检索结果-内蒙古大学图书馆

中国公共卫生 2022年第10期38卷 1285-1290页

作者：王春娥石继春徐潇刘茹凤李康梁丽叶强徐颖华中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的分析A族链球菌(GAS)不同标准菌株的基因组特征,为进一步探讨GAS致病性、耐药机制和分子进化规律提供参考依据。方法采用高通量测序技术对中国医学细菌保藏管理中心保藏的10株GAS标准菌株进行全基因组测序,分析菌株的M蛋白(emm)基因... 详细信息

目的分析A族链球菌(GAS)不同标准菌株的基因组特征,为进一步探讨GAS致病性、耐药机制和分子进化规律提供参考依据。方法采用高通量测序技术对中国医学细菌保藏管理中心保藏的10株GAS标准菌株进行全基因组测序,分析菌株的M蛋白(emm)基因及多位点序列分型(MLST);采用velvet 1.2.03和glimmer 3.02等生物信息学软件对测序数据进行基因组装、基因预测及功能注释,并以此分析基因组中所含耐药基因、毒力基因及插入序列(IS)种类;应用Blast比对分析不同菌株基因组中的特定致热外毒素B基因和系列超抗原基因序列,通过比较基因组学分析拟合泛基因组和核心基因组积累曲线,筛选核心基因SNP,构建系统发育分子进化树。结果10株GAS标准菌株的染色体全基因组序列大小约为1.8 Mbp,在不同菌株基因组鉴定出1682~1849个基因;通过对基因组毒力基因注释分析发现,10株GAS标准菌株基因组中含有16~22种数量不等的毒力因子,其中部分是在GAS基因组保守存在的,包括细菌致病相关的层粘连蛋白基因(lmb)、致热外毒素B基因(speB)、纤维基因结合蛋白(Fbp);基因组耐药基因注释分析发现,每株GAS标准菌株仅携带1种耐药基因,除CMCC(B)32308菌株基因组携带抗大环内脂抗生素相关的lmrP基因外,在其他9株GAS基因组中均发现与氟喹诺酮抗性相关的patB耐药基因;10株GAS标准菌株中共含有IS1562、IS1239、ISSpy1、IS1548和ISSag5等5种IS元件,不同菌株之间IS种类略有差别;比较基因组学分析结果显示,随着GAS基因组测序数量的增加,泛基因组随之增加,而核心基因组则随着不同GAS菌株数量的增加而逐渐趋于稳定;本研究10株GAS标准菌株与已发表的S10394、SF370、A20、NZ131和s6180等5株GAS代表性菌株系统发育树进化分析结果显示,15株不同GAS菌株可分成4个进化分支,其中CMCC(B)32067和CMCC(B)32301分别形成2个独立进化分支,与其他GAS标准菌株进化距离较远。结论10株GAS标准菌株的基因组结构高度相似,GAS的核心基因组为相对稳定型,泛基因组为开放型。

关键词： A族链球菌(GAS) 标准菌株全基因组序列分析

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粪肠球菌核酸检测试剂国家参考品的研制

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食品安全质量检测学报 2021年第12期12卷 4801-4806页

作者：王春娥石继春徐潇刘茹凤杜宗利龙新星徐颖华叶强中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的研制粪肠球菌核酸检测试剂的国家参考品。方法将9株粪肠球菌和8株非粪肠球菌参考品候选菌株分别在各自适宜的培养条件下培养,收集新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。组织3家实验室对研制的... 详细信息

目的研制粪肠球菌核酸检测试剂的国家参考品。方法将9株粪肠球菌和8株非粪肠球菌参考品候选菌株分别在各自适宜的培养条件下培养,收集新鲜培养物进行计数、灭活、稀释和分装,并对参考品进行均匀性和稳定性评估。组织3家实验室对研制的参考品进行了协作标定。结果研制了由9份阳性候选参考品、8份阴性候选参考品、重复性参考品和最低检出限参考品组成的粪肠球菌参考品。阳性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品循环阈值(cycle threshold, Ct)的变异系数(coefficient of variation, CV)均在5.0%以内,分装均匀性良好;参考品各成分的稳定性良好(P值均小于0.05);协作标定结果显示阳性参考品符合率及阴性参考品符合率均为100%,重复性参考品检测Ct值的CV均在5.0%以内,参考品最低检出限为1.0×10^(3)个/mL。结论研制的参考品可用于粪肠球菌核酸检测试剂的质量评价。

关键词：粪肠球菌核酸国家参考品均匀性稳定性协作标定

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不同来源粪肠球菌的比较基因组学分析

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中国病原生物学杂志 2022年第7期17卷 784-789页

作者：孙淑玥王珊珊崔生辉徐颖华卢雪梅广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006 中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的分析不同来源粪肠球菌全基因组特征及其分子进化规律。方法对收集的不同来源粪肠球菌进行全基因组序列测序,利用比较基因组学分析粪肠球菌的基因特征、耐药基因和毒力基因携带情况,并以此进行泛基因组和核心基因组分析,构建系统发育... 详细信息

目的分析不同来源粪肠球菌全基因组特征及其分子进化规律。方法对收集的不同来源粪肠球菌进行全基因组序列测序,利用比较基因组学分析粪肠球菌的基因特征、耐药基因和毒力基因携带情况,并以此进行泛基因组和核心基因组分析,构建系统发育树,进行系统进化分析。结果6株不同来源粪肠球菌染色体全基因组序列全长为2450754~2731452 bp,共含有2669~3085个基因,基因组的平均GC含量为38.0%。粪肠球菌具有开放型泛基因组,而核心基因组为稳定型。不同来源菌株基因组中均含有3~14种耐药基因和8~17种毒力基因。基于核心基因系统进化树分析显示,不同来源的粪肠球菌分子进化均匀分布,相互重叠,无明显聚类趋势。结论粪肠球菌具有开放型泛基因组,其核心基因为稳定型,不同来源分离菌株进化均匀分布,这些结果为后续揭示粪肠球菌分子遗传进化规律等研究奠定了基础。

关键词：粪肠球菌全基因组测序系统发育分析比较基因组学

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金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品的研制

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食品安全质量检测学报 2021年第20期12卷 8251-8257页

作者：陈驰梁丽王春娥石继春龙新星刘茹凤黄洋李康徐潇李江姣徐颖华叶强中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的研制金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品。方法将10株金黄色葡萄球菌和10株阴性对照代表性菌株分别在适宜条件下复苏培养,制备合适浓度的菌悬液,并加热灭活和分装。随机抽样不同候选参考品样品10支进行均匀性分析,并将样品... 详细信息

目的研制金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品。方法将10株金黄色葡萄球菌和10株阴性对照代表性菌株分别在适宜条件下复苏培养,制备合适浓度的菌悬液,并加热灭活和分装。随机抽样不同候选参考品样品10支进行均匀性分析,并将样品分别置于2~8、25、37℃条件下保藏以及反复冻融,评价标准物质的稳定性。同时对候选参考品的准确性、特异性、重复性、最低检出限进行分析,并组织8家实验室进行协作标定。结果制备了由阳性、阴性、重复性和最低检出限样品组成的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用候选参考品。不同候选参考品不同样品间的Ct值的变异系数在1.23%~3.86%之间,表明制备候选参考品均匀性良好。同时证实P1~10阳性和最低检出限候选参考品样品在反复冻融及加速破坏条件下稳定性良好。应用3个不同厂家生产试剂盒进行重复性验证实验显示,样本的Ct值均小于5.0%,表明候选参考品的重复性良好。除P6阳性候选参考品样品不能被部分试剂盒检出,其余阳性参考品样品均能成功检测、最低检出限为1.0×10^(3)个/m L。协作标定结果进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论研制的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品已获得批准,可用于金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒的质量控制和评价。

关键词：金黄色葡萄球菌核酸国家参考品均匀性稳定性

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无细胞百白破联合疫苗腺苷酸环化酶毒素液质联用定量检测方法的建立和应用

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微生物学免疫学进展 2022年第1期50卷 22-29页

作者：卫辰吴燕蔡心怡晁哲王丽婵马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 武汉生物制品研究所有限责任公司细菌类疫苗室湖北武汉430200

目的建立不同工艺配方的无细胞百白破联合疫苗(diphtheria, tetanus and acellular Pertussis combined vaccine, DTaP)中腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, ACT)的液质联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)定量检测方法。方法对百日咳疫苗精制液、原液、DTaP成品和ACT参考品进行酶解前处理,采用BioC18 (2.1 mm×150 mm, 3μm)为固定相,0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM)对特定离子对进行检测。以ACT参考品建立标准曲线,对样品中的ACT准确定量,并对方法进行验证及初步应用。结果肽段ITGDAQANVLR特异性良好,在1.25~31.25μg/mL范围内线性良好(R^(2)>0.99),残差平方和为2.55,不同基质稀释标准曲线的残差平方和分别为3.08和1.32,基质效应较弱。DTaP成品回收率为80%~109%、原液回收率为93%~121%、精制液回收率为112%~120%;进样精密度为2.32%;中间精密度<20%,具备较好的准确性、精密度,且不同型号仪器的系统适用性研究结果一致。将该方法用于检测4个厂家的无细胞百白破联合疫苗多个工序段含有百日咳疫苗的样品,其中2个厂家的样品均有ACT检出,且ACT在共纯化阶段不断富集达100~250倍,另2个厂家产品仅在发酵液和盐析液中检出。结论建立的LC-MS/MS检测方法准确性和精密度都比较好,基质效应弱,可用于DTaP中ACT的定量检测和工艺过程监测。

关键词：无细胞百白破联合疫苗腺苷酸环化酶毒素质量控制液相色谱串联质谱

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食品来源粪肠球菌的全基因组分析

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食品安全质量检测学报 2021年第19期12卷 7572-7577页

作者：孙淑玥王珊珊崔生辉徐颖华卢雪梅广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006 中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的了解食品来源粪肠球菌的全基因组分子特征,并与临床分离菌株进行比较基因组学分析。方法对收集的食品来源粪肠球菌进行全基因组测序和生物信息学分析,比较分析3株食品来源粪肠球菌和7株已发表的临床分离粪肠球菌基因组,对比粪肠球... 详细信息

目的了解食品来源粪肠球菌的全基因组分子特征,并与临床分离菌株进行比较基因组学分析。方法对收集的食品来源粪肠球菌进行全基因组测序和生物信息学分析,比较分析3株食品来源粪肠球菌和7株已发表的临床分离粪肠球菌基因组,对比粪肠球菌基因组中携带的耐药基因、毒力基因和移动元件,筛选核心基因,构建系统进化树。结果 3株食品来源粪肠球菌染色体全基因组序列全长分别为2816436、3005875和2818728 bp,共含有2733、2853和2756个基因,基因平均鸟嘌呤和胞嘧啶(guanine and cytosine,GC)含量为38.0%。在全基因组核酸水平上,食品与临床分离的粪肠球菌线性关系良好,基因组结构高度相似。3株食品来源菌株基因组中含有3-7种耐药基因、8-19种毒力基因和42-67个移动元件,与临床分离菌株比较,无显著性差异(P>0.05)。系统进化树分析发现食品来源和临床分离粪肠球菌分布在一个进化分枝,分子遗传关系距离较近。结论本研究获得了食品来源粪肠球菌全基因组基本特征的背景材料,证实了食品来源和临床分离粪肠球菌进化溯源关系相近,基因组无显著差异(P>0.05),为后续食品工业界实际应用粪肠球菌的安全性评价奠定了基础。

关键词：粪肠球菌全基因组测序系统发育分析比较基因组学

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食源性人兽共患病病原检测方法研究进展

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食品安全质量检测学报 2021年第17期12卷 6743-6750页

作者：朱宝康田博徐颖华卢雪梅广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006 广东药科大学药学院广州510006 北京中科助腾科技有限公司北京100084 中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

食源性人兽共患病是指摄入被人与脊椎动物共同病原微生物污染的食物后,在人与脊椎动物之间相互传播的疾病。随着饮食习惯及畜牧业的发展,食源性人兽共患病对食品安全、人类公共卫生安全及畜牧业的持续发展发起了更加严峻的挑战。近几年... 详细信息

食源性人兽共患病是指摄入被人与脊椎动物共同病原微生物污染的食物后,在人与脊椎动物之间相互传播的疾病。随着饮食习惯及畜牧业的发展,食源性人兽共患病对食品安全、人类公共卫生安全及畜牧业的持续发展发起了更加严峻的挑战。近几年全球范围内食源性人兽共患病的传播,正是由人类的不良饮食习惯、对人与自然和谐共处意识的缺乏、对公共卫生风险防控能力的不足所导致的。因此,了解目前对食源性人兽共患病的防治措施及防控检测手段,进一步开发拓展对食源性人兽共患病病原安全有效、快速、经济的检测方法是十分必要的。本文综述了近年以细菌、病毒、寄生虫为代表的食源性人兽共患病病原的常用检测手段,以期为食品质量安全控制提供参考,同时也为新技术的开发提供研究基础。

关键词：食源性人兽共患病食品安全病原检测

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钩端螺旋体疫苗诱导抗体水平动态分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第11期39卷 864-868页

作者：张影徐颖华刘向芹张金龙陈质斌王国柱辛晓芳曾明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 中国医学细菌保藏管理中心北京102629

目的探讨钩端螺旋体(简称钩体)疫苗免疫豚鼠后所诱导的抗体水平及动态变化。方法筛选检测抗原,利用ELISA法分析来源于不同厂家的不同批次的钩体疫苗免疫豚鼠后所诱导抗体反应,进一步利用钩体菌攻击豚鼠动物模型,探讨研究钩体疫苗诱导的... 详细信息

目的探讨钩端螺旋体(简称钩体)疫苗免疫豚鼠后所诱导的抗体水平及动态变化。方法筛选检测抗原,利用ELISA法分析来源于不同厂家的不同批次的钩体疫苗免疫豚鼠后所诱导抗体反应,进一步利用钩体菌攻击豚鼠动物模型,探讨研究钩体疫苗诱导的抗体反应与其保护性的相关性。结果来源于钩体LigA蛋白和腐生型PatocⅠ抗原与钩体疫苗免疫豚鼠血清无明显抗原抗体反应。选用钩体疫苗所含的相应血清群菌种的菌体蛋白作为检测抗原,均呈现明显IgG和IgM抗体反应,其中抗原特异性IgG抗体在末次免疫后35 d达到峰值,而抗原特异性IgM抗体的最高峰为末次免疫后11 d。动物攻击试验结果表明,与3倍及9倍疫苗稀释免疫组比较,原倍钩体疫苗免疫动物血清呈现显著的IgG和IgM抗体反应,具有良好的保护性。结论获得了钩体疫苗诱导抗体动态变化规律,初步证实了钩体疫苗诱导血清抗体反应与其保护性具有一定相关性,这些研究为后续钩体疫苗效力替代方法研究奠定基础。

关键词：钩端螺旋体疫苗抗体保护性

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不同品牌胎牛血清用于肺炎链球菌调理吞噬作用的比较

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微生物学免疫学进展 2019年第5期47卷 22-26页

作者：黄洋徐潇李康李江姣杜慧竟郑锐孙文媛叶强中国食品药品检定研究院呼吸道细菌疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室中国医学细菌保藏管理中心

目的比较不同品牌的胎牛血清用于HL-60细胞分化,以及配制成调理缓冲液后对肺炎链球菌调理吞噬杀菌力的影响。方法采用5个不同品牌(品牌1~5)的胎牛血清用于HL-60细胞分化培养液和调理缓冲液的配制,计算分化后细胞活力,并进行肺炎链球... 详细信息

目的比较不同品牌的胎牛血清用于HL-60细胞分化,以及配制成调理缓冲液后对肺炎链球菌调理吞噬杀菌力的影响。方法采用5个不同品牌(品牌1~5)的胎牛血清用于HL-60细胞分化培养液和调理缓冲液的配制,计算分化后细胞活力,并进行肺炎链球菌调理吞噬杀菌试验,比较对照孔菌数和质控血清的调理指数。结果与品牌1胎牛血清分化细胞的活力相比较,品牌5分化的细胞活力差异具有统计学意义(P=0.023,P<0.05),而品牌2、3、4分化细胞的活力差异均不具有统计学意义(P=0.129、0.186、0.440,P>0.05);使用品牌5分化的细胞,对3、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F血清群/型调理指数因为调理吞噬后菌落数过少,无法计算。使用品牌5配制的调理缓冲液,对3、9V、19F血清群/型调理指数因为调理吞噬后菌落数过少,无法计算。结论为保障肺炎链球菌调理吞噬试验的稳定性,建议对试验过程中使用的胎牛血清进行筛选。

关键词：肺炎链球菌调理吞噬胎牛血清

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壳聚糖介导甲型副伤寒沙门菌nmpC和pagC DNA疫苗的构建及其免疫效果

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中国生物制品学杂志 2018年第10期31卷 1055-1060页

作者：梁昊宇任慧梅张影董思国王斌曾明中国食品药品检定研究院肠道细菌疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 国家食品药品监督管理总局药品审评中心北京100022

目的构建壳聚糖(chitosan,CS)介导的甲型副伤寒沙门菌nmpC和pagC的DNA疫苗,并探讨该疫苗的免疫效果。方法按哺乳动物的密码子偏好性对nmpC和pagC的基因序列进行优化,并将优化后的序列克隆至真核表达载体provax中,构建provax-nmpC和prova... 详细信息

目的构建壳聚糖(chitosan,CS)介导的甲型副伤寒沙门菌nmpC和pagC的DNA疫苗,并探讨该疫苗的免疫效果。方法按哺乳动物的密码子偏好性对nmpC和pagC的基因序列进行优化,并将优化后的序列克隆至真核表达载体provax中,构建provax-nmpC和provax-pagC DNA疫苗。采用复凝聚法制备载DNA疫苗的CS纳米粒,并对CS/DNA纳米粒的特性进行检测。将provax-nmpC和provax-pagC DNA疫苗及其相应的CS纳米粒体外转染BHK细胞,采用Western blot检测目的蛋白的表达。采用活体电击法分别用不同组分的蛋白免疫小鼠,ELISA法检测血清抗体水平及抗体类型。结果 provax-nmpC和provax-pagC DNA疫苗经双酶切鉴定,构建正确。疫苗可与CS发生有效结合,纳米粒形似球形,粒径均一,包封率均达90%以上,且CS可防止DNA被DNaseⅠ酶降解。provax-nmpC及CS/provax-nmpC均能诱导小鼠产生有效的免疫反应,两组间差异无统计学意义(P>0.05);provax-pagC与CS/provaxpagC均能诱导小鼠产生有效的免疫反应,且provax-pagC组的抗体水平明显高于CS/provax-pagC(P<0.05)。provax-nmpC和provax-pagC组的IgG1及IgG2a抗体水平均高于相应的CS组(P<0.05),且IgG1和IgG2a间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DNA疫苗provax-nmpC和provax-pagC均可诱导有效的免疫反应;载基因CS纳米粒并未增强DNA疫苗的免疫效果;CS未改变DNA疫苗的免疫应答类型,但具有调节Th1和Th2平衡的作用。

关键词：壳聚糖甲型副伤寒沙门菌 nmpC pagC DNA疫苗

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