751页

作者：张可华纳涛韩晓燕吴婷婷张丽霞贾春翠袁翔鹤冯建萍项楠孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

自2015年《干细胞临床研究管理办法(试行)》颁布以来,中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心承接了大量的干细胞临床研究细胞制剂质量复核工作,在与干细胞制剂研发机构技术沟通、资料审阅过程中发现了若干在细胞制... 详细信息

自2015年《干细胞临床研究管理办法(试行)》颁布以来,中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心承接了大量的干细胞临床研究细胞制剂质量复核工作,在与干细胞制剂研发机构技术沟通、资料审阅过程中发现了若干在细胞制备工艺、制剂质量标准中存在的问题,在质量复核中也发现在干细胞安全性和干细胞特性检测方面存在多项不符合规定或异常的情况。本文总结了当前本中心在干细胞质量复核中发现的各种情况并进行了简要分析,为干细胞制剂研发生产、质量控制以及临床使用提供参考。

关键词：干细胞干细胞临床研究质量复核

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浅谈细胞产品开发用人诱导多能干细胞的建株要求

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中国新药杂志 2022年第21期31卷 2101-2108页

作者：张可华纳涛孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells, hiPSC)自从问世以来一直是干细胞和再生医学领域研究的热点，在国内干细胞产品临床转化研究高速发展的今天，随着hiPSC重编程技术、多能干细胞培养技术、干细胞诱导分化技术以... 详细信息

人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells, hiPSC)自从问世以来一直是干细胞和再生医学领域研究的热点，在国内干细胞产品临床转化研究高速发展的今天，随着hiPSC重编程技术、多能干细胞培养技术、干细胞诱导分化技术以及多能干细胞质量研究技术的不断深化，以hiPSC为基础开发的衍生产品开始从实验室逐渐走向临床产品开发及研究阶段。本文以基于hiPSC开发药品为出发点和思路，参考相关法规和指南，简述hiPSC的建株以及细胞株的质量要求，为开发以hiPSCs为基础的细胞治疗产品提供参考，以期在细胞产品开发的重要源头hiPSC细胞株尽可能满足药品监管的要求。

关键词：细胞治疗干细胞治疗诱导多能干细胞建株质量控制

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复制型慢病毒VSV-G qPCR检测方法的验证及初步应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第7期41卷 538-544页

作者：吴雪伶赵翔孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立复制型慢病毒(replication competent lentivirus,RCL)VSV-G qPCR检测方法,并进行方法学性能验证及初步应用。方法以慢病毒载体包膜VSV-G基因为目标序列,建立荧光定量PCR检测方法,并对方法的专属性、线性、扩增效率、精密度、... 详细信息

目的建立复制型慢病毒(replication competent lentivirus,RCL)VSV-G qPCR检测方法,并进行方法学性能验证及初步应用。方法以慢病毒载体包膜VSV-G基因为目标序列,建立荧光定量PCR检测方法,并对方法的专属性、线性、扩增效率、精密度、准确度、线性范围、检测限、定量限及耐用性进行验证。利用所建立的方法进行CAR-T细胞、慢病毒载体生产终末细胞及慢病毒载体收获液样品的初步应用性研究。结果建立的VSV-G荧光定量PCR法,专属性较好,对293T细胞、PBMC细胞及C8166细胞均无特异性扩增,线性范围为1×10^(2)拷贝/test~1×10^(9)拷贝/test,R2能够达到0.998以上,扩增效率在93%~98%之间,精密度RSD<12%,准确度回收率为85%~106%,最低检出限和最低定量限分别为5拷贝/test和40拷贝/test。另外,该方法的耐用性较好。各项验证结果均表明该方法能够满足检测的要求。利用该方法对54批样品(包括CAR-T细胞、慢病毒载体及载体生产终末细胞)进行RCL C8166细胞培养法的终点检测,结果显示54批样品均为阴性。结论成功建立了VSV-G实时荧光定量PCR法,各项验证参数均可满足检测要求,该方法的应用将进一步提高慢病毒载体相关产品的安全性。

关键词：复制型慢病毒 VSV-G 嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)

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生产用细胞基质中猪细小病毒污染检测方法的建立及应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第4期35卷 127-132页

作者：吴雪伶樊金萍冯建平赵翔孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心、卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、最低检出... 详细信息

目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、最低检出限等参数进行验证，并分析待测样品对试验的干扰。将PPV毒种感染ST细胞，制备病毒。以ST细胞为敏感细胞，建立PPV ST细胞感染性试验，并将ST细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合，建立ST细胞感染-PCR法，分析感染-PCR方法的灵敏度。利用所建立的方法进行生产用细胞样本的初步应用研究。结果 PPV荧光定量PCR法的特异性较好，与其他种属的细小病毒、猴SV40病毒及其他猪源病毒无明显的交叉反应，在109～104拷贝／μl范围内线性较好，R2达到0．98以上，灵敏度为1×10^4拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度均＜5％，试验内病毒定量拷贝数的精密度为5％～15％，试验间为30％～40％，最低感染性病毒滴度检测限为1CCID50／ml。待测细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。 ST细胞感染-PCR法的灵敏度为0．01CCID50／ml。利用荧光定量PCR法对22份细胞样品进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了PPV荧光定量PCR检测法及ST细胞感染-PCR法，能够用于细胞中PPV的检测，有助于进一步提高生产用或治疗用细胞的安全性。

关键词：猪细小病毒荧光定量PCR ST细胞感染性试验感染-PCR

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慢病毒载体整合位点检测方法的系统适应性对照品初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第10期43卷 791-801页

作者：周小雅贾芳英吴雪伶张可华孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的评估8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞作为慢病毒载体整合位点检测方法的系统适应性对照品的可行性。方法选择8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞,通过有限稀释法挑选单克隆;建立数字PCR法检测8E5细胞内HIV-1的拷贝数和CD19-CAR-Jurkat细胞... 详细信息

目的评估8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞作为慢病毒载体整合位点检测方法的系统适应性对照品的可行性。方法选择8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞,通过有限稀释法挑选单克隆;建立数字PCR法检测8E5细胞内HIV-1的拷贝数和CD19-CAR-Jurkat细胞内CAR的拷贝数;采用高通量测序技术(全基因组重测序法、改良的基因组测序法和探针杂交捕获法)对8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞的整合位点进行检测,并采用光学基因组图谱技术(optical genome mapping,OGM)对整合位点进行确认。结果经有限稀释法,挑选出3个8E5细胞克隆和6个CD19-CAR-Jurkat细胞克隆。通过数字PCR及流式细胞术检测基因拷贝数,确定8E5-D8和CD19-CAR-Jurkat 2-6作为候选细胞,并扩增冻存。数字PCR检测结果显示,8E5-D8细胞含有约1拷贝/细胞,CD19-CAR-Jurkat 2-6细胞含有约13拷贝/细胞;高通量测序结果显示,8E5-D8细胞有1个整合位点,CD19-CAR-Jurkat 2-6细胞有13个整合位点,与拷贝数检测结果一致。这些整合位点均通过OGM法在染色体亚显微水平进一步得到确认。结论对8E5-D8细胞和CD19-CAR-Jurkat 2-6细胞的插入拷贝数及整合位点的鉴定结果表明,其可作为进一步研制CAR-T细胞慢病毒载体整合位点检测方法的系统适应性对照品。

关键词：慢病毒载体整合位点数字PCR 高通量测序光学基因组图谱技术

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免疫细胞治疗制剂体外杀伤效力评价方法的分析研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第8期37卷 601-606页

作者：宋雪吴雪伶樊金萍赵翔冯建平孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心“卫生和计划生育委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室” 北京100050

目的通过对4种体外杀伤检测方法的方法学优化及分析比较,以期寻找到一种可以替代经典51Cr释放法、相对快速、并可用于多种具有杀伤活性免疫细胞的体外杀伤效力评价方法.方法以自然杀伤性NK细胞系NK-92为效应细胞,以K562细胞为靶细胞,... 详细信息

目的通过对4种体外杀伤检测方法的方法学优化及分析比较,以期寻找到一种可以替代经典51Cr释放法、相对快速、并可用于多种具有杀伤活性免疫细胞的体外杀伤效力评价方法.方法以自然杀伤性NK细胞系NK-92为效应细胞,以K562细胞为靶细胞,分别对4种体外杀伤检测方法BATDA法、CAM法、CytoTox-Glo法和PKH法的标记条件、杀伤时间、效靶比等参数进行优化,分析每种方法的实验内及实验间可重复性,以及与51Cr释放法的相关性,并初步用于不同靶细胞、效应细胞的广谱性分析.结果经方法学优化后,4种体外杀伤方法在一定范围内均可显示出杀伤效力与效靶比的相关性,但与其他3种方法相比,CytoTox-Glo法在高效靶比时（40∶1）表现出明显的倒钩效应;4种方法中,BATDA法的检测时间最短,NK-92细胞与K562细胞作用1 h即可检测出明显的杀伤效力,CAM法及PHK法基本上都需要作用4 h才能测出明显的杀伤效力,而CytoTox-Glo法可能需要6～8 h才能看出明显的杀伤结果;4种方法的实验内与实验间可重复性均相对较好,其中BATDA法及CAM法表现出更好的可重复性;4种方法与51Cr释放法均具有一定的相关性,但BATDA法与51Cr释放法曲线的拟合度更好;与其他3种方法相比,BATDA法可用于贴壁性的靶细胞Caov3的杀伤效力检测,且在自体NK细胞和CD19-CAR T细胞的杀伤检测中亦显示出较好的结果.结论与其他3种方法相比,BATDA法的检测结果与51Cr释放法的线性相关性最好,作用时间短、方法的可重复性好,并且对贴壁性靶细胞的检测也比其他方法有优势,BATDA法具有替代51Cr释放法用于NK及其他免疫细胞的体外杀伤效力评价的应用前景.

关键词： NK细胞杀伤效率 BATDA法 CAM法 CytoTox-Glo法 PKH法

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基于细胞色素b序列差异的细胞种属鉴别及种属间细胞交叉污染的快速检测方法

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药物分析杂志 2014年第11期34卷 2054-2059页

作者：纳涛袁宝珠中国食品药品检定研究院细胞资源保藏研究中心、卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立一种优于传统方法的、简单快速和灵敏度高的细胞种属鉴别及种属间细胞交叉污染的PCR检测方法。方法:以细胞色素b(cytochrome b)作为研究内容,设计并优化针对10种不同动物种属的引物,进行单种属引物和混合种属引物PCR反应的比... 详细信息

目的:建立一种优于传统方法的、简单快速和灵敏度高的细胞种属鉴别及种属间细胞交叉污染的PCR检测方法。方法:以细胞色素b(cytochrome b)作为研究内容,设计并优化针对10种不同动物种属的引物,进行单种属引物和混合种属引物PCR反应的比较研究。结果:本文设计出可通过混合引物单PCR方式高效、敏感地检测10种常见动物种属细胞,并有效判断种属间细胞交叉污染的PCR检测方法。结论:本方法明显优于传统的细胞种属鉴定及种属间细胞交叉污染的方法,能显著提高对细胞资源库细胞、生产用细胞基质及治疗性细胞产品的质控能力。

关键词：种属鉴别细胞交叉污染细胞色素b PCR检测方法治疗性细胞产品生产用细胞基质快速检测方法研究

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用于鉴别猴源细胞及其交叉污染短串联重复序列图谱分析方法的建立

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中国生物制品学杂志 2018年第8期31卷 874-881页

作者：樊金萍袁宝珠中国食品药品检定研究院细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立用于鉴别猴源细胞及其交叉污染的短串联重复序列(Short Tandem Repeat,STR)图谱分析方法。方法选择可用于猴源细胞鉴别的10个STR位点,采用PCR-毛细管电泳分析方法分别检测猴源、人源、鼠源细胞及猴源细胞交叉污染模型细胞中的10... 详细信息

目的建立用于鉴别猴源细胞及其交叉污染的短串联重复序列(Short Tandem Repeat,STR)图谱分析方法。方法选择可用于猴源细胞鉴别的10个STR位点,采用PCR-毛细管电泳分析方法分别检测猴源、人源、鼠源细胞及猴源细胞交叉污染模型细胞中的10个STR位点,并验证方法的特异性及稳定性。同时对5家不同受检单位生产用的Vero细胞进行STR图谱分析。结果 STR图谱分析法可为每一个独立的猴源细胞系提供独特的STR图谱,并能有效判断猴源细胞与其他细胞间的交叉污染,且特异性及稳定性较高。采用该方法检测的5株不同受检单位生产用的Vero细胞均未发生污染。结论建立的STR图谱分析方法具有良好的特异性和稳定性,可用于不同猴源细胞系的鉴别和有效判断相关细胞间交叉污染。

关键词：短串联重复序列图谱猴源细胞细胞鉴别交叉污染

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人胚胎干细胞诱导分化的肝样细胞质量评价研究

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中国新药杂志 2021年第4期30卷 320-332页

作者：纳涛孙懿吴婷婷欧阳琦卢光琇林戈袁宝珠中国食品药品检定研究院细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室人类干细胞国家工程研究中心湖南光琇高新生命科技有限公司

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞... 详细信息

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞。为满足临床应用研究的需要,hESC-HLCs需具备明确的基本生物学属性、微生物学安全性、生物学安全性及生物学有效性的总体质量要求,其中每一类质量要求是由多个关键质量属性所组成。hESC-HLCs的整个制备过程是从人胚胎干细胞(hESCs)向hESC-HLCs的全分化过程,可基本分为4个阶段,各阶段在细胞形态、标志基因/蛋白的表达、生物学功能等方面均有明显的特征。本文就h ESC-HLCs总体质量要求及各质量属性进行讨论,目的是在我国建立临床研究用hESC-HLCs质量评价方法和评价策略。

关键词：胚胎干细胞肝样细胞质量属性质量评价阶段性诱导分化

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IL-17A与间充质干细胞免疫调控功能关联性的研究进展

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中国医药生物技术 2020年第3期15卷 295-300页

作者：李欣吴婷婷袁宝珠中国食品药品检定研究院细胞资源保藏及研究中心北京100050

间充质干细胞(MSCs)是一类具有自我更新、多向分化潜能、免疫调控及组织再生功能,并广泛存在于各组织、形态类似于成纤维细胞的干细胞类型。由于来源广泛,分离和制备技术相对简单,以及独特的生物学功能,特别是其免疫调控功能,MSCs已成... 详细信息

间充质干细胞(MSCs)是一类具有自我更新、多向分化潜能、免疫调控及组织再生功能,并广泛存在于各组织、形态类似于成纤维细胞的干细胞类型。由于来源广泛,分离和制备技术相对简单,以及独特的生物学功能,特别是其免疫调控功能,MSCs已成为现阶段临床应用研究最为广泛的干细胞类型。

关键词：临床应用研究免疫调控间充质干细胞成纤维细胞多向分化潜能再生功能分离和制备自我更新

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