检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2022年第7期17卷 784-789页

作者：孙淑玥王珊珊崔生辉徐颖华卢雪梅广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006 中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的分析不同来源粪肠球菌全基因组特征及其分子进化规律。方法对收集的不同来源粪肠球菌进行全基因组序列测序,利用比较基因组学分析粪肠球菌的基因特征、耐药基因和毒力基因携带情况,并以此进行泛基因组和核心基因组分析,构建系统发育... 详细信息

目的分析不同来源粪肠球菌全基因组特征及其分子进化规律。方法对收集的不同来源粪肠球菌进行全基因组序列测序,利用比较基因组学分析粪肠球菌的基因特征、耐药基因和毒力基因携带情况,并以此进行泛基因组和核心基因组分析,构建系统发育树,进行系统进化分析。结果6株不同来源粪肠球菌染色体全基因组序列全长为2450754~2731452 bp,共含有2669~3085个基因,基因组的平均GC含量为38.0%。粪肠球菌具有开放型泛基因组,而核心基因组为稳定型。不同来源菌株基因组中均含有3~14种耐药基因和8~17种毒力基因。基于核心基因系统进化树分析显示,不同来源的粪肠球菌分子进化均匀分布,相互重叠,无明显聚类趋势。结论粪肠球菌具有开放型泛基因组,其核心基因为稳定型,不同来源分离菌株进化均匀分布,这些结果为后续揭示粪肠球菌分子遗传进化规律等研究奠定了基础。

关键词：粪肠球菌全基因组测序系统发育分析比较基因组学

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Vero细胞DNA工作参考品的建立及稳定性研究

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微生物学免疫学进展 2025年第2期53卷 35-41页

作者：肖瑶李娟娟王云鹏刘艳彭小欢李榆杨申瑷琳季雅琦施金荣曹守春武汉生物制品研究所有限责任公司质量控制室国家联合疫苗工程技术研究中心湖北武汉430207 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗宿主Vero细胞DNA工作参考品,用于口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗宿主Vero细胞DNA残留量检测(荧光染色法),并对该工作参考品的稳定性进行研究。方法提取Vero细胞全基因组DNA,利用微量紫外分光光... 详细信息

目的建立口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗宿主Vero细胞DNA工作参考品,用于口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗宿主Vero细胞DNA残留量检测(荧光染色法),并对该工作参考品的稳定性进行研究。方法提取Vero细胞全基因组DNA,利用微量紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳对工作参考品的纯度进行考察,制备并分装该DNA工作参考品后,采用荧光染色法对其DNA浓度进行标定并对其稳定性进行考察,同时考察了不同保护剂对Vero细胞DNA工作参考品稳定性的影响。结果Vero细胞DNA工作参考品的标定结果为2.42μg/mL(95%CI:2.31~2.54),在(5±3)℃或(37±2)℃放置28 d或反复冻融5次的稳定性良好(P>0.05)。参考品中加入1%BSA、1%~5%蔗糖或10%~30%甘油作为保护剂,在(37±2)℃储存28 d后DNA浓度无明显变化(CV<7%),纯度保持良好;加入BSA的浓度>3%对DNA检测结果的准确性有影响。结论建立的Vero细胞DNA工作参考品稳定性良好,可以用于口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)DNA残留量的检测。

关键词：轮状病毒 DNA工作参考品 DNA残留量 Vero细胞稳定性减毒疫苗保护剂

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CESI-MS/MS和NanoLC-MS/MS技术对促红细胞生成素中糖肽的分析

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药物分析杂志 2021年第1期41卷 79-88页

作者：张伶俐王文涛赵颖华肖志良罗继刘冰董衍东李响陈泓序重庆市食品药品检验检测研究院重庆401121 SCIEX中国北京100015 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS)和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLCMS/MS)2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比。方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行... 详细信息

目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS)和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLCMS/MS)2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比。方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行酶切,酶切得到的肽段利用CESIMS/MS和NanoLC-MS/MS检测方法进行分离鉴定。CESI-MS/MS分析方法:采用熔融的石英毛细管,以10%醋酸水溶液为背景电解质,在34.5 kPa压力下进样60 s,分离电压为30 kV,同时施加正向压力6.9kPa;离子源温度为50℃,喷雾电压为1650 V,MS扫描范围为m/z 350~1250,MS/MS扫描范围为m/z 100~1500。NanoLC-MS/MS分析方法:采用YMC C_(18)色谱柱,以含0.1%甲酸的水溶液(A)-含0.1%甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速5μL·min^(-1);离子源温度300℃,喷雾电压为+5500 V,MS扫描范围为m/z 350~1250,MS/MS扫描范围为m/z 100~1500。将采集到的质谱数据导入到软件BiopharmaView^(TM)3.0中进行搜库检索,对糖肽进行鉴定。结果:采用CESI-MS/MS方法可以单独鉴定到32条糖肽,采用NanoLC-MS/MS方法可以单独鉴定到40条糖肽;通过2种方法可以共鉴定到84条糖肽,共涉及56种糖型。对比2种方法的结果,发现对于EPO糖肽的分析,CESI-MS/MS方法可以鉴定到更多的含唾液酸的糖肽,并表现了更优异的分离效果。此外,CESI-MS/MS方法鉴定出的糖肽分子量范围更宽,可以有效分析NanoLC-MS/MS方法中未鉴定到的高分子量糖肽。结论:在糖蛋白的分析中,通过糖肽水平的分离和鉴定,可以获得糖基位点和糖基序列的信息。CESI-MS/MS方法和NanoLC-MS/MS方法提供了互补的分析结果,其联合使用可鉴定出更多种类的糖肽,为糖蛋白的研究中糖肽水平的分析提供了更全面的解决方案。

关键词：促红细胞生成素糖肽糖蛋白激素糖基化修饰无鞘液毛细管电泳-质谱联用纳升液相色谱-质谱联用

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金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品的研制

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食品安全质量检测学报 2021年第20期12卷 8251-8257页

作者：陈驰梁丽王春娥石继春龙新星刘茹凤黄洋李康徐潇李江姣徐颖华叶强中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的研制金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品。方法将10株金黄色葡萄球菌和10株阴性对照代表性菌株分别在适宜条件下复苏培养,制备合适浓度的菌悬液,并加热灭活和分装。随机抽样不同候选参考品样品10支进行均匀性分析,并将样品... 详细信息

目的研制金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品。方法将10株金黄色葡萄球菌和10株阴性对照代表性菌株分别在适宜条件下复苏培养,制备合适浓度的菌悬液,并加热灭活和分装。随机抽样不同候选参考品样品10支进行均匀性分析,并将样品分别置于2~8、25、37℃条件下保藏以及反复冻融,评价标准物质的稳定性。同时对候选参考品的准确性、特异性、重复性、最低检出限进行分析,并组织8家实验室进行协作标定。结果制备了由阳性、阴性、重复性和最低检出限样品组成的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用候选参考品。不同候选参考品不同样品间的Ct值的变异系数在1.23%~3.86%之间,表明制备候选参考品均匀性良好。同时证实P1~10阳性和最低检出限候选参考品样品在反复冻融及加速破坏条件下稳定性良好。应用3个不同厂家生产试剂盒进行重复性验证实验显示,样本的Ct值均小于5.0%,表明候选参考品的重复性良好。除P6阳性候选参考品样品不能被部分试剂盒检出,其余阳性参考品样品均能成功检测、最低检出限为1.0×10^(3)个/m L。协作标定结果进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论研制的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品已获得批准,可用于金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒的质量控制和评价。

关键词：金黄色葡萄球菌核酸国家参考品均匀性稳定性

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重组白介素-15融合蛋白成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析

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中国药学杂志 2020年第9期55卷 745-754页

作者：史新昌李响于雷郭莹李永红裴德宁饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的通过对成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析探讨重组白介素-15融合蛋白糖链类型和构成比例。方法通过建立相应的数学模型,分析重组白介素-15融合蛋白的等电聚焦电泳检测谱图、去唾液酸等电聚焦电泳检测谱图和去N糖链等电聚焦电泳检测谱... 详细信息

目的通过对成像毛细管等电聚焦电泳谱图分析探讨重组白介素-15融合蛋白糖链类型和构成比例。方法通过建立相应的数学模型,分析重组白介素-15融合蛋白的等电聚焦电泳检测谱图、去唾液酸等电聚焦电泳检测谱图和去N糖链等电聚焦电泳检测谱图,并根据各峰面积和等电点的相互关系,用最小二乘法进行组成拟合分析,明确峰面积和等电点分布相互关系。结果确认间隔1个峰模型的合理性,并根据该模型获得一系列基础相关数据,包括该蛋白的表观m值25.53个基准(R);该蛋白的表观n值28.83R;唾液酸的表观m值0.86(0.855)R,表观n值0.12(0.119)R;N乙酰氨基葡萄糖(未区分与N乙酰半乳糖胺的不同)表观n值0.06(0.061)R;去N糖链后形成的羧基表观m值0.19(0.186)R。该蛋白质糖构成的相关信息,包括唾液酸化度为;摩尔比约1.83;蛋白原型占比约8.3%、含N糖链单修饰占比约19.8%、含N糖链双修饰约28.4%、含N糖链三修饰占比约23.7%;带唾液酸O糖链修饰占比19.8%;主要糖型为G0(海藻糖F)、G1(F)、G2(F)、G1A1(F)和G2A1(F)。结论糖链的结构复杂,但也有一定重复性和规律性,希望通过本实验的研究,可以快速勾勒出糖蛋白糖链轮廓,增进对糖蛋白认识和对蛋白相互作用的研究。

关键词：成像毛细管等电聚焦电泳重组IL-15 融和蛋白等电点异质性等电点异构体 N-糖基化修饰 O-糖基化修饰唾液酸

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定量~1H-NMR法测定6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量

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中国新药杂志 2020年第21期29卷 2481-2485页

作者：许美凤陈琼李茂光王春娥叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:建立一种测定6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量的定量核磁共振氢谱(~1H-NMR)法。方法:以二甲基砜为内标物采用Bruker Avance-600型核磁共振波谱仪,设置检测条件,建立定量~1H-NMR法用于供试品溶液的测定。结果:获得... 详细信息

目的:建立一种测定6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量的定量核磁共振氢谱(~1H-NMR)法。方法:以二甲基砜为内标物采用Bruker Avance-600型核磁共振波谱仪,设置检测条件,建立定量~1H-NMR法用于供试品溶液的测定。结果:获得各型多糖的~1H-NMR谱图,确定用于定量的特征峰。通过比较各型多糖特征峰的峰面积与内标物特征峰的峰面积,计算得到6B,10A,17F,19A,19F及20型肺炎链球菌荚膜多糖含量依次为92.57%,88.56%,84.95%,82.92%,83.98%和85.80%,计算各组数据的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)值依次为0.29%,0.47%,0.48%,0.13%,0.38%和0.22%。结论:本研究建立的测定肺炎链球菌荚膜多糖含量的定量~1H-NMR法,从样品制备到采样参数设置以及数据处理,操作简单,可行性高,重复性好,更能够满足检定工作的需求,可作为肺炎球菌荚膜多糖质量控制的一种合理、有效的技术手段。

关键词：肺炎链球菌多糖含量定量核磁共振氢谱法核磁共振波谱法二甲基砜

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细菌外膜囊泡作为疫苗候选成分研究进展

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中国新药杂志 2020年第24期29卷 2789-2793页

作者：王珊珊李亚南徐颖华叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的免疫原性强,在体外不复制增殖,且可将其他候选抗原包载,使其表达在OMVs表面,提高抗原递呈效率的特性。本文就近些年细菌OMVs制备与修饰、诱导免疫应答以及疫苗应用的研究进展进行综述,以... 详细信息

细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的免疫原性强,在体外不复制增殖,且可将其他候选抗原包载,使其表达在OMVs表面,提高抗原递呈效率的特性。本文就近些年细菌OMVs制备与修饰、诱导免疫应答以及疫苗应用的研究进展进行综述,以期为进一步了解细菌OMVs的特性及其未来应用前景提供参考。

关键词：细菌外膜囊泡免疫反应疫苗质量控制

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液质联用分析重组人尿激酶原的糖基修饰异质性

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药学学报 2020年第11期55卷 2713-2718页

作者：陶磊于雷丁有学毕华饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

应用超高效液相色谱-质谱联用技术,对重组人尿激酶原的糖基修饰异质性进行了分析鉴定。首先通过测定切除N-糖基前、后完整蛋白的相对分子质量,确定异质性的来源;然后在肽段水平鉴定糖基化位点并确定不同O-糖肽的比例;最后通过绘制N-糖图... 详细信息

应用超高效液相色谱-质谱联用技术,对重组人尿激酶原的糖基修饰异质性进行了分析鉴定。首先通过测定切除N-糖基前、后完整蛋白的相对分子质量,确定异质性的来源;然后在肽段水平鉴定糖基化位点并确定不同O-糖肽的比例;最后通过绘制N-糖图谱,对N-糖基进行定性定量分析。结果显示,该蛋白的异质性主要由糖基化修饰造成。T18全部发生岩藻糖化;6.4%的S138/139发生O-糖基化,糖型主要有2种,比例分别为6.0%和0.4%;N302全部发生N-糖基化,糖型有十多种,以A2F和A3F最多,二者约占总比例的80%。本文对该制品糖基修饰异质性的分析可为其质量标准的提高提供数据参考。

关键词：液质联用重组蛋白尿激酶原糖基化异质性

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人胚胎干细胞诱导分化的肝样细胞质量评价研究

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中国新药杂志 2021年第4期30卷 320-332页

作者：纳涛孙懿吴婷婷欧阳琦卢光琇林戈袁宝珠中国食品药品检定研究院细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室人类干细胞国家工程研究中心湖南光琇高新生命科技有限公司

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞... 详细信息

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,h ESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞。为满足临床应用研究的需要,hESC-HLCs需具备明确的基本生物学属性、微生物学安全性、生物学安全性及生物学有效性的总体质量要求,其中每一类质量要求是由多个关键质量属性所组成。hESC-HLCs的整个制备过程是从人胚胎干细胞(hESCs)向hESC-HLCs的全分化过程,可基本分为4个阶段,各阶段在细胞形态、标志基因/蛋白的表达、生物学功能等方面均有明显的特征。本文就h ESC-HLCs总体质量要求及各质量属性进行讨论,目的是在我国建立临床研究用hESC-HLCs质量评价方法和评价策略。

关键词：胚胎干细胞肝样细胞质量属性质量评价阶段性诱导分化

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人重组沙眼衣原体疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2022年第7期35卷 874-878页

作者：尹晨亮张庶民(综述) 徐颖华倪现朴(审校) 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110000 北京成大天和生物科技有限公司北京102600 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是一种革兰阴性、专性细胞内寄生的原核细胞型微生物,是引起性传播感染(sexually transmitted infection,STI)的重要病原体,可导致眼部、生殖道等多个系统疾病。疫苗是预防和控制CT感染最有效、最... 详细信息

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是一种革兰阴性、专性细胞内寄生的原核细胞型微生物,是引起性传播感染(sexually transmitted infection,STI)的重要病原体,可导致眼部、生殖道等多个系统疾病。疫苗是预防和控制CT感染最有效、最经济的方法,可实现对易感人群的长期保护,减少传播并抑制继发性感染。随着生物学技术的发展和抗CT感染免疫保护机制研究的深入,已发现一些具有潜在免疫保护性候选抗原蛋白,其中重组CT疫苗CTH522已进入Ⅰ期临床试验,并取得突破性进展。本文就近年对CT特异性免疫反应、重组疫苗候选抗原临床前研究和临床试验的研究进展及面临的挑战作一综述,以期为我国新CT疫苗的研发提供参考。

关键词：沙眼衣原体重组疫苗候选抗原佐剂动物模型

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