检索结果-内蒙古大学图书馆

国际生物制品学杂志 2015年第3期38卷 105-107页

作者：徐康维于丹邵铭刘书珍邹勇李长贵中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室、卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京科兴生物制品有限公司质控 100085

目的比较人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗在小鼠中的免疫原性，为该疫苗的类型选择提供初步依据。方法采用相同血凝素含量（5μg）的H7N9全病毒灭活和裂解疫苗（含或不含氢氧化铝佐剂共4种类型），分别对BALB／c小鼠进行1针或... 详细信息

目的比较人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗在小鼠中的免疫原性，为该疫苗的类型选择提供初步依据。方法采用相同血凝素含量（5μg）的H7N9全病毒灭活和裂解疫苗（含或不含氢氧化铝佐剂共4种类型），分别对BALB／c小鼠进行1针或2针免疫。免疫后，用血凝抑制（hemagglutination inhibition，HI）试验检测血清抗体滴度，比较不同类型疫苗的免疫效果。结果小鼠免疫1针全病毒灭活疫苗后，全部血清阳转，HI抗体几何平均滴度（geometricmeantiter，GMT）为149；免疫2针后，抗体GMT为243。小鼠免疫1针裂解疫苗后无抗体阳转；免疫2针后全部抗体阳转，GMT为139。两种疫苗添加铝佐剂后，诱导的HI抗体GMT仅略有增加。结论H7N9全病毒灭活疫苗在小鼠中的免疫原性较强。在同样类型和剂量的情况下，裂解疫苗需要免疫两次才能达到与全病毒疫苗相同的效果。铝佐剂对免疫原性提升不明显。

关键词：流感疫苗流感病毒A型免疫原性

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乙脑病毒包膜蛋白可溶性表达及纯化

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第7期34卷 546-550页

作者：刘欣玉俞永新鲁旭余凝盼李玉华中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京100050

目的：通过原核表达载体对乙脑病毒包膜蛋白进行可溶性表达和纯化。方法筛选不同的表达载体、宿主菌株、表达条件，以获得可溶性的目的蛋白表达。采用镍柱和凝胶过滤层析对表达蛋白进行纯化。结果对不同的载体、菌株、表达条件筛选后，... 详细信息

目的：通过原核表达载体对乙脑病毒包膜蛋白进行可溶性表达和纯化。方法筛选不同的表达载体、宿主菌株、表达条件，以获得可溶性的目的蛋白表达。采用镍柱和凝胶过滤层析对表达蛋白进行纯化。结果对不同的载体、菌株、表达条件筛选后，最终发现PBCX载体与乙脑病毒包膜蛋白E406基因连接后的质粒，在低温诱导后获得可溶性E蛋白表达，且表达量较高。表达量占可溶性蛋白总量的23％。通过镍柱和凝胶过滤层析纯化后，目的蛋白纯度较高，达85％，满足试验需求。结论本研究获得了可溶性表达的乙脑病毒E蛋白，方法简单高效，为深入研究该蛋白生物学特性和功能，解析乙脑病毒的致病机制、乙脑减毒活疫苗毒株的减毒机制及其质量控制，乙脑诊断试剂开发，奠定了技术基础。

关键词：乙脑病毒包膜蛋白可溶性表达纯化

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基于假病毒的高通量人类免疫缺陷病毒表型耐药性检测方法的建立和优化

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第12期34卷 941-949页

作者：聂建辉许四宏宋爱京赵娟陈晴晴马建黄维金王佑春吉林大学生命科学学院长春130012 中国食品药品检定研究院艾滋病性病病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立一种高通量人类免疫缺陷病毒表型耐药性检测方法。方法通过酶切连接方式失活荧光素酶基因，用LacZ基因替代原有的蛋白酶和逆转录酶基因。通过PCR方法从含耐药基因的pSG3△env质粒中扩增pol基因，用infusion定向克隆技术连接... 详细信息

目的：建立一种高通量人类免疫缺陷病毒表型耐药性检测方法。方法通过酶切连接方式失活荧光素酶基因，用LacZ基因替代原有的蛋白酶和逆转录酶基因。通过PCR方法从含耐药基因的pSG3△env质粒中扩增pol基因，用infusion定向克隆技术连接入酶切后的***，对该表型耐药性检测方法的主要影响因素进行优化。结果构建了用于高通量耐药性检测的***，确定了检测方法中细胞加入量为10000细胞/孔（96孔板），病毒加入量为200 TCID 50/孔，DEAE-dextran的最佳工作浓度为15μg/ml。用12种抗病毒药物检测两种假病毒8次，确定方法具有良好的重复性（CV值在4.32％～28.46％之间）。构建了6种不同的假病毒与基于pSG3△env的耐药性检测方法进行比较，两者之间具有良好的一致性。结论基于***的表型耐药性检测方法结合了pSG3△env和pNL4-3检测系统的优点，能高通量评价HIV病毒对药物的耐受性，可用于感染者耐药性分析和抗病毒药物的筛选。

关键词：人类免疫缺陷病毒耐药性表型检测

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B型流感病毒血凝素的纯化

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 409-411页

作者：徐康维黄金凤许凯李娟邵铭刘书珍王军志李长贵中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京科兴生物制品有限公司研发部北京100085

目的纯化B型流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）。方法使用不同浓度的菠萝蛋白酶酶切B型流感病毒HA，超速离心获得含HA的上清后，经蔗糖密度梯度离心进行纯化，HPLC分子筛分析纯化效果。纯化后的蛋白经糖苷酶PNGaseF处理后，切取丰度... 详细信息

目的纯化B型流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）。方法使用不同浓度的菠萝蛋白酶酶切B型流感病毒HA，超速离心获得含HA的上清后，经蔗糖密度梯度离心进行纯化，HPLC分子筛分析纯化效果。纯化后的蛋白经糖苷酶PNGaseF处理后，切取丰度较高的蛋白条带，进行质谱鉴定。结果病毒蛋白与菠萝蛋白酶蛋白含量的最佳比例为40：1；5％-30％梯度浓度的蔗糖能很好地去除低相对分子质量的蛋白，流感病毒内丰度较高的NP及M蛋白得到很好的去除；纯化的HA蛋白的纯度大于90％，且HPLC分析显示仅有1个主峰，均一性良好。结论优化了B型流感病毒HA蔗糖密度梯度离心纯化方法，获得了高纯度的HA蛋白，为制备HA标准抗血清奠定了基础。

关键词：流感病毒血凝素纯化

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狂犬病病毒CTN-1V株糖蛋白遗传稳定性研究分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第4期33卷 265-269页

作者：李加曹守春石磊泰王云鹏吴小红刘景华唐建蓉俞永新董关木中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的测定6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，并研究其致病力稳定性。方法RT-PCR方法扩增6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，分别将产物克隆入pGEM-T载体中，测定并拼接序列，应用DNAStar和Mega4．0软件包中的相应软件对基因组序列... 详细信息

目的测定6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，并研究其致病力稳定性。方法RT-PCR方法扩增6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列，分别将产物克隆入pGEM-T载体中，测定并拼接序列，应用DNAStar和Mega4．0软件包中的相应软件对基因组序列进行分析，并与近期我国分离且具有地域代表性的狂犬病病毒街毒株进行基因同源性分析；测定6代次CTN-1V株病毒滴度（LD卯／m1）和细胞荧光滴度（FFU／m1），采用FFU／LD∞指标来对病毒的毒力进行评价。结果6代次CTN-1V株病毒序列测定结果表明，仅第1222位的G突变为A，导致408位氨基酸由谷氨酸突变为赖氨酸，而1320位核苷酸由A突变为G，但显示为无义突变；5代次CTN-1V株病毒致病力指标均在1．00～1．07之间；糖蛋白生物信息学分析表明，CTN-1V株病毒与我国近期分离的街毒株均具有较高同源性。结论CTN-1V株病毒糖蛋白传代稳定，且与我国近期分离的街毒株高度同源，各代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列的测定及致病力研究，为完善该毒株的质量控制提供数据支持。

关键词：狂犬病病毒 CTN-1V 糖蛋白致病力生物信息学分析

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狂犬病病毒aG株糖蛋白遗传稳定性及生物信息学分析

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中国生物制品学杂志 2013年第6期26卷 760-765,770页

目的研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)aG株糖蛋白(glycoprotein,GP)的遗传稳定性,并对GP基因组进行序列测定及生物信息学分析。方法采用RT-PCR法扩增6代次aG株RV(4aGV4、4aGV5、4aGV7、4aGV11、4a-GV15、4aGV18)G区基因,分别将产物克隆入pGEM-T载体中,测定序列并进行拼接;测定6代次aG株RV的滴度、荧光滴度和毒力;应用DNAStar和Mega4.0软件包中的相应软件对基因组序列进行分析,并与我国近期分离且具有地域代表性的RV街毒株进行基因同源性分析。结果 6代次aG株RV GP基因保持高度稳定,未出现核苷酸突变位点;6代次aG株RV的滴度有所不同,但其毒力指标基本一致;RV aG株与我国街毒流行株GP抗原区具有较高的同源性,且膜外区同源性远高于跨膜区及膜内区;aG株RV第147位关键位点氨基酸与街毒流行株该位点不同,其余各关键抗原位点在各毒株间均高度同源;6代次aG株RV关键毒力位点均未出现氨基酸突变,传代稳定,aG株RV与各街毒流行株关键毒力位点均高度同源;aG株病毒信号肽结构与我国多株流行株高度同源,而其GP则与法国巴斯德原株PV2061株及分离自美国的HEP-Flury株高度同源,与我国流行街毒株亦具有较高的同源性。结论 RV aG株GP遗传稳定,且与我国近期分离的街毒株高度同源,本研究为完善该毒株的质量控制及全面评价其在我国的适用性提供了实验依据。

关键词：狂犬病病毒 aG株糖蛋白遗传稳定性生物信息学

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我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究

我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究

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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：陈柠俞永新贾丽丽徐宏山刘欣玉王志伟岳广智杨立宏董关木李玉华中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

【目的】对两株登革4型病毒减毒株(Ban18HK20和Ban18HK30)的部分生物学特性进行研究,同时测定其全基因组序列并与母株(Ban18)序列比较,分析与毒力相关的位点。【方法】将两株减毒株及其母株在Vero细胞传代后进行空斑形态、毒力和免疫原... 详细信息

【目的】对两株登革4型病毒减毒株(Ban18HK20和Ban18HK30)的部分生物学特性进行研究,同时测定其全基因组序列并与母株(Ban18)序列比较,分析与毒力相关的位点。【方法】将两株减毒株及其母株在Vero细胞传代后进行空斑形态、毒力和免疫原性的比较研究;提取上述三株病毒的基因组RNA,RT-PCR方法分段扩增其全基因组序列并测序,采用DNAStar软件包进行序列比对分析。【结果】Ban18HK20株和Ban18HK30株在Vero细胞上形成的空斑形态较其母株稍大且模糊。两株减毒株对9～11g小鼠的脑内lg(PFU/LD50)均>4.5,而Ban18株的lg(PFU/LD50)为0.4,二者对2～4日龄乳鼠的致病力也明显低于其母株Ban18株。将三株病毒稀释到106PFU/mL腹腔免疫小鼠,两周后用登革4型国际标准株H241株进行脑内攻击,结果表明Ban18株和Ban18HK20株对H241脑内攻击的保护指数约为100,而Ban18HK30株对H241的脑内攻击基本没有保护作用。比较Ban18株及其减毒株的全基因组序列,结果表明Ban18株和Ban18HK20株有8处核苷酸差异,其中3处引起氨基酸变化,C111、E155、E369和3’UTR219四个位点可能与毒力密切相关。【结论】Ban18HK20和Ban18HK30毒力明显低于其母株,其中Ban18HK20免疫原性较好,是一株有希望的登革4型病毒疫苗候选株;全基因组序列比对结果表明C111、E155、E369和3’UTR219可能与毒力密切相关。

关键词：登革4型病毒减毒株毒力免疫原性毒力位点

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乙脑减毒活疫苗毒株SA14-14-2减毒机理的研究

乙脑减毒活疫苗毒株SA14-14-2减毒机理的研究

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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：付茵刘欣玉俞永新李玉华中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

流行性乙型脑炎是由流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus)引起的严重中枢神经系统疾病,由蚊虫传播,主要流行于东亚和东南亚各国,近年来其流行分布范围有不断扩大的趋势。其感染后死亡率高,预后患者会留下不同程序的后遗症,... 详细信息

流行性乙型脑炎是由流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus)引起的严重中枢神经系统疾病,由蚊虫传播,主要流行于东亚和东南亚各国,近年来其流行分布范围有不断扩大的趋势。其感染后死亡率高,预后患者会留下不同程序的后遗症,目前尚无特效的治疗方法,对蚊虫的传播控制和对易感人群的免疫接种是现阶段的主要控制手段。目前使用的乙脑疫苗有灭活疫苗和减毒活疫苗两种。我国的乙脑减毒活疫苗株SA14-14-2株的使用对于控制流行性乙型脑炎

关键词：乙脑减毒活疫苗 SA14-14-2 野毒株

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钴60-γ射线辐照法对骨腊中指示病毒的灭活效果验证研究

钴60-γ射线辐照法对骨腊中指示病毒的灭活效果验证研究

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2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：岳广智杨立宏徐宏山刘欣玉董关木贾丽丽中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的研究和验证钴60-γ射线辐照对骨蜡中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法将固体骨蜡制成腔壁0.7cm厚的空心圆柱体的辐照用样品,空腔中分别加入经预先精确测定滴度辛德毕氏病毒(Sindbis)、脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EM... 详细信息

目的研究和验证钴60-γ射线辐照对骨蜡中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法将固体骨蜡制成腔壁0.7cm厚的空心圆柱体的辐照用样品,空腔中分别加入经预先精确测定滴度辛德毕氏病毒(Sindbis)、脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)和猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV);分别经5、10、15、20及25kGy不同剂量的钴60-γ射线进行辐照后,取出样品腔中的病毒液,采用噬斑形成法检测Sindbis病毒的滴度;采用微量半数细胞病变法检测PPV和EMCV病毒的滴度,验证钴60-γ射线辐照对3种病毒的灭活效果。结果经5～25kGy钴60-γ射线辐照处理,3种病毒的滴度随着辐照剂量的增加而下降,辐照剂量升至25kGy时,可灭活Sindbis病毒、EMCV及PPV的量分别达6.03.60LgPFU/ml、6.25.32Lg TCID50/0.1ml和4.75.88LgTCID50/0.1ml以上。结论 25kGy的钴60-γ射线对骨蜡中的包膜病毒和无包膜病毒均有较好的灭活效果。

关键词：钴60-γ射线骨蜡Sindbis病毒脑心肌炎病毒猪细小病毒病毒灭活

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钴60-γ射线辐照法对骨腊中指示病毒的灭活效果验证研究

钴60-γ射线辐照法对骨腊中指示病毒的灭活效果验证研究

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2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会

作者：岳广智杨立宏徐宏山刘欣玉董关木贾丽丽中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:研究和验证钴60-γ射线辐照对骨蜡中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法:将固体骨蜡制成腔壁0.7cm厚的空心圆柱体的辐照用样品,空腔中分别加入经预先精确测定滴度辛德毕氏病毒(Smd-bis )、脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,... 详细信息

目的:研究和验证钴60-γ射线辐照对骨蜡中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法:将固体骨蜡制成腔壁0.7cm厚的空心圆柱体的辐照用样品,空腔中分别加入经预先精确测定滴度辛德毕氏病毒(Smd-bis )、脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus, EMCV)和猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV);分别经5,10,15,20及25kGy不同剂量的钴60-γ射线进行辐照后,取出样品腔中的病毒液,采用噬斑形成法检测Sind-bis病毒的滴度;采用微量半数细胞病变法检测PPV和EMCV病毒的滴度,验证钴60-γ射线辐照对3种病毒的灭活效果。结果:经5～25 kGy钴60-γ射线辐照处理,3种病毒的滴度随着辐照剂量的增加而下降,辐照剂量升至25 kGy时,可灭活Sindbis病毒、EMCV及PPV的量分别达6.03～6.60LgPFU/ml、6.25～6.32LgTCID50/0.1ml和4.75～4.88LgTCHR50/0.1ml以上。结论:25kGy的钴60-γ射线对骨蜡中的包膜病毒和无包膜病毒均有较好的灭活效果。

关键词：骨腊产品钴60-γ射线辐照法病毒污染灭活效果

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