检索结果-内蒙古大学图书馆

中国新药杂志 2023年第8期32卷 853-857页

作者：安怡方史新昌于雷李响周勇中国食品药品检定研究院/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:利用人促红素cIEF-MS检测结果，解析其糖链单糖组成。方法:经cIEF检测后获得cIEF峰，并对每个峰进行了MS检测，得到每个峰的高分辨质谱分子量，扣除蛋白分子量后，将分子量差值与单糖残基分子量组合数据库进行比对(精度约0.01%),... 详细信息

目的:利用人促红素cIEF-MS检测结果，解析其糖链单糖组成。方法:经cIEF检测后获得cIEF峰，并对每个峰进行了MS检测，得到每个峰的高分辨质谱分子量，扣除蛋白分子量后，将分子量差值与单糖残基分子量组合数据库进行比对(精度约0.01%),获得一系列质量数基本相符的单糖组合方式，并对单糖数量及单糖之间关系合理性进行分析。结果:经cIEF检测后获得10个cIEF峰，MS检测获得不少于32个峰质量数，比较后获得各质量数对应的一系列单糖组合形式，文中只列举了离子数量最高峰P3的组合形式，经有效性分析结果显示其最具有延伸性的组合方式为19个GlcNAc/GlaNAc残基、22个Man/Gla残基、12个Neu5Ac残基和3个Fuc残基。结论:获得人促红素蛋白糖链单糖组合方式，为进一步完整蛋白糖型的解析和表征奠定基础。

关键词：毛细管等电聚焦电泳质谱联用人促红素等电点异构体 N-糖基化修饰 O-糖基化修饰单糖残基组合

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

致病性钩端螺旋体分子进化研究进展

引用

疾病监测 2024年第11期39卷 1471-1476页

作者：李彬石刚叶强徐颖华中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

钩端螺旋体病(钩体病)是由致病性钩端螺旋体(钩体)引起的一种人兽共患的自然疫源性疾病。伴随着全球气候的变暖和日益城市化,致病性钩体为适应环境变化自身也持续进行适应性进化和改变。近年来,各种分子分型和组学技术的快速发展,对该... 详细信息

钩端螺旋体病(钩体病)是由致病性钩端螺旋体(钩体)引起的一种人兽共患的自然疫源性疾病。伴随着全球气候的变暖和日益城市化,致病性钩体为适应环境变化自身也持续进行适应性进化和改变。近年来,各种分子分型和组学技术的快速发展,对该病原体基因遗传多样性、分子进化和致病机制有了更深入认识。本研究通过总结和梳理当前钩体病的流行趋势及病原体分子分型方法,并详细综述其致病性分子进化及其机制最新研究进展,为后续钩体的分子流行病监测和新疫苗研发等工作提供借鉴和参考。

关键词：钩端螺旋体致病性分子进化基因组学蛋白质组学毒力蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

rAAV5基因组滴度测定的数字PCR方法研究

引用

药物分析杂志 2023年第11期43卷 1826-1832页

作者：郑红梅秦玺李永红于雷毕华饶春明朱留强杨靖清史新昌周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立并验证重组5型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 5,rAAV5)基因组滴度测定的数字PCR方法,并对微滴数字PCR方法和芯片数字PCR方法进行比较。方法:分别用不同浓度的SDS和EDTA前处理r AAV5样品,用微滴数字PCR... 详细信息

目的:建立并验证重组5型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 5,rAAV5)基因组滴度测定的数字PCR方法,并对微滴数字PCR方法和芯片数字PCR方法进行比较。方法:分别用不同浓度的SDS和EDTA前处理r AAV5样品,用微滴数字PCR测其基因组滴度,对病毒样品前处理试剂进行优化;在其他试验条件不变的情况下,分别设置微滴数字PCR的退火温度为60、58、54、52℃,以WPRE引物扩增,比较扩增效果,对数字PCR的退火温度进行优化;分别采用微滴数字PCR和芯片数字PCR测定rAAV5的基因组滴度并比较。结果:终浓度为1%SDS和62.5 mmol·L^(-1)EDTA按1∶1(v/v)的比例混合后前处理rAAV5,测定的基因组拷贝数较高,前处理液裂解效果较好;当退火温度为54℃时,微滴数字PCR中阳性微滴和阴性微滴分离效果最好,扩增特异性最强;2种测定结果的试验室内精密度和回收率接近,测定同一裂解样本的结果较为接近(在1个数量级)。结论:初步建立了数字PCR方法并验证,为后续的进一步验证奠定基础。

关键词：重组5型腺相关病毒基因组滴度微滴数字PCR 芯片数字PCR 基因治疗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基因治疗产品质量控制策略及面临挑战

引用

中国新药杂志 2022年第21期31卷 2090-2100页

作者：于雷史新昌秦玺王光裕李响周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

近年来基因疗法进入快速发展阶段，越来越多的产品进入临床研究阶段或获批上市，适应证涉及遗传病、恶性肿瘤、心血管疾病、感染性疾病等。体内基因治疗产品是指在体内通过对人体细胞的遗传物质进行修饰、表达外源基因、操纵细胞基因表... 详细信息

近年来基因疗法进入快速发展阶段，越来越多的产品进入临床研究阶段或获批上市，适应证涉及遗传病、恶性肿瘤、心血管疾病、感染性疾病等。体内基因治疗产品是指在体内通过对人体细胞的遗传物质进行修饰、表达外源基因、操纵细胞基因表达或调控细胞生物学特性等方式达到治疗疾病目的的药品，其结构、功能及生产工艺较传统蛋白类药物更加复杂，潜在的安全性风险更高，如病毒安全性和遗传毒性。因此，质量控制工作面临更多挑战。本文基于体内基因治疗产品的研发、生产和质量控制现状以及相关法规、技术指南，探讨了基于“质量源于设计”理念的质量控制策略以及目前生产和质量控制面临的挑战和解决方案，为相关产品的质量控制提供参考。

关键词：体内基因治疗质量源于设计质量风险评估生产工艺质量控制

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

CGE-LIF方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白的比例含量

引用

药物分析杂志 2023年第11期43卷 1833-1839页

作者：李响高铁史新昌陈泓序唐红梅秦玺周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 SCIEX中国北京100015

目的:建立毛细管凝胶电泳串联激光诱导荧光检测器(CGE-LIF)方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3比例含量并进行方法学验证。方法:CGE-LIF分析rAAV衣壳蛋白方法为:rAAV样品加入4%SDS-150 mmol·L^(-1)NEM的溶液预变性... 详细信息

目的:建立毛细管凝胶电泳串联激光诱导荧光检测器(CGE-LIF)方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3比例含量并进行方法学验证。方法:CGE-LIF分析rAAV衣壳蛋白方法为:rAAV样品加入4%SDS-150 mmol·L^(-1)NEM的溶液预变性(70℃,5 min);再加入P503染料标记(70℃,10 min);再加入1%SDS进行变性(70℃,5 min),然后混匀上机检测。方法验证包括准确性、精密度、线性、检测限、定量限,耐用性等。另外考察了P503、TAMRA、FQ 3种染料条件及rAAV不同血清型和部分批间一致性。结果:CGE-LIF分析不同血清型rAAV(包括2、5、8、9、10型)可将其衣壳蛋白VP1、VP2和VP3基线分离并且峰形尖锐。准确性显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的实测结果与预期结果的相关系数r>0.99;重复性结果显示每个衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比的RSD均<5%;中间精密度结果显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比RSD均<5%;线性结果显示在0.6×10^(12)~3.0×10^(12)vg·mL^(-1)范围内与衣壳蛋白校正峰面积线性关系良好;VP3检测限和定量限分别为7.2×10^(10)vg·mL^(-1)和2.2×10^(11)vg·mL^(-1)。用3种不同染料(P503、FQ和TAMRA)进行CGE-LIF检测,结果良好。该方法的批间稳定结果较为理想。结论:建立了rAAV衣壳蛋白CGE-LIF分析方法,所建方法可以对rAAV产品3种衣壳蛋白进行分离和相对定量。

关键词：毛细管凝胶电泳重组腺相关病毒(rAAV) 衣壳蛋白 LIF检测器比例含量

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人粒细胞刺激因子生物学活性协标品均匀度分析

引用

中国新药杂志 2022年第9期31卷 850-853页

作者：朱留强刘兰于雷丁有学史新昌周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:分析人粒细胞刺激因子生物学活性协作标定样品（以下简称协标品）均匀度。方法:利用协标品协作标定数据中同一次实验中A组和B组配对数据差值估算协标品引入的不确定度，进而估算协标品的均匀度；以数据两两间差值的标准差和协标品... 详细信息

目的:分析人粒细胞刺激因子生物学活性协作标定样品（以下简称协标品）均匀度。方法:利用协标品协作标定数据中同一次实验中A组和B组配对数据差值估算协标品引入的不确定度，进而估算协标品的均匀度；以数据两两间差值的标准差和协标品引入的不确定度共同估计国际标准品引入的不确定度。结果:协标品的不确定度为0.27×10～6 IU·支-1;扣除实验影响，协标品均匀度约为3%;国际标准品带来的不确定度为0.49×10～6 IU·支-1。结论:探讨生物学活性协标品均匀度分析方法，为其他标准品协作标定提供方案参考，也为该标准品的应用提供数据支持。

关键词：人粒细胞刺激因子生物学活性协作标定样品协作标定均匀度不确定度

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

双重数字PCR法评价Luc2P系列报告基因细胞系的稳定性

引用

中国生物制品学杂志 2023年第7期36卷 826-832,838页

作者：于雷王光裕裴德宁安怡方史新昌周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立双重数字PCR(digital PCR,dPCR)法评价Luc2P系列报告基因细胞系(CHO-K1、Hacat、HEK293和UT7)的萤光素酶(luciferase,Luc)基因稳定性。方法提取Luc2P系列报告基因细胞系的基因组DNA,建立一种双重dPCR法,同时检测内参基因RPP3... 详细信息

目的建立双重数字PCR(digital PCR,dPCR)法评价Luc2P系列报告基因细胞系(CHO-K1、Hacat、HEK293和UT7)的萤光素酶(luciferase,Luc)基因稳定性。方法提取Luc2P系列报告基因细胞系的基因组DNA,建立一种双重dPCR法,同时检测内参基因RPP30和目标基因Luc的拷贝数,以Luc相对拷贝数(copies Luc/copy RPP30)为指标评价Luc基因稳定性;参考《中国药典》三部(2020版)相关要求对建立的方法进行专属性、精密性、线性、准确性和耐用性验证,并分析方法的适用性。结果未转染报告基因的原始细胞检测结果均为阴性,而4种报告基因细胞系中均可检测到阳性结果,且dPCR结果中阴性和阳性区可明显区分;以相对拷贝数为指标,采用芯片式dPCR法重复检测8次同一基因组DNA样品以及同一细胞6次独立提取的基因组DNA样品的相对标准偏差(RSD)均小于10%,Luc和RPP30的线性拟合R~2均大于0.99,建立的方法检测5组加标样本的加标回收率在50%~100%之间,且芯片式dPCR和液滴式dPCR检测结果一致。该方法可区分不同细胞克隆的Luc相对拷贝数,检测3个代次(P8、P12、P31)细胞Luc相对拷贝数的结果高度一致。结论建立的双重dPCR法专属性、精密性、线性、准确性、耐用性和适用性良好,可用于Luc2P系列报告基因细胞系的Luc基因稳定性评价。

关键词：报告基因细胞系萤光素酶稳定性双重数字PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组5型腺相关病毒基因组滴度测定用国家标准品的研制

引用

中国生物制品学杂志 2023年第4期36卷 429-433页

作者：郑红梅于雷李永红史新昌安怡方郭莹韩春梅饶春明周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、... 详细信息

目的研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、感染滴度等检定,根据结果稀释、分装,制备成候选标准品;采用热加速试验对候选标准品进行稳定性考察;组织3家实验室,采用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)法对候选标准品进行协作标定。结果候选标准品原液及候选标准品的各项检测指标均符合相关要求;在25、4、-20、-40、-80℃条件下,1、3、4、6个月基因组滴度均无明显下降;经3家实验室协作标定,候选标准品赋值为2.56×10^(12)copies/mL,95%置信区间为2.48×1012~2.64×10^(12)copies/mL。结论研制的rAAV5基因组滴度测定用国家标准品具有良好的稳定性,可用于rAAV5相关产品的质量评价。

关键词：重组5型腺相关病毒微滴式数字PCR 基因组滴度协作标定国家标准品

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

中国脑膜炎球菌疫苗发展现状与挑战

引用

中国公共卫生 2022年第7期38卷 948-951页

作者：徐颖华李亚南叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

接种疫苗是预防流行性脑脊髓膜炎(流脑)最有效、最经济的方法,在过去几十年,随着疫苗的广泛使用,流脑发病率显著下降。目前在中国上市的疫苗主要包括A、C、W、Y群单价和多价多糖脑膜炎球菌疫苗(MPV),A、C群多糖脑膜炎球菌结合疫苗(MPCV-... 详细信息

接种疫苗是预防流行性脑脊髓膜炎(流脑)最有效、最经济的方法,在过去几十年,随着疫苗的广泛使用,流脑发病率显著下降。目前在中国上市的疫苗主要包括A、C、W、Y群单价和多价多糖脑膜炎球菌疫苗(MPV),A、C群多糖脑膜炎球菌结合疫苗(MPCV-AC)以及A、C群脑膜炎球菌多糖结合b型流感嗜血杆菌结合联合疫苗(MPCV-AC-hib)。纵观我国脑膜炎球菌疫苗近50年的发展历程,在疫苗生产、质量控制以及相关研究方面均取得了显著成绩,但仍然面临着流脑疾病负担被低估、脑膜炎球菌疫苗免疫策略尚未完善、不同厂家脑膜炎球菌疫苗免疫程序不统一、无B群脑膜炎球菌疫苗上市等问题和挑战,为此应不断提高流脑监测手段及系统开展流脑疾病负担评价的研究以助力我国脑膜炎球菌疫苗免疫策略和免疫程序的完善,并针对流脑血清群高度可变和易发生抗原漂移的特性通过基因重组等技术研发出免疫力更长、保护效果更好的可预防所有血清群流脑的通用性疫苗。

关键词：流行性脑脊髓膜炎(流脑) 脑膜炎球菌疫苗发展挑战中国

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

应用SEC-UV-MALS-RI技术分析重组腺相关病毒(rAAV)的颗粒滴度和实心率

引用

药物分析杂志 2023年第11期43卷 1840-1846页

作者：李响史新昌王恒韩春梅秦玺周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 美国怀雅特技术公司北京100089

目的:建立分子排阻色谱(SEC)串联紫外检测器(UV)、多角度激光散射检测器(MALS)和示差检测器(RI)的方法分析重组腺相关病毒(rAAV)的颗粒滴度和实心率。方法:对rAAV、rAAV空壳对照品和二者混合样品进行SEC-UV-MALS-RI串联分析,流动相为50 ... 详细信息

目的:建立分子排阻色谱(SEC)串联紫外检测器(UV)、多角度激光散射检测器(MALS)和示差检测器(RI)的方法分析重组腺相关病毒(rAAV)的颗粒滴度和实心率。方法:对rAAV、rAAV空壳对照品和二者混合样品进行SEC-UV-MALS-RI串联分析,流动相为50 mmol·L^(-1)磷酸盐缓冲液,流速为0.3 mL·min^(-1),进样量为50μL,温度为室温,采集时间为30 min;紫外检测器选择260 nm和280 nm双通道;18角度激光散射检测和示差检测采用系统默认设置;用WYATT软件分析结果。结果:样品颗粒滴度为4.816×10^(12)vp·mL^(-1),RSD为0.37%;空壳对照品颗粒滴度为3.199×10^(12)vp·mL^(-1),RSD为0.75%。按不同预设比例混合的5份样品颗粒滴度的RSD均在3%以内,实心率RSD均在4%以内。混合样品的颗粒滴度和实心率测定结果与预期值基本一致。结论:采用SEC-UV-MALS-RI方法可以分析rAAV制品的颗粒滴度、实心率等项目,适用于rAAV制品颗粒滴度和实心率的质量控制。

关键词：分子排阻色谱多角度激光散射重组腺相关病毒滴度实心率聚体含量

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：